Name: 基于纸张的设备进行隔离外囊泡与表征 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: 学习使用纸质平台从微量血清样本中快速分离细胞外囊泡的方法。该技术无需超速离心，仅需数分钟即可完成，并可通过电子显微镜、ELISA或转录组分析进行表征。

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本工作部分得到了中国台湾国家科学委员会基金项目 NSC 99-2320-B-007-005-MY2（CC）和 NSC 101-2628-E-007-011-MY3（CMC），以及中国台湾退伍军人总医院与大学系统联合研究计划（CC）的资助。

操作流程的总体示意图见图1。我们遵循伦理规范，从健康受试者中采集血液样本，并通过台中荣民总医院（中国台湾台中市）在经机构审查委员会批准的方案（IRB TCVGH 编号 CF11213-1）下获取患者的房水样本。
1. 纸质装置的制备
<ol>
	<li>将层析纸裁剪成直径为5 mm的圆形，使其排列方式与96孔微孔板相同。将这些圆形纸片夹在两片带有对齐通孔的聚苯乙烯板之间，进行热压固定。</li>
	<li>使用以下步骤中所述的化学偶联方法修饰纸质装置28.
	<ol>
		<li>在等离子体腔室中，用氧气等离子体（100 mW，1% 氧气，30 秒）处理纸基装置。 
		注意：使用 3-巯基丙基三甲氧基硅烷时必须格外小心， N-&#947;-马来酰亚胺基丁酰氧基琥珀酰亚胺酯（GMBS），因为二者均对湿气敏感且具有毒性。操作时需佩戴防护手套，避免吸入或接触皮肤及眼睛。储存时应将原装瓶 tightly sealed，并在使用前置于室温下充分平衡，以防止水分冷凝。也可在充满氮气的手套袋或手套箱内开启原装瓶。建议分装至小瓶中，以减少原装瓶的频繁开启。</li>
		<li>将处理后的纸质装置立即在4%（v/v）3-巯基丙基三甲氧基硅烷乙醇（200 proof）溶液中孵育30分钟。</li>
		<li>用乙醇冲洗纸基装置，并将其与 0.01 &#956;mol/ml GMBS 溶于乙醇，作用 15 分钟。</li>
		<li>用乙醇（200 proof）冲洗，并将纸基装置与10 &#181;g/ml 链霉亲和素溶液在磷酸盐缓冲液（PBS）中，4℃孵育1小时 &#176;C. 4℃保存 &#176;如有需要，于4周内使用。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用10润湿每张试纸的测试区域 &#956;含1% (w/v) 牛血清白蛋白（BSA）的PBS溶液，孵育3分钟 &#215; 点样前10分钟 &#956;用于3的生物素化捕获分子 &#215; 10 分钟。使用抗 CD63 抗体（20 &#956;g/ml，溶于含1% (w/v) BSA和0.09% (w/v) 叠氮化钠的PBS中）或膜联蛋白V（1:20，v/v，溶于膜联蛋白V结合缓冲液中）作为捕获分子。</li>
	<li>用10 mL缓冲液洗去未结合的抗CD63抗体或膜联蛋白V分子 &#956;l 对应的 PBS，其中含有 1% (w/v) BSA 或膜联蛋白 V 结合缓冲液，孵育 3 &#215; 1 分钟，分别。</li>
</ol>
2. 血清和房水样本的采集与处理
<ol>
	<li>血清采集。
	<ol>
		<li>采用静脉穿刺法在血清分离管中收集 10 ml 外周血，轻轻倒置试管 5 次。将试管垂直放置，静置 30 分钟。</li>
		<li>在 1,200 × g 条件下离心 15 分钟。将上层血清转移至洁净试管中，再在 3,000 × g 条件下离心 30 分钟。</li>
		<li>将上清液经 0.8 μm 滤膜过滤。样品保存于 -80 °C，待用。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>房水采集：由眼科医生通过侵入性操作直接从患者获取房水样本，并将样本储存于 -80 °C，待用。</li>
</ol>
3. 细胞外囊泡的分离
<ol>
	<li>以每分钟5个样品的速率将样品点样至各纸张检测区域 &#956;升/分钟</li>
	<li>用10次洗涤去除未结合的EVs &#956;l 对应的 PBS 溶液（含 1% (w/v) BSA）或膜联蛋白 V 结合缓冲液，孵育 3 &#215; 分别用抗CD63抗体或膜联蛋白V分子功能化的纸基装置孵育1分钟。随后进行以下下游检测。</li>
</ol>
4. 下游检测示例1：扫描电子显微镜照片
<ol>
	<li>使用10固定功能化纸张检测区上捕获的细胞外囊泡 &#956;0.5 l&#215; Karnovsky固定液固定10分钟。</li>
	<li>用大量 PBS 清洗样品 2 次 &#215; 5 分钟</li>
	<li>用35%乙醇脱水10分钟，再用50%乙醇脱水2分钟 &#215; 10 分钟，70% 乙醇处理 2 次 &#215; 10 分钟，95% 乙醇用于 2 &#215; 10 分钟，以及 100% 乙醇处理 4 &#215; 10 分钟</li>
	<li>使用钯/金对样品进行临界点干燥和溅射镀膜，并在低电子加速电压（约 5 kV）下用扫描电子显微镜观察。</li>
</ol>
5. 下游检测示例2：基于纸张的ELISA
<ol>
	<li>向每个含有捕获的细胞外囊泡（EVs）的检测区域加入5 μl PBS中稀释1:1,000的抗CD9一抗溶液。静置1&#160;分钟。</li>
	<li>用30 ml PBS在100 rpm振荡条件下冲洗样品30秒。</li>
	<li>向每个检测区域加入5 μl PBS中稀释1:1,000的辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗溶液，静置1分钟。</li>
	<li>用30 ml PBS在100 rpm振荡条件下冲洗样品30秒。</li>
	<li>加入5 μl比色底物溶液，其中过氧化氢与3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）按1:1体积比混合，然后使用台式扫描仪进行扫描。</li>
</ol>
6. 下游实验示例3：RNA提取
<ol>
	<li>将样品浸入 35 μl 基于聚乙烯吡咯烷酮的 RNA 提取辅助液和 265 μl 裂解/结合缓冲液中，以裂解捕获的细胞外囊泡。剧烈涡旋振荡。</li>
	<li>向裂解液中加入分离试剂盒提供的 30 μl 匀浆液。剧烈涡旋振荡，并置于冰上 10 分钟。</li>
	<li>使用以下步骤所述的酸性酚-氯仿分离法提取 RNA。
	<ol>
		<li>从试剂瓶底部取 330 μl 酚-氯仿溶液，加入匀浆液/裂解液中。剧烈涡旋振荡。</li>
		<li>在 10,000 × g 条件下离心 5 分钟。将水相（上层）转移至洁净离心管中，并记录转移的体积。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用上一步所获水相体积 1.25 倍量的 100% 乙醇沉淀总 RNA，并将 RNA 收集于预热至 95 °C 的洗脱液中。</li>
	<li>按照制造商提供的操作说明，使用 RNA 纯化试剂盒对 RNA 进行浓缩和进一步纯化。</li>
</ol>

