Name: 玫瑰红Photothrombosis共聚焦光学成像在体内:单支脑卒中模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: 了解玫瑰红光化学血栓诱导技术，用于小鼠体感皮层缺血性卒中的活体成像研究。该方法通过激光照射实现即时血栓形成，支持实时观察细胞动态反应，为神经科学研究提供可靠的单支脑卒中模型。

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本工作的资助来源：AG007218 和 NIH F32 AG031606。
图像由美国德克萨斯大学健康科学中心（UTHSCSA）核心光学成像中心生成，该中心获得以下资助：UTHSCSA、美国国立卫生研究院癌症研究所 P30 CA54174（UTHSCSA 临床转化研究中心）以及美国国立卫生研究院老龄化研究所 P01AG19316。

注意：所有动物实验程序均经得克萨斯大学健康科学中心圣安东尼奥分校机构动物照护与使用委员会批准，并符合ARRIVE指南要求。
1.&#160;皮层制备的麻醉
<ol>
	<li>将小鼠放入诱导室，使用2-3%异氟烷与氧气混合气体诱导麻醉。观察小鼠呼吸频率随麻醉诱导逐渐下降。轻捏小鼠足爪以判断其是否已达到可转移至鼻罩的程度。注意：麻醉深度是任何实验操作中的关键步骤 在体 准备和操作过程中应谨慎，避免诱发导致全脑缺血的程度。</li>
	<li>小鼠充分麻醉后，将其转移至手术/成像平台，将小鼠的鼻部置入鼻罩，并持续给予1-1.2%异氟烷以维持麻醉状态。确保小鼠仰卧于温度可控的加热垫上，以在整个后续操作过程中维持其体温（37°C ± 0.5°C）。在麻醉期间，于小鼠眼部涂抹兽用眼膏以防止角膜干燥。</li>
	<li>使用系统配备的尾夹或足夹式脉搏血氧仪监测小鼠的生理状态。检查呼吸频率是否维持在50-65次/分钟。确认心率保持在300至450次/分钟之间，血氧饱和度维持在97%-98%，以确保动物的长期存活。</li>
	<li>当小鼠被充分麻醉后，使用电动剪刀剃除颅骨区域的毛发，清除残留毛发后先用聚维酮碘擦拭，再用乙醇棉片消毒。重复此操作最多三次，以确保手术环境无菌。</li>
</ol>
2. 手术步骤
<ol>
	<li>将小鼠头皮彻底清洁并剃净后，在其头皮上做一个5 mm的切口，以暴露颅缝并定位前囟点（bregma）。</li>
	<li>使用无菌棉签清除覆盖在颅骨表面的任何残留筋膜。</li>
	<li>使用组织粘合剂将定制的不锈钢环（图1）粘附于顶叶皮层上方的颅骨表面，定位依据为前囟点的立体定位坐标：前后向 -1 至 -3 mm，侧向 2-4 mm。注意：通常在将环放置到骨面后约2分钟内胶水即可固化&#160;。</li>
	<li>将该环固定至立体定位仪夹持装置（图2），以稳定小鼠头部，防止成像过程中发生移动。</li>
	<li>在手术级解剖显微镜下，使用转速可控的微型钻具（Meisinger 3.9 mm钻头）缓慢钻削颅骨，形成1-2 mm的区域，钻削过程中需确保该区域保持水平。可通过之字形路径实现此目的。为避免产热积聚，应将钻头速度设为低速，并频繁暂停操作以冷却。</li>
	<li>当颅骨表面呈现光泽状时，改用手术刀片继续对颅骨进行减薄处理，仍采用相同的之字形路径，以保持减薄区域表面平整，便于逐层均匀去除颅骨。使用刀尖施加轻微压力，进行短小的线性刮削，逐次去除薄层骨组织。持续操作，直至在解剖显微镜下清晰可见皮层表面的血管结构。</li>
	<li>若操作者在减薄过程中穿透或损坏颅骨，应立即实施安乐死，因可能已对下方皮层造成损伤。 
	注意：小鼠颅骨厚度约为300 µm，由两层致密骨板（外层和内层）以及夹在两者之间的松质骨层构成。在5 mm直径的钻孔区域内，外层致密骨和大部分松质骨被去除，最终保留约50 µm厚的致密骨层（见图2B）。通过观察血管结构可确认最终保留的减薄颅骨厚度约为50 µm。因此，当减薄至此厚度时，颅骨仍然完整存在。</li>
</ol>
3. 显微镜设置
<ol>
	<li>使用带有物镜倒置装置的倒置显微镜系统（常规、共聚焦或双光子系统）。注意：也可使用标准的正置显微镜，但限制因素是载物台与物镜之间的空间，可能需要对载物台进行改装以实现该配置。</li>
