Name: 膳食补充剂的口臭犬管理疗效 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-07-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 33 s
Description: 了解使用便携式色谱仪评估膳食补充剂对犬口臭管理效果的方法。该研究通过测量挥发性硫化合物水平，为兽医诊断和潜在的人类应用提供了可靠的实验依据。

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本综述未获得任何基金资助。我们感谢意大利帕多瓦的Sanypet S.p.a. 公司慷慨提供了本研究中使用的膳食补充剂和安慰剂。同时，我们感谢San Patrignano社区的积极参与，该社区提供了全部实验犬只用于本研究。

本临床评估根据欧洲立法（86/609/EU）进行规划，实验方案已获意大利米兰 AIRMO 研究中心动物伦理与福利委员会批准。
1. 犬类与食物选择
<ol>
	<li>将32只患有慢性口臭的不同品种犬（7.01 ± 0.20 年 [平均值 ± 平均值的标准误 (SEM)]；34.05 ± 1.47 kg [平均值 ± SEM]；12只雄性，20只雌性）随机分为两组，分别给予膳食补充剂或安慰剂，持续30天。</li>
	<li>根据每只犬的体重（kg）和生产商的说明，确保其接受适当剂量的膳食补充剂或安慰剂。&#160;（表1）。</li>
	<li>经过30天的治疗后，确保两组均进行为期10天的洗脱期，在此期间所有动物均给予安慰剂。&#160;洗脱期结束后，两组的饲喂方案互换，即原对照组在接下来的30天内接受膳食补充剂，而原治疗组接受安慰剂。</li>
	<li>对两组犬分别在30天治疗前后各进行一次兽医检查。</li>
</ol>
2. 气相色谱仪
注意：气相色谱仪是一种便携式设备，可检测挥发性硫化物（VSC），包括硫化氢、甲硫醇和二甲基硫醚，这些是口臭的主要致病因素，并提供每种检测气体的浓度信息。分别测定每种挥发性硫化物有助于确定口臭的成因并评估治疗效果。
<ol>
	<li>按照第3和第4节所述步骤，在膳食补充剂治疗前（0天）、治疗后10天（10天）、治疗后20天（20天）以及治疗结束时（30天）检测挥发性硫化物（VSC）。</li>
</ol>
3. 气相色谱仪设置
<ol>
	<li>打开设备背面的主电源开关。注意：初始屏幕会显示“MEASUREMENT MODE”。</li>
	<li>按下 ENTER 键以选择测量模式（MEASUREMENT MODE）。 
	注意：屏幕上将显示“WAIT”，并在“COUNTER”一词旁显示测量装置稳定所需的待机时间。待机时间结束后，设备将自动进入可测量状态，且“READY”指示灯亮起。</li>
</ol>
4. 犬类呼吸样本的采集与分析
<ol>
	<li>运行数据管理软件。</li>
	<li>确认“当前状态”显示为“准备测量”后，点击“测量”。</li>
	<li>输入编号并点击“选择”。注意：窗口右上角会显示提示信息。
	<ol>
		<li>若显示信息为“注入口腔气体”，则开始测量。</li>
		<li>若显示信息为“设备正在准备中”，则需等待。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用1&#160;ml一次性注射器，将注射器置于犬的口角处，缓慢拉动活塞采集呼出气体，然后从犬的口腔中取出注射器。</li>
	<li>调整注射器内气体体积至1 ml。</li>
	<li>将配套的针头连接至注射器末端，打开设备盖后，推动活塞将样本注入仪器主机的进样口。 
	注意：测量将自动开始，READY指示灯熄灭。测量过程耗时8分钟，结果将自动显示（可切换为“色谱图”显示）。测量完成后，将弹出“判断”窗口，可查看测量历史记录和测量数据。</li>
	<li>按下ENTER键以将结果保存至设备中。 
	注意：数据以十亿分之一（ppb）和/或纳克/10毫升（ng/10 ml）为单位表示。</li>
	<li>随后等待1分钟使设备稳定，再进行下一次测量。注意：等待结束后，指示灯亮起，表示设备已准备就绪。</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