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</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

成功分离细胞外囊泡亚群最关键的步骤包括：1）选择合适的纸张；2）捕获分子在纸纤维表面稳定且高覆盖率的固定；3）正确处理样本；以及4）遵循常规实验室卫生规范。
多孔材料已被广泛应用于许多低成本且无需设备的检测方法中。这类材料具有可调节的孔径、多样的功能基团、低成本以及高比表面积，能够通过毛细作用被动地吸附液体。我们主要选用1号色谱级纤维素滤纸，因其具备合适的孔径和较低的蛋白质吸附性。与另一种常用的多孔材料硝酸纤维素膜相比，纤维素滤纸的非特异性蛋白质吸附显著更低34。在本研究中，我们也发现其对细胞外囊泡（EVs）的非特异性捕获极少。此外，其颗粒截留能力为11 μm，大于EVs的尺寸35，因此可实现特异性捕获，而非对EVs的物理截留。本文重点关注较小尺寸的EVs，故在处理血清样本时通过0.8 μm滤膜进行过滤；当研究目标为较大尺寸EVs时，该步骤可相应调整。
化学表面修饰可能是实现捕获分子在表面稳定且高覆盖率固定的关键，从而提高细胞外囊泡（EV）分离的效率。已有综述对纤维素的表面修饰进行了...