	<li>将手术/成像平台固定在位于显微镜底座一侧的定制载物台上。注意：该平台采用实验室升降台（laboratory jack）制成，以便在物镜下方实现手术/成像平台的垂直移动。升降台安装在一个固定于四根圆柱形立柱的平板上。（见图2）。</li>
	<li>将装有20倍物镜的物镜倒置装置置于颅窗上方。使用外部光源，通过显微镜目镜观察以定位颅窗，并将物镜对准成像区域。注意：成像区域可通过血管结构的存在来识别。</li>
	<li>对于水浸物镜，由于成像过程中可能存在液体渗入颅腔的风险，应使用人工脑脊液（aCSF）（130 mM NaCl；30 mM KCl；12 mM KH2PO4；200 mM NaHCO3；30 mM HEPES；100 mM 葡萄糖）作为介质（图3）。</li>
</ol>
4. 荧光素红染料的制备、给药及脑卒中诱导
<ol>
	<li>用人工脑脊液（aCSF）配制新鲜的 20 mg/ml 荼菁红溶液；给药前过滤并灭菌。混合后的荼菁红不得重复使用或储存，每次实验均需配制新鲜溶液。</li>
	<li>在尾静脉注射 0.1 ml 荼菁红的同时，使用 561 nm 激光扫描颅窗，以确保溶液注射充分。注意：注射后约 5 秒内即可在脑血管中观察到荼菁红染料，整个目标血管应被完全填充。</li>
	<li>在荼菁红染料充分注射后，根据血管直径（40–80 µm）选择适合形成血栓的血管，以确保特定病灶体积的可重复性。通过观察血流方向区分动脉与静脉：动脉血流由粗血管流向细血管，静脉则由细血管流向粗血管。注射荼菁红后可通过直接观察轻松实现区分。</li>
	<li>调整显微镜设置如下：
	<ol>
		<li>增加驻留时间。注意：具体数值取决于所使用的显微镜系统。</li>
		<li>将激光功率调至 100%。</li>
		<li>以最大扫描速度采集时间序列图像，帧速率为每秒 1 帧&#160;。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>持续扫描小鼠，直至血管内形成稳定的血凝块。注意：通常在连续扫描 5 分钟内&#160;即可实现（见图 4）。</li>
	<li>使用荼菁红诱导血栓形成后，将小鼠从成像区域移回解剖显微镜下。小心移除颅骨上的不锈钢环，检查颅窗是否存在出血。若发生出血，应终止实验。</li>
	<li>使用 6.0 单股缝合线缝合颅骨处的切口。沿缝合线涂抹抗生素软膏以预防感染。皮下注射布托啡诺（Buprenex，0.05 mg/kg），每 12 小时一次，连续三天，用于镇痛管理。</li>
	<li>小鼠从麻醉状态取出后，置于恢复舱中，直至完全清醒并能自由活动。</li>
	<li>将小鼠转移至清洁笼具中，以备后续实验观察。</li>
</ol>
5. 后续数日的纵向成像
<ol>
	<li>在光栓塞术后数天内，采用以下方法进行纵向成像。
	<ol>
		<li>按照方法部分第1节所述，对小鼠进行麻醉。</li>
		<li>在充分麻醉后，通过移除残留缝线重新打开头皮，暴露先前钻孔成像区域上方的皮肤。</li>
		<li>使用无菌棉签去除颅骨表面残留的筋膜组织。</li>
		<li>使用组织粘合剂将定制的不锈钢环（图1）粘附于先前成像区域上方的颅骨表面。</li>
		<li>将该环固定至立体定位仪（图2）上，以稳定小鼠头部并防止成像过程中发生移动。</li>
		<li>定位先前颅骨减薄区域下方的血管结构。通过尾静脉注射FITC-葡聚糖，确认先前诱导形成的血栓是否仍然存在。</li>
		<li>使用6.0单股缝线关闭颅骨上方的切口。沿缝合线涂抹抗生素软膏以预防感染。皮下注射布托啡诺（Buprenex，0.05 mg/kg），每12小时一次，连续三天，用于镇痛。</li>
		<li>将小鼠从麻醉状态中取出后，置于恢复舱内，直至其完全清醒并能自由活动。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
6. 脑卒中诱导的验证（死后）
<ol>
	<li>研究结束时，使用 2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色法验证每搏输出量，如图5所示。完整方法见文献12。</li>
</ol>