口臭是犬类常见的问题，作为一种心理社会性问题，会显著影响宠物与主人之间的关系19。口臭来源于口腔内微生物对内外源性蛋白质底物的代谢20，从而产生挥发性硫化物，并可因急性坏死性溃疡性牙龈炎、感染的拔牙创口、牙科器具下方的碎屑、溃疡、扁桃体结石以及口腔卫生不良等其他因素而加重21-23。导致口臭的主要微生物为革兰氏阴性菌24，其数量增加与牙菌斑增厚密切相关25。良好的口腔卫生结合特定饮食可将微生物负荷降低至生理水平，减轻口臭，并预防对呼吸气味产生不良影响的牙龈炎和牙周病26。
我们的研究结果支持这一观点：在连续10天摄入膳食补充剂后，在32只存在中度至重度口臭的犬中，有29只（90%）表现出整体改善；在评估结束时，这29只改善的犬中有19只（65%）在VSC浓度方面达到了稳定的生理状态。
我们的研究探讨了一个非常有趣的问题，即通过引入水解鱼蛋白、鼠尾草等成分，作为一种可能用于治疗犬类口臭的膳食补充剂。 Ribes nigrum L百里香、溶菌酶、蜂胶、生物类黄酮和维生素C纳入日常营养方案。这些在传统医学中广泛应用的化合物，此前已被证实具有有效作用 体外 和 体内
具体而言，选择鱼类蛋白质是基于先前的色谱研究，这些研究指出在牛肉蛋白质中存在大量硫化氢、甲硫醇、乙硫醇、二甲基硫醚和乙烯基硫醚27。文献研究还表明，鼠尾草和Ribes nigrum L. 对Streptococcus mutans具有抗菌活性，后者是已知的口腔致病菌之一（与Porphyromonas gingivalis和Candida albicans一起），可导致口臭及龋齿的形成28-30。黄酮类化合物和维生素C已被确认为具有抗炎和抑菌作用的物质，能够限制与牙周疾病相关的某些细菌的生长31。
关于蜂胶和百里香，Sterer 等32的研究表明，其可减少孵育全唾液中的口臭物质产生。文献中已广泛证实蜂胶具有抑菌作用，其效果涵盖减少菌斑细菌数量33-37、降低微生物对酸性pH的耐受性38，且效果优于葡萄糖酸氯己定溶液39。此外，研究还证明蜂胶在大鼠模型中可有效减少龋齿发生，其机制包括降低微生物数量、抑制不溶性葡聚糖的合成以及葡糖基转移酶的活性40。
本研究存在一些局限性，例如仪器的灵敏度与其他现有技术相比偏低（例如 在氧辅助下形成的粗糙WO3半管纳米结构2 等离子体表面改性结合石墨烯基材料的功能化41，电纺 SnO2 经还原氧化石墨烯纳米片敏化的纳米纤维42，BANA试验（苯甲酰-DL-精氨酸-萘酰胺）43，高效液相色谱法（HPLC）44 固相微萃取-气相色谱/质谱联用（SPME-GC/MS）45另一方面，本研究中使用的设备可能有助于快速收集数据，从而迅速实现乙型病毒性肝炎的早期诊断，该疾病同样以二甲基硫水平升高为特征。46 或建立一种全身性和/或呼吸系统疾病状态（如肺炎、肺气肿和支气管炎），其特征为硫化氢、甲硫醇和二甲基硫醚水平升高47.
在操作过程中，我们发现从犬的口腔收集呼出气体的时间略短于所需时间（与制造商建议的30秒相比，仅有数秒）。通过将每次测量重复三次，成功克服了这一问题。实验中的一个关键步骤是呼出气体的收集。为了在不损坏注射器的情况下避免让犬的口腔长时间张开，我们将注射器置于犬的口角处，以安全地收集呼出气体。
正如在人类中所观察到的那样，该技术的进一步应用将有助于预防犬类乃至更广泛宠物的呼吸相关疾病，即全身性和呼吸道疾病。总之，我们的研究表明，该膳食补充剂在减轻犬慢性口臭方面是有效的。我们的结果也可能与 Porter et al. 提出的观点一致，他们假设口臭与胃肠道之间可能存在相互作用，提示起源于口腔的口臭治疗可能也会影响肠道菌群组成，而肠道菌群在某些情况下已被证实与挥发性硫化物的产生有关48。&#160;然而，大量使用抗生素后也可能导致菌群失调49，或由集约化养殖的肉类引起，这类肉类普遍用于大多数动物和人类食品中50,51。&#160;