细胞外囊泡（EVs）是一类大小从40 nm到5,000 nm不等的异质性膜性颗粒，可通过不同的生物发生途径由多种细胞主动释放1-9。它们含有来自亲代细胞的特定且经过选择的DNA、RNA、蛋白质和表面标志物亚群。EVs参与多种细胞过程，如细胞间通讯10、免疫调节11、血管生成12、转移12、化疗耐药13以及眼病的发生发展9，这些作用正日益受到关注，并激发了人们对其在诊断、预后、治疗及基础生物学应用中潜力的浓厚兴趣。
根据生物发生过程或细胞来源，细胞外囊泡（EVs）可经典地分为外泌体、微囊泡、凋亡小体、肿瘤体、胞外体、微颗粒、端粒体、前列腺体、心肌体和vexosome等。例如，外泌体形成于多泡体中，而微囊泡则由质膜直接出芽产生，凋亡囊泡则来源于凋亡或坏死的细胞。然而，由于对EVs的全面理解与表征仍不充分，其命名体系仍在不断完善中。目前已开发出多种EVs纯化方法，包括超速离心法14、超滤法15、磁珠法16、聚合物沉淀法17-19以及微流控技术20-22。最常见的EVs纯化流程包括一系列离心和/或过滤步骤，以去除大颗粒碎片及其他细胞污染物，随后进行最终的高速超速离心，但该过程成本高、操作繁琐且缺乏特异性14,23,24。遗憾的是，目前仍缺乏能够快速、可靠地分离出具有满意纯度和效率EVs的技术手段。
我们开发了一种基于纸张的免疫亲和装置，可提供一种简单、省时且经济高效的方法，用于分离和表征细胞外囊泡（EVs）亚群22。将纤维素纸裁剪成特定形状后，可通过带有对齐通孔的两张塑料片进行排列和层压。与通常通过印刷疏水性石蜡或聚合物来定义纸基装置中流体边界的策略不同25-27，这种层压纸结构对多种有机液体（包括乙醇）具有耐受性。纸张检测区经过化学修饰，可稳定且高密度地固定捕获分子（例如，靶标特异性抗体），这些分子对EV亚群表面的特定标志物具有高亲和力。生物样本可直接加样至纸张检测区，经洗涤步骤后即可保留纯化的EVs。分离得到的EVs可通过扫描电镜（SEM）、酶联免疫吸附试验（ELISA）以及转录组学分析进行表征。