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</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

将实验性脑卒中病理生理学研究从动物模型转化为人类应用一直面临诸多失败。然而，利用动物模型（如光化学血栓模型），有助于更深入地理解脑卒中的病理生理机制，并探索新的治疗策略，以在脑卒中后提供神经保护。光化学血栓模型所产生的小皮层梗死和微梗死在临床上与亚临床性或“隐匿性脑卒中”具有相关性13-15，后者发病率较高，每年影响约美国人口的4%（约1100万人）16。隐匿性脑卒中不表现出较大面积脑卒中所常见的典型症状，例如偏瘫、感觉丧失或言语困难，这些症状常见于大脑中动脉（MCA）闭塞或短暂性脑缺血发作（TIA）17。此外，隐匿性脑卒中也不同于腔隙性脑卒中，后者由深部脑结构或脑干内单一支配动脉闭塞引起，临床上表现为运动、感觉或混合性神经功能缺损18。患有亚临床或“隐匿性脑卒中”的患者通常无明显外在症状，往往并不知晓自己曾发生过脑卒中。隐匿性脑卒中会导致认知功能的亚临床性下降，表现为记忆力减退、决策能力受损以及行为改变。随着时间推移，多次隐匿性脑卒中可导致临床上显著的记忆障碍，称为血管性痴呆或多发性梗塞性痴呆。然而，通过神经影像学检查可检测到隐匿性脑卒中引起的脑损...

本文所述技术可用于在完整小鼠体内诱导玫瑰 Bengal 光栓塞后，立即观察体内细胞的反应。玫瑰 Bengal（4,5,6,7-四氯-2',4',5',7'-四碘荧光素）是一种光敏性染料，常用于在动物模型（小鼠和大鼠）中诱导缺血性脑卒中。通过尾静脉注射玫瑰 Bengal 后，利用 564 nm 激光透过变薄的颅骨进行照射，可诱导血栓形成，从而引发生理性的脑卒中1。该方法最初由 Rosenblum 和 El-Sabban 于 1977 年描述，随后在 20 世纪 80 年代中期由 Watson 进行了改进1,2。简而言之，玫瑰 Bengal 在绿色激发光（本实验中使用 561 nm 激光）照射下，产生大量活性氧，进而激活组织因子，启动凝血级联反应。凝血级联反应的激活最终形成缺血性病灶，其病理特征与临床脑卒中具有相关性3。
由于多种不同细胞类型（包括神经元、胶质细胞、内皮细胞以及免疫系统）之间的相互作用，脑卒中的病理生理过程十分复杂。选择最佳技术来研究特定的细胞过程需要综合考虑多个因素。实验技术大致可分为三类：in vitro（体外）、in vivo（体内）和in silico（计算机模拟），每种方法都有其优缺点。in vitro研究的主要缺点是将细胞从其天然环境中分离出来，因此可能无法重现完整活体动物中观察到的效应。in vivo技术能够更真实地模拟疾病状态，具有更高的转化意义。in silico通常指对疾病或细胞过程进行计算机建模，尽管该方法正越来越多地被用于研究潜在的药物相互作用等，但所获得的任何信息仍需在活细胞或组织中进行验证。
在实验室环境中，理想的卒中模型应表现出与人类群体中所见相似的病理特征。尽管人类卒中存在一些共同的生理特征，但根据所经历损伤类型的不同，也存在许多差异。人类卒中可表现为小血管或大血管闭塞、出血性病灶，以及导致不同梗死体积和不同病理机制的动脉-动脉或心源性栓塞。使用动物卒中模型的优势在于能够产生可重复的梗死，以模拟人类卒中的特征。最常见的动物卒中模型包括通过以下方法实现的动脉闭塞：大脑中动脉闭塞（栓塞法或血管内线栓法），用于模拟远端MCAO，以及光化学血栓形成模型。各种模型的优缺点已有其他文献综述（见4和5）。全脑缺血模型（MCAO）虽然操作相对简便，但与人类卒中相比，其相关性较低。此外，这些方法在诱导可重复的脑梗死病灶方面具有高度变异性。只要实验者能够良好地控制实验条件，光化学血栓形成模型则具有高度可重复性，这使其明显优于MCAO模型。然而，由于该模型会对微血管系统造成损伤，据报道其缺血半暗带极小，而该区域通常被认为细胞仍可挽救6,7。此外，在照射成像区域后，也可能诱发血管源性水肿和细胞毒性水肿的形成。尽管存在这些局限性，该技术仍为深入了解卒中后多种生理过程提供了新的视角8,9,10,11。