口臭，亦称口腔异味，是一种常见主诉，可导致人际社交关系中的尴尬1 与体味一样明显2尽管大多数关于口臭的流行病学数据由于依赖主观的自我评估而在准确性和敏感性上存在局限，但研究报道显示，该病理状况影响了30%至50%的人群3-6一些研究还表明，无论年龄如何，该病在男性中的发病率均高于女性，男女比例为3:1，且在20岁以上人群中这一比例略高。7.
口臭可根据其病因进行分期：1型（口腔源性）、2型（呼吸道源性）、3型（胃食管源性）、4型（血液源性）和5型（主观性）；然而，有假说认为，口臭可能是这些类型以任意组合方式叠加的结果，其基础为健康状态下存在的生理性气味（0型）8,9。Scully et al. 对口臭的病因病理机制及管理方法进行了广泛描述和界定，指出在部分患者中，口臭具有口腔外病因，其中少数患者还涉及代谢异常10。作者强调，挥发性硫化物（VSC）以及一些易感因素，例如 口腔卫生不良、唾液分泌减少、义齿、牙龈及牙周疾病和黏膜疾病，是导致口腔异味的主要原因。此外，他们提出改善口腔健康、抗口臭治疗以及使用口臭中和剂作为基本的传统干预方法。同时，他们还建议使用针对致臭菌的益生菌和疫苗。
人类及其动物伴侣，即猫和狗，可能受到食物相关不良反应的影响，这些反应可累及多个系统，如胃肠道、皮肤、耳部、眼部、泌尿系统和呼吸系统11-13。然而，多项动物研究表明，鼻腔是受累最频繁的系统之一，其中牙石14、牙龈炎15和口臭16尤为常见。此外，引起口臭的细菌可从动物伴侣传播给人类17。Iwanicka-Grzegorek 对84名口臭患者和40名健康对照者的唾液中的硫化物及低分子质量胺类进行了定量分析。在口臭组中，超过80%的患者报告在童年时期曾饲养宠物（P &#60;0.001），超过70%的患者目前仍饲养宠物（P &#60;0.001）。
因此，营养可用于管理口臭。此外，营养在牙齿发育、口腔和牙龈组织完整性、骨骼抗力以及口腔和牙科疾病管理中均发挥着关键作用18基于上述考虑，意大利肿瘤研究协会疾病（AIRMO）中心开展了&#160;一项涉及32只患有口臭犬的随机安慰剂对照交叉临床评估&#160;评估一种膳食补充剂的功效 与 一种市售宠物食品。

<table><tbody><tr><td>OralChroma CHM-1</td><td>FIS Inc.</td><td>10061285</td><td>便携式气体色谱仪</td></tr><tr><td>FORZA10 Oral Active</td><td>SANYpet .Sp.a.</td><td></td><td>膳食补充剂</td></tr><tr><td>InJ/Light-100 PCS</td><td>Rays S.p.a.</td><td>INJ5171112</td><td>一次性注射器&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

治疗犬口臭的一种膳食补充剂的疗效评估

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

口臭是一种常见主诉，涉及人类的社交和沟通问题，同时也影响宠物与主人之间的关系。在此项随机、安慰剂对照、交叉临床评估中，我们评估了&#160;评估一种专用膳食补充剂对32只不同品种和年龄犬只慢性口臭的改善效果。本方案描述了如何评估口腔挥发性硫化物的存在， 例如 通过便携式气相色谱仪设备，结合注射器采集呼出气体，并利用专用软件，在相对较短的时间内（8分钟）监测甲硫醇、硫化氢和二甲硫醚每种化合物在每次测量过程中的浓度。
自治疗开始30天后，口臭参数出现了显著改变（p &#60;0.05），即使在停药20天后仍可观察到持久效果。因此，便携式气相色谱仪——在临床实践中也广泛应用——可用于确认&#160;和控制人类及动物的口臭。尽管人类与动物物种之间存在某些差异，&#160;这种创新且替代性的口臭管理疗法未来或许可拓展至人类临床实践，作为辅助性膳食干预手段。