<table><tbody><tr><td>层析纸</td><td>GE Healthcare Life Sciences</td><td>3001-861</td><td>Whatman&amp;reg; Grade 1 纤维素纸</td></tr><tr><td>(3-巯丙基)三甲氧基硅烷</td><td>Sigma Aldrich</td><td>175617</td><td>该化学品与水和湿气发生反应，应在充氮手套袋内操作。避免接触眼睛和皮肤。切勿吸入烟雾或蒸气。</td></tr><tr><td>乙醇</td><td>菲舍尔科技公司</td><td>BP2818</td><td>无水，200 证明，分子生物学级</td></tr><tr><td>牛血清白蛋白（BSA）</td><td>BioShop Canada Inc.</td><td>ALB001</td><td>常被称为 Cohn 组分 V。</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;N&lt;/em&gt;-&amp;#947;-马来酰亚胺丁酰氧基琥珀酰亚胺酯（GMBS）</td><td>Pierce Biotechnology</td><td>22309</td><td>GMBS 是一种胺基至巯基交联剂。GMBS 对湿气敏感。</td></tr><tr><td>亲和素</td><td>Pierce Biotechnology</td><td>31000</td><td>NeutrAvidin 具有 4 个生物素结合位点，其等电点（pI）为 6.3，比天然亲和素更接近中性</td></tr><tr><td>生物素标记的小鼠抗人抗 CD63 抗体</td><td>Ancell</td><td>215-030</td><td>克隆株 AHN16.1/46-4-5</td></tr><tr><td>生物素化膜联蛋白 V</td><td>BD Biosciences</td><td>556418</td><td>膜联蛋白 V 对磷脂酰丝氨酸（PS）具有高亲和力</td></tr><tr><td>一抗 CD9 和二抗</td><td>System Biosciences</td><td>EXOAB-CD9A-1</td><td>二抗为辣根过氧化物酶偶联抗体</td></tr><tr><td>血清分离管</td><td>BD Biosciences</td><td>367991</td><td>含凝血激活剂和凝胶用于血清分离</td></tr><tr><td>膜联蛋白 V 结合缓冲液</td><td>BD Biosciences</td><td>556454</td><td>10 倍浓度；使用前稀释至 1 倍。</td></tr><tr><td>TMB 底物试剂盒</td><td>BD Biosciences</td><td>555214</td><td>试剂盒包含过氧化氢和 3,3&amp;rsquo;,5,5&amp;rsquo;-四甲基联苯胺（TMB）</td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td>RNA 提取试剂盒</td><td>Life Technologies</td><td>AM1560</td><td>MirVana RNA 提取试剂盒</td></tr><tr><td>基于聚乙烯吡咯烷酮的 RNA 提取辅助剂</td><td>Life Technologies</td><td>AM9690</td><td>植物 RNA 提取辅助剂含有可结合多糖的聚乙烯吡咯烷酮（PVP）</td></tr><tr><td>RNA 纯化试剂盒</td><td>Qiagen Inc.</td><td>74004</td><td>MinElute RNA 纯化试剂盒适用于纯化最多 45&amp;nbsp;&amp;mu;g RNA</td></tr><tr><td>等离子体腔室</td><td>March Instruments</td><td>PX-250</td><td></td></tr><tr><td>扫描电子显微镜</td><td>Hitachi Ltd.</td><td>S-4300</td><td></td></tr><tr><td>台式扫描仪</td><td>惠普公司</td><td>Photosmart B110</td><td>采集 8 位彩色图像。也可使用相机和智能手机。</td></tr><tr><td>图像记录系统</td><td>J&amp;H Technology Co</td><td>GeneSys G:BOX Chemi-XX8</td><td>采集 16 位荧光图像。也可使用荧光显微镜。</td></tr></tbody></table>

基于纸张的细胞外囊泡分离与表征装置

Paper-based Devices for Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles

细胞外囊泡（EVs）是由多种细胞释放的膜性颗粒，在临床应用方面具有巨大潜力。它们携带核酸和蛋白质成分， increasingly 被认为是真核细胞和原核细胞均采用的一种细胞间通讯方式。然而，由于其体积微小，目前分离EVs的常规方法通常耗时较长、操作繁琐，且需要较大的样本量以及超速离心机等昂贵设备。为克服这些局限性，我们开发了一种基于纸张的免疫亲和平台，可用于分离EVs的不同亚群，该方法操作简便、效率高，所需样本量低至10 μl。生物样本可直接滴加到已化学修饰有捕获分子的纸质检测区域，这些捕获分子对特定的EV表面标志物具有高亲和力。我们通过扫描电子显微镜（SEM）、基于纸张的酶联免疫吸附测定（P-ELISA）以及转录组分析对该检测方法进行了验证。这类基于纸张的装置将有助于在临床和科研环境中开展EVs的研究，推动我们对EVs在健康与疾病状态下功能的理解。

纸基器件高效分离EV亚群的能力依赖于其对EV表面标志物的灵敏且特异的识别。通过采用链霉亲和素-生物素化学方法，可实现捕获分子在纸纤维上的稳定修饰，该方法已在其他文献中有所描述28-30。化学偶联法与物理吸附法的有效性通过基于荧光的检测方法进行评估。纸基检测区按照步骤1）的方案制备，但在步骤1.3中，将捕获分子替换为20 μg/ml的荧光标记R-藻红蛋白-生物素分子（PE-biotin）。随后用PBS冲洗纸基检测区，以去除未结合的PE-biotin分子。相比之下，在另一组实验中，将10 μl含1%（w/v）BSA和0.09%（w/v）叠氮化钠的PBS缓冲液中20 μg/ml PE-biotin直接点样于纸基检测区，每次点样后于室温孵育10分钟，共重复3次，随后用PBS冲洗，以实现PE-biotin染料分子的物理吸附。对经化学修饰的纸基器件（“paper+crosslinker+dye”）、未经处理的纸基器件（“paper”）、采用相同修饰流程但未添加PE-biotin分子的纸基器件（“paper+crosslinker”）以及经物理吸附PE-biotin分子的纸基器件（“physisorbed-dye”）使用图像记录...