<table><tbody><tr><td colspan="4">试剂</td></tr><tr><td>玫瑰红</td><td>Sigma</td><td>330000</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷麻醉剂</td><td>MWI Veterinary Supply</td><td>088-076</td><td></td></tr><tr><td>Vetbond</td><td>1469SB</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>aCSF&amp;nbsp;</td><td>126 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.25 mM NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;, 2 mM MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;, 2 mM CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;, 10 mM 葡萄糖和 26 mM NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt; (pH 7.4)。</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">[header]</td></tr><tr><td colspan="4">设备</td></tr><tr><td>解剖剪刀</td><td>Bioindustrial Products</td><td>500-410</td><td></td></tr><tr><td>手术剪刀 14 cm</td><td>Bioindustrial Products</td><td>12-055</td><td></td></tr><tr><td>杜蒙特高科技镊子 #5 型，直头</td><td>Bioindustrial Products</td><td>TWZ-301.22</td><td></td></tr><tr><td>LabJack 132X80</td><td>Optosigma Co</td><td>123-6670</td><td></td></tr><tr><td>Labjack 8X 8 平台</td><td>Optosigma Co</td><td>145-1110</td><td></td></tr><tr><td>立体定位仪耳杆固定器</td><td>Stoelting/Cyborg</td><td>51654</td><td></td></tr><tr><td>Dispomed Labvent 啮齿类动物麻醉机</td><td>DRE, Inc.</td><td>15001</td><td></td></tr><tr><td>Tech IV 异氟烷蒸发器</td><td>DRE, Inc.</td><td>34001</td><td></td></tr><tr><td>F 型空气罐</td><td>DRE, Inc</td><td>80120</td><td></td></tr><tr><td>Bain 回路呼吸管</td><td>DRE, Inc</td><td>86111B</td><td></td></tr><tr><td>Bain 管啮齿类动物适配器</td><td>DRE, Inc</td><td>891000</td><td></td></tr><tr><td>O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 氧气瓶减压阀</td><td>DRE, Inc</td><td>CE001E</td><td></td></tr><tr><td>啮齿类动物诱导室</td><td>DRE, Inc</td><td>15004C</td><td></td></tr><tr><td>Ethicon 6-0 丝线；18 英寸，带 P-3 针</td><td>Suture Express</td><td>1639G</td><td></td></tr><tr><td>物镜倒像光学适配器</td><td>LSM technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Foredom 双电压钻机 110/120</td><td>Foredom</td><td>134.53</td><td></td></tr><tr><td>Meisinger 3.9 mm 钻头</td><td>Meisinger</td><td></td><td>(Ref#310 104 001 001 009)</td></tr></tbody></table>

孟加拉红光栓塞的共聚焦光学成像 体内单血管卒中模型

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

由于成像染料和光学技术的最新进展，体内成像技术的应用日益广泛，使得在完整动物体内观察细胞事件成为可能。此外，能够在体内诱导生理疾病状态（如脑卒中）进一步提升了该技术的实用性。本文所述技术可用于评估脑卒中后中枢神经系统（CNS）内细胞反应的生理变化，并可针对其他正在研究的病理状况进行相应调整。该技术通过在体内利用激光激发光敏染料玫瑰红（Rose Bengal），在单根血管中诱导局灶性缺血事件。
该视频方案演示了在小鼠体感皮层上方制备薄颅骨颅窗，用于诱导玫瑰红（Rose Bengal）光血栓事件，同时将对下方硬脑膜和脑组织的损伤降至最低。手术准备最初在解剖显微镜下进行，使用定制的手术/成像平台，随后将样本转移至配备倒置物镜适配器的共聚焦显微镜进行成像。本方案还展示了利用该技术获取的代表性图像以及中风诱导过程的时间序列图像。该技术的优势在于可在后续多天内对同一区域进行重复成像，从而实现纵向研究 体内 中风后病理过程的研究。