安慰剂和膳食补充剂均经过调整，以提供相似的营养成分和热量摄入，并特别满足成年犬的营养需求。其分析成分为：粗蛋白26%，粗脂肪13%，粗纤维2.5%，粗灰分8%，代谢能（EM）3464 kcal/kg。代谢能是根据欧洲宠物食品工业联合会（The European Pet Food Industry Federation）发布的猫狗全价和补充性宠物食品营养指南计算得出。安慰剂的成分为脱水鸡肉、大米、动物脂肪、脱水鸡蛋、燕麦、干甜菜粕、亚麻籽、水解动物蛋白、鱼油、植物油、碳酸钙、干啤酒酵母、磷酸一钙、氯化钠。膳食补充剂与安慰剂的区别在于含有特殊心形冷压片剂中的活性物质（欧洲专利号 EP 2526781），该片剂以6-7%的比例添加至全价饲料中，且蛋白质来源为鱼粉而非鸡肉粉。片剂中含有蜂胶（0.0161%）、Salvia officinalis（0.0087%）、卵白蛋白（溶菌酶 0.0078%）、脱水橙皮提取物（黄酮类化合物 0.0077%）、Thymus vulgaris（0.0127%）、Ribes nigrum（0.0040%）。
数据经分析后以均值 ± 均值标准误表示，并采用 D’Agostino-Pearson 正态性检验进行正态性检验。对每种治疗方式在随访期间与基线相比的挥发性硫化物（VSCs）评分变化，采用多次 t 检验进行比较。
图1A显示，经30天治疗后，治疗组动物体内硫化氢浓度显著降低，从基线水平的0.43 ng/ml降至0.06 ng/ml。图1B显示，经30天治疗后，治疗组动物体内甲硫醇浓度显著降低，从基线水平的0.30 ng/ml降至0.06 ng/ml。图1C显示，经30天治疗后，治疗组动物体内二甲基硫醚浓度显著降低，从基线水平的0.28 ng/ml降至0.13 ng/ml。
图2A 显示，经过20天治疗后，硫化氢浓度显著降低，从基线值0.37 ng/ml降至0.10 ng/ml。在图2B中，甲基硫醇也表现出类似趋势，经过30天治疗后，其化合物浓度显著降低，从基线值0.24 ng/ml降至0.05 ng/ml。至于二甲基硫醚，如图2C所示，经过30天治疗后，其化合物浓度也显著降低，从基线值0.32 ng/ml降至0.11 ng/ml。
<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>体重 (Kg)</td>
			<td>每日膳食补充剂用量 (g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 - 10</td>
			<td>30 - 180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11 - 20</td>
			<td>190 - 300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>21 - 35</td>
			<td>310 - 455</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>36 - 50</td>
			<td>465 - 595</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1：每日提供给犬的食物量。
<img alt="Bar graph of H2S, CH3SH, (CH3)2S concentrations; before/after treatment comparison; control/treatment groups." src="/files/ftp_upload/52717/52717fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 1"> 
图1： (A经处理组（n = 16）中硫化氢浓度变化趋势的图示 与 对照组（n = 16），在30天治疗期间；*p &lt;0.05; (B经处理组（n = 16）甲硫醇浓度变化趋势的图示 与 对照组（n = 16）在30天治疗期间；*p &lt;0.05; (C经处理组（n = 16）二甲基硫醚浓度变化趋势的图示 与 对照组（n = 16），在30天治疗期间；*p &lt;0.05.
<img alt="Bar graphs comparing control vs treated concentration of H2S, CH3SH, (CH3)2S after washout." src="/files/ftp_upload/52717/52717fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="Figure 2"> 
图2： (A经处理组（n = 16）中硫化氢浓度变化趋势的图示 与 对照组（n = 16）在10天洗脱期后；*p &lt;0.05; (B经处理组（n = 16）甲硫醇浓度变化趋势的图示 与 对照组（n = 16）在10天洗脱期后；*p &lt;0.05; (C经处理组（n = 16）二甲基硫醚浓度变化趋势的图示 与 对照组（n = 16）在10天洗脱期后；*p &lt;0.05.