本方案详细描述了一种从低至10 μl血清样本中分离细胞外囊泡（EVs）的方法，EVs是细胞释放的微小膜性颗粒。该方法无需超速离心，检测时间仅需几分钟，可实现对微量样本中EVs的分离。

细胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）是一类由多种细胞释放的膜性颗粒，在临床应用方面具有巨大潜力。它们含有……

本实验的总体目标是利用基于纸张的平台分离细胞外囊泡。首先，将两张聚苯乙烯片与圆形纤维素纸片进行层压，纸片经裁剪后对齐排列在一组精确对应的通孔阵列上。第二步是在纸张检测区化学偶联能够结合细胞外囊泡的分子。接下来，可将生物样本直接用移液器加到试纸检测区，经洗涤步骤后即可分离细胞外囊泡。最后一步是利用电子显微镜、ELISA 或转录组学分析对捕获的细胞外囊泡进行表征。最终，仅需低至 10 µL 的血清样本即可实现特定亚群细胞外囊泡的纯化与浓缩。因此，与现有的超声处理等方法相比，该技术的主要优势在于其操作更为温和，且易于实施。演示该实验步骤的将是研究生Shall you。首先取两片聚苯乙烯材料，制备出一系列圆形切口阵列。使用手动打孔器或计算机辅助的自动切割绘图仪，制备直径均小于五毫米的样品。此外，使用打孔器切割一系列直径为五毫米的色谱纸圆片。将一张聚苯乙烯片放置在实验台上，并在每个对应的通孔上方覆盖一个纸圆片。将第二张聚苯乙烯片材对齐并覆盖在纸盘上，形成三明治结构。在使用热压层压机将该三明治结构粘合前，检查整体对位情况。随后，通过将层压后的装置插入等离子体腔室，开始对纸盘进行化学表面修饰。在释放腔室真空后，立即用氧气等离子体短暂活化纸张表面，并立即将纸张装置转移至cylin溶液中，孵育30分钟。室温放置。用5毫升200 proof乙醇冲洗装置，以去除多余的cy lanes。然后将装置与A-G-M-B-S连接分子溶液孵育15分钟。室温条件下进行。用大量乙醇冲洗去除多余的连接分子。接下来，将装置在4°C下与avadon孵育一小时，并用5 mL PBS洗涤以去除未结合的avadon。随后，该装置可直接进入抗体结合步骤，或根据需要在4°C下保存长达四周。在Aden附着后，将10 µL封闭液滴加到暴露的纸盘区域，并将纸材孵育10分钟。在室温下，重复加入 10 微升封闭液，并在室温孵育 10 分钟。再重复两次，以完成暴露的纸质基底的生物功能化。将 10 微升生物素化的捕获分子加样至圆盘上，并在室温下孵育 10 分钟。对于细胞外囊泡，所选的捕获分子可以是抗 CD63 抗体或踝蛋白五（annexin V）。重复 10 微升加样和 10 分钟孵育步骤。在捕获分子结合后，再重复两次。用移液器将适量洗涤缓冲液（每张纸片10微升）加入，洗去多余的基团。室温孵育洗涤液1分钟，重复10 µL洗涤液及1分钟孵育步骤两次。至此，功能化纸基装置已准备好用于从血清或房水中分离细胞外囊泡。进行血清处理时，在真空采血管中收集10 mL外周血，并轻轻倒置混匀5次。将试管垂直放置，静置30分钟。在室温下，以离心机离心血液样本15分钟。保持室温。将上层澄清的血清层转移至干净的塑料管中，并弃去下层半固体相。以更高的离心速度离心30分钟以澄清血清。置于室温。将上清液转移至新的离心管中，并通过0.8微米滤膜过滤以去除细小颗粒。所得滤清血清可立即使用，或于-80°C保存。若需从眼内液中提取细胞外囊泡，应通过侵入性操作直接采集患者的房水，并将样本储存在-80°C。在使用前，玻璃体样本无需进行过滤或澄清步骤。为了从血清或房水中分离细胞外囊泡，用移液器将五微升生物样本点加到每个生物功能化纸基底圆片上。室温孵育一分钟，然后重复五微升点样及一分钟孵育过程。亲和结合后，用移液器加入10微升适当的洗涤缓冲液，洗去未结合的囊泡。