本方法旨在通过尾静脉注射玫瑰 Bengal（Rose Bengal, RB）后，使用561 nm激光照射颅骨变薄区域，在动物模型（小鼠和大鼠）中诱导缺血性脑卒中。 图4 中的图像展示了照射区域在0、1、1.5和2分钟时单个血管内血栓形成的进展情况。在血栓形成之前，由于玫瑰 Bengal 自由流动，整个血管呈白色。当血管开始受到照射后，血管部分区域明显变暗，表明血栓形成已被诱导（1分钟和1.5分钟帧）。在完全闭塞后，血管内血栓前端（黑色区域）出现明显的玫瑰 Bengal 染料积聚（白色区域）。2分钟帧显示动脉已完全闭塞。
为了确认缺血性脑卒中的存在，可采用TTC染色法。TTC是一种常用染色剂，可通过健康组织中形成红色的甲臜TTC产物来检测脑梗死。无甲臜生成的区域（白色组织）提示为梗死区域。图5中标注框所示区域展示了两个不同动物在直径约80mm的血管内形成血栓后第1天和第5天所获得的典型病灶大小。图像分析使用平板扫描仪和ImageJ软件进行。可在ImageJ中划定感兴趣区域，以测量每只动物脑组织的脑卒中病灶体积。</p...

本文介绍了一种半侵入性光学显微技术，用于在活体小鼠的体感皮层中诱导玫瑰红光栓塞凝块。in vivo。文中详细描述了从光栓塞事件的诱导到成像操作及数据采集的整个成像过程的技术细节。

活体成像技术由于成像染料和光学技术的近期进展而得到日益广泛应用，使得能够……

本实验的总体目标是采用一种半侵入性光学显微技术，在小鼠体感皮层中诱导形成玫瑰红介导的光化学血栓。该过程首先对小鼠进行麻醉，并制备薄颅窗以进行成像。随后注射玫瑰红染料，并利用激光诱导光化学血栓形成。最终，在动物从麻醉中恢复后，可立即分析由玫瑰红B光化学血栓形成所造成的影响。该技术的主要优势在于，能够在玫瑰红B光化学血栓形成诱导后，立即观察到体内的细胞反应。初次接触该技术的研究人员可能在制备薄颅骨颅窗时遇到困难，因为该步骤具有较高难度且耗时较长。开始时，使用2%至3%的异氟烷与氧气混合对小鼠进行麻醉。注意观察小鼠呼吸频率下降以判断麻醉诱导效果。随后轻捏小鼠足爪以检查痛觉反应。为确认麻醉状态，使用加热垫和温度探针，使动物体温在整个实验过程中维持在37摄氏度的±0.5度范围内。随后涂抹眼药膏以保护角膜，并监测动物的生命体征。将血氧监测系统夹在尾巴或足部。调整麻醉深度，以维持每分钟50至65次呼吸，心率保持在每分钟300至450次。血氧饱和度应理想地维持在97%至98%。如果所有这些参数均得到维持，则可实现长期存活。最后，为手术准备皮肤。剃除颅骨上的毛发，使用聚维酮碘反复擦拭，随后用乙醇清洁皮肤。从头皮做5毫米切口开始手术，以暴露颅缝。用棉签去除表面筋膜，定位bgma。接下来进行粘合。将一个定制的不锈钢环粘附到顶叶皮层上方的颅骨上。从BMA位置开始，水平方向向后1至3毫米，外侧方向向外2至4毫米，确定该位置。两分钟后，胶水将完全凝固。随后将环状装置连接至立体定位仪固定装置上以稳定动物。现在，在手术级解剖显微镜下，采用之字形钻孔模式，在颅骨上位于体感皮层的区域缓慢钻出一个直径一至两毫米的孔，钻孔过程中需保持颅骨水平，以防止热量积聚。使用钻头时应以低速操作，并在骨面开始发亮时频繁暂停。继续以之字形模式钻孔，以减薄颅骨。薄的颅窗对于激光到达充满玫瑰红染料的血管并诱导血栓形成至关重要。当颅窗足够薄时，使用解剖刀施加轻柔压力进行微小的线性划切，以逐层去除薄层骨组织，直至通过显微镜目镜清晰观察到血管结构。为实现脑部成像，需使用物镜与载物台之间具有足够空间的显微镜，以容纳置于平台上的动物，倒置显微镜是理想选择。该平台设计用于适配一个定制的载物台，该载物台由安装在带四个支柱的板上的千斤顶构成。将小鼠放置在载物台上后，将物镜转像器置于颅窗上方，然后用外部光源照射颅骨。若使用水镜，应将人工脑脊液滴加至颅窗腔内，再将物镜浸入其中。现在将焦点置于可见血管结构的成像区域。将小鼠放置在显微镜下后，用人工脑脊液配制新鲜的玫瑰红染料，浓度为每毫升20毫克，经滤膜除菌，实验结束后应立即丢弃。该溶液必须始终新鲜配制使用。现在，使用561纳米激光扫描颅窗的同时，通过尾静脉注射0.1毫升的混合物。5秒内，染料应可清晰地在颅内血管系统中显现。在注入足量染料后，选择一条直径为40至80微米的血管进行血栓形成实验

