小鼠肾脏移植技术

本实验的总体目标是展示一种改良的小鼠肾移植动脉吻合技术。该技术首先需要在供体中仔细分离相关血管。第二步是在肾动脉附近的供体腹主动脉处制作一个跟部和顶部套管。

接下来，使用这种足跟-足尖套管在受体中建立动脉吻合。最终，该技术应能显著降低动脉血栓形成的发生率。本视频将向您展示如何创建动脉足跟-足尖套管，以促进口腔内的肾移植手术。

该抗性方法的主要优势在于，受体主动脉至供体肾动脉的血流路径更为平直，从而减少了血小板活化及血栓形成。在手术显微镜下采用无菌技术，正确获取供体肾脏。获取时间约为15至20分钟。去除毛发后，固定动物。

用聚维酮碘清洗小鼠皮肤以准备手术区域，铺巾后沿腹部正中线做两厘米切口开始手术。将肠管拉至胸部并用湿润纱布包裹。在整个手术过程中保持纱布湿润。

现在，找到腹部主要血管并进行游离。任何腰部分支均应使用10-0尼龙缝线电凝或结扎。接下来，在左肾血管远端，钝性分离下腔静脉和主动脉约2毫米的节段。

随后结扎并切断与肾血管相连的任何细小动脉和静脉分支。继续钝性分离，将肾静脉与肾动脉分开，以便后续在肾静脉近端制备Carroll补片，该补片将用于静脉吻合的建立。接下来，结扎并切断左侧肾上腺血管，以暴露肾上段主动脉。

进入后，取6-0丝线备用。在肾上方的主动脉周围进行缝合，以备后续使用。现在将肾脏血管和输尿管从周围筋膜中游离出来。

将肾脏向右侧旋转，结扎并切断集中在输尿管上的任何血管分支。仔细将输尿管从周围筋膜中游离出来。不要扰动肾门区域，并保留勃起血管。

接下来，在输尿管远端水平将其切断。此时可以获取肾脏。首先，向远端下腔静脉缓慢注射 300 单位肝素，以使供体肝素化。

其次，将六号零号缝线固定在肾动脉上方的腹主动脉处。然后从腹主动脉灌注左肾，注入0.8 mL含100单位/毫升肝素的生理盐水溶液。灌注完成后，立即制作静脉套管补片，以防止血液反流进入肾脏。

将肾静脉向肾脏方向回缩，以暴露腹主动脉（AA）和肾动脉。现在在肾动脉附近切断主动脉。制作足跟并套上套管。

若需要零分钟冷缺血时间，则将获取的肾脏直接移植到准备好的受体中。或者，将器官转移至4°C的储存环境中，随后按照文本方案中所述对供体实施安乐死。此操作过程耗时35至45分钟，与供体麻醉操作所需时间相同。

根据需要，受体也应补充初始推注剂量。为受体提供眼用软膏。然后对动物注射布托啡诺，并在手术后继续给药。在受体上进行操作时，参照供体的方法，先做初始切口并移开肠管，随后进行右侧肾切除术，使用6-0缝线结扎肾动脉和肾静脉，并在靠近肾脏的输尿管近端使用6-0缝线结扎并切断输尿管。

然后在血管缝合线远端切除肾脏。现在在肾血管下方，分离腹主动脉（AA）和下腔静脉（IVC），位置高于吻合口。用4-0棉线在主动脉和下腔静脉上绕一圈并结扎，同样在该位置下方也进行一次。

该区域发现的任何腰血管均应使用10-0尼龙缝线进行电灼或结扎，先紧密结扎下方的缝线，再紧密结扎上方的缝线。这将使主动脉内保留一定量的血液，有助于主动脉的切开。使用30号针头进行切开，然后用精细的显微剪将切口延长至约2毫米长。

下一步是将供体主动脉远端和近端套管与受体主动脉进行端对端吻合。首先，用10-0缝线在供体主动脉远端打一个固定缝合，然后穿过受体主动脉切口的下端，打结固定。

第二，于主动脉切口的上端置入一根10-0缝线，并继续穿过供体袖口的末端并打结固定。第三，从上端开始，在主动脉的侧壁进行连续缝合，并与先前放置的下端固定缝线打结固定。然后翻转肾脏，沿内侧壁继续进行连续缝合，并与上方的固定缝线打结固定。

使用针头穿刺下腔静脉完成静脉吻合，然后用精细的显微剪刀扩大切口。用10-0尼龙线将供体肾静脉与下腔静脉的下角结扎固定。在下腔静脉和供体静脉的上端再放置一针10-0缝线，并沿两侧连续缝合。

与动脉吻合一样，外翻组织边缘有助于封闭和愈合。现在检查你的操作：缝线不应缝住对侧管壁，否则血流会受到过度限制。

另一个至关重要的因素是确保吻合口缝合线的张力处于最佳状态：若过松，则会导致不可逆的渗漏；若过紧，则会引起血流狭窄。若发生在动脉侧，将导致移植物灌注不良；若发生在静脉侧，则会导致肾脏充血。

吻合完成后，松开远端棉线结扎以恢复静脉血流。然后逐渐放松近端结扎线，并在动脉吻合口处冲洗以止血。当确认两处吻合均牢固后，用20号针头在受体膀胱上刺两个孔，将镊子经由这两个孔穿过，再将供体输尿管拉入膀胱内。

然后用2针10-0缝线将输尿管近端固定于膀胱壁。修剪突出的输尿管多余长度，使其回缩至膀胱内。随后用10-0缝线关闭膀胱上的另一个孔。

通过还纳肠管，用连续缝合的5-0丝线分两层关闭腹腔，并在关闭前向腹腔内注射1微升生理盐水，完成手术。关闭腹腔后，再皮下注射0.8毫升生理盐水，并将动物置于保温毯上恢复。在为期一年的数据收集中，该技术使动脉血栓形成的发生率从35%显著降低至0%，且0%血栓发生率得以持续。对非移植肾和移植肾进行免疫组织化学分析。采用所述技术，过碘酸希夫（PAS）染色显示对照组和供体的近端小管细胞形态正常。

细胞呈立方形，胞质清晰，细胞中央有一个圆形的浅染细胞核（两个箭头所示均如此）。指出存在轻度刷状缘损伤的证据，但大多数刷状缘结构规则且保存良好。观看本视频后，您应充分理解如何进行动脉端足杯状吻合，从而减少血栓形成的发生率，并提高肾移植手术的成功率。