室温孵育1分钟，重复进行10微升洗涤及随后的孵育步骤，再重复两次。捕获的细胞外囊泡现在可用于后续分析。将10微升0.5倍浓度的卡诺夫斯基固定剂滴加到每张纸质圆片上，以将捕获的囊泡固定在功能化纸质支撑载体上。室温下孵育10分钟，使交联反应进行，随后用大量PBS冲洗所有圆片5分钟。接下来，按顺序进行以下洗涤步骤，对纸质基底进行脱水处理。一次35%乙醇孵育，两次50%乙醇孵育，两次70%乙醇孵育，两次95%乙醇孵育，以及四次100%乙醇孵育。每次单独洗涤时，将乙醇溶液在纸片上室温孵育10分钟。当纸装置完全干燥后，在金属溅射仪中用18纳米厚的钯金层对样品进行溅射镀膜。将样品插入扫描电子显微镜中，在5千伏条件下进行显微观察，以防止生物样品过度充电，从而通过免疫测定检测捕获的囊泡。首先，在每张纸盘上加入5微升抗CD9一抗，室温孵育1分钟。通过机械振荡，用30毫升室温PBS洗涤纸装置，去除所有未结合的抗体。随后，将五微升辣根过氧化物酶标记的二抗分别加入每张纸片上。室温孵育一分钟。通过机械振荡，用30毫升PBS洗涤装置，以去除未结合的二抗。最后，将5 µL显色剂与定量底物的混合液滴加到每张纸盘上。在室温下孵育反应20至30分钟，然后使用台式扫描仪扫描检测斑点颜色强度的相应变化。首先，用剪刀或剃刀切除多余的聚苯乙烯覆膜区域，从整体装置中分离出单个纸盘。将每个纸片放入干净的1.5毫升微量离心管中。通过向每管加入265 µL裂解缓冲液和35 µL基于聚乙烯吡咯烷酮（PVP）的多糖去除载体，裂解捕获的囊泡，并剧烈涡旋振荡。为确保囊泡完全裂解以及释放的RNA分子充分游离，向裂解液中加入30微升匀浆液，涡旋混匀，并将离心管置于冰上孵育10分钟。随后，向裂解液中加入330微升酸性酚-氯仿混合液，以确保RNA与蛋白质和DNA实现有效的相分离，每管剧烈涡旋振荡至少15秒。然后将离心管以最大转速离心5分钟。在室温下，将含有 RNA 的上层水相转移至新的 1.5 毫升离心管中，并弃去下层有机相。向 RNA 样品中加入 1.25 倍体积的 100% 乙醇，短暂涡旋混匀。然后将混合液加入商用 RNA 固相提取柱中。在室温下离心试管15秒，并弃去流出液。加入700 µL工作溶液洗涤柱子。第一步：离心试管5至10秒，弃去流出液。接下来，用500 µL工作溶液洗涤柱子。第二步，将离心管离心5到10秒。弃去流出液，并重复洗涤一次。在室温下以最终一分钟的离心步骤去除任何残留的乙醇，并将干燥的提取柱转移至一个新的1.5毫升离心管中。加入100 µL预热的RNase-free水。以最大转速离心5至10秒，必要时弃去上方的提取柱。使用带有荧光标记生物素的商业化RNA纯化试剂盒对RNA EIT进行浓缩和进一步纯化。作为表面Im固定的报告分子。通过比较交联剂修饰表面与非功能化纸表面所产生的荧光强度，可以评估纸张功能化方案的有效性和特异性。此外，当报告分子被生物素标记的抗 CD63 抗体取代时，经过适当功能化的纸质基底相较于阴性对照纸质基底将促进更高的细胞外囊泡捕获率。当不同的捕获分子被固定在纸质基底上时，利用该纸质装置可观察到不同亚群的细胞外囊泡表现出不同的尺寸分布。研究人员还可同时检测囊泡内的RNA含量以及囊泡特异性表面蛋白的丰度。观看本视频后，您应能充分理解如何利用纸质设备分离并培养细胞外囊泡。

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生物工程

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基于纸张的细胞外囊泡分离与表征装置

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