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科研

JoVE Journal

Medicine

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玫瑰红Photothrombosis共聚焦光学成像<em&gt;在体内</em&gt;：单支脑卒中模型

利用光敏染料在小鼠大脑中诱导血栓形成

光血栓法是一种快速、微创的技术，可高度可重复地在特定感兴趣区域诱导产生小而界限清晰的梗死灶。该方法特别适用于研究转基因小鼠中脑可塑性相关的细胞和分子反应。...

光血栓性缺血：一种用于小鼠卒中研究的微创且可重复的光化学皮层损伤模型

本方案描述了联合近红外荧光（NIRF）成像与微型计算机断层扫描（microCT）技术用于可视化脑血栓栓塞的应用。该技术可实现对血栓负荷及其演变过程的定量分析。NIRF成像技术可用于观察离体脑组织中荧光标记的血栓，而microCT技术则利用金纳米颗粒在活体动物体内实现血栓的可视化。...

结合近红外荧光成像与显微计算机断层扫描直接可视化脑血栓栓塞

传统的光化学血栓性卒中（PTS）模型主要诱导形成对组织型纤溶酶原激活物（tPA）溶栓治疗具有高度抵抗性的致密血小板聚集体。本文介绍了一种通过共注射凝血酶和光敏染料进行光激活的改良小鼠PTS模型。该凝血酶增强型PTS模型可形成血小板与纤维蛋白混合的血栓，且对tPA溶栓治疗高度敏感。...

一种富含纤维蛋白且对tPA敏感的光化学血栓性卒中模型

本文介绍光化学血栓性脑卒中模型，该模型通过在给予光敏染料后利用激光照射，经完整颅骨诱导永久性微血管闭塞，从而产生脑卒中。...

小鼠卒中模型构建：光栓法诱导局灶性皮层损伤

本文介绍了一种使用玫瑰红（rose...

视网膜静脉阻塞小鼠模型的优化以减少变异性的研究

本研究展示了一种基于多模态超声成像平台的无创成像技术，用于缺血性脑卒中的成像。该系统可通过光声成像量化脑组织的血氧水平，并通过声学血管造影评估脑部灌注损伤情况。...

集成光声、超声和血管造影断层成像（PAUSAT）用于缺血性卒中全脑无创成像

本方案详细描述了一种优化的慢性颅窗结合微血管栓塞小鼠模型的逐步操作方法，适用于 体内 使用荧光聚苯乙烯微球进行双光子显微成像。...

用于微血管栓塞的小鼠模型 体内 使用荧光聚苯乙烯微球的双光子显微镜技术

采用全光学方法，在清醒且行为正常的小鼠脑卒中新兴核心区域，利用荧光生物传感器同时记录神经元Ca2+活动，以诱导缺血性脑卒中。...

在活动小鼠中同时进行光栓塞与光纤光度法以诱导并监测缺血性脑卒中

本方案提供了一种整合性方法，包括病毒递送、光探针植入、光血栓诱导、星形胶质细胞与神经元活动的同步记录，以及星形胶质细胞的光遗传学刺激。该整合性方法旨在对缺血性脑卒中从急性期到慢性期各个阶段的星形胶质细胞-神经元相互关系进行同步研究。...

一种用于光栓法脑卒中建模的整合方法 在体 内 行为小鼠中神经元和星形胶质细胞活动的光探针记录

了解玫瑰红光化学血栓诱导技术，用于小鼠体感皮层缺血性卒中的活体成像研究。该方法通过激光照射实现即时血栓形成，支持实时观察细胞动态反应，为神经科学研究提供可靠的单支脑卒中模型。

孟加拉红光栓塞的共聚焦光学成像体内单血管卒中模型

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