我们介绍一种用于诊断犬类口臭的简单方法，以及一种通过饮食管理口臭的策略。该方案在不久的将来可能被扩展应用于人类口臭的管理。

口臭是一种常见的临床主诉，涉及人类的社会交往和沟通问题，同时也影响宠物与主人之间的关系。在本项随机……

本实验的总体目标是通过使用便携式人体用色谱仪，展示特定饮食在管理犬类口臭方面的调节作用。首先将患有慢性口臭的不同品种犬随机分为两组，然后使用口腔Chroma气体色谱仪检测犬类挥发性硫化物（VSC）的基线水平，该物质是导致口臭的主要致病因素。然后，在30天内为治疗组的犬只提供特定饮食，而另一组则接受安慰剂处理，在治疗期间及治疗结束时，重复测量与口臭相关的化合物。最后一步是让两组动物进入洗脱期，在此期间所有动物均饲喂安慰剂。洗脱期结束后，两组角色互换，即原对照组接受膳食补充剂，原治疗组接受安慰剂。与现有的高效液相色谱法和固相萃取-气相色谱-质谱联用等方法相比，该技术的主要优势在于其便携、快速，且无需长时间培训即可独立完成分析。本实验操作将由我实验室的研究生 Francesca 演示。首先，将32只不同品种且患有慢性口臭的犬随机分为两组，并对这些犬进行兽医检查。口腔色度气相色谱仪是一种便携式设备，可检测挥发性硫化物（VSC），而VSC是口臭的主要致病因素。在使用膳食补充剂治疗前，需先测量犬的VSC水平。首先，打开设备背面的主电源开关。初始界面显示“测量模式”字样。然后按回车键选择测量模式。屏幕上会显示“等待”，并在“计数器”一词旁边显示测量装置稳定所需的待机时间。当待机时间结束时，设备将自动准备就绪进行测量，准备就绪指示灯会亮起。接下来，运行数据管理软件，点击“测量”。输入 ID 并点击确定。系统将显示一条消息：“在数据文件夹中未找到此 ID”。您是否希望在此处新注册此 ID，请点击“是”。然后输入、命名受试对象的任何备注、性别和出生日期，之后点击“确定”。此时会显示一条消息，提示“点击确定以开始接收”，请在显示的消息上点击“确定”。接下来，使用一支1 mL一次性注射器，将注射器置于犬的唇连合处，缓慢拉动活塞，从犬的口腔中收集呼出气体，然后将注射器从犬的口腔中取出。将注射器的体积调节至1立方厘米。将配套的针头连接到注射器末端，打开盖子后，推动推杆将样品注入仪器主机的进样口，测量将自动开始，准备指示灯随之熄灭。八分钟后测量完成，结果将自动显示。测量完成后，判断窗口将出现，可显示测量历史和测量数据。按“Enter”键将结果存储到设备中，然后等待一分钟以使设备稳定，并进行下一次测量。在此时间结束时，指示灯会亮起，表明设备已准备就绪。在每只犬完成基线测量后，给予其中一组膳食补充剂，另一组给予安慰剂，持续30天。有关膳食补充剂或安慰剂的正确剂量，请参见文字版实验方案。在治疗后第10天、第20天以及30天治疗结束时重复进行VSC测量，并确保两组动物均接受为期10天的洗脱期，期间所有动物均饲喂安慰剂。在洗脱期结束后，将两组处理反转，即对照组动物接受膳食补充剂再持续30天，而治疗组动物接受安慰剂。在最后一次重复VSC测量后，对犬只进行另一次兽医检查，结果显示，经治疗的动物体内硫化氢浓度从治疗前的0.43纳克/毫升显著降低至治疗30天后的0.06纳克/毫升。如图所示，经治疗的动物体内甲硫醇甲烷浓度也从治疗前的0.30纳克/毫升显著下降至0.06纳克/毫升。治疗30天后，经治疗动物体内的二甲基硫醚浓度亦显著降低，从治疗前的0.28纳克/毫升降至0.13纳克/毫升。治疗30天后的结果具有可比性。经过10天的洗脱期后，在治疗20天后，硫化氢浓度从基线水平的0.37纳克/毫升显著降低至0.10纳克/毫升。对于甲基硫菌灵，同样观察到类似趋势，在治疗30天后，其化合物浓度从基线水平的0.24纳克/毫升显著降低至0.05纳克/毫升。至于二甲基硫醚，在治疗30天后，其化合物浓度也从基线水平的0.32纳克/毫升显著降低至0.11纳克/毫升。观看本视频后，您应能够充分了解如何轻松监测特定饮食后口臭化合物的变化情况。在进行该操作时，务必注意每次测量前需让设备稳定八分钟。

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