2015年5月31日
试件定位标记(点)的目的是充当定向工具在单个组织识别在多组织石蜡块中提供帮助。这些协议表明它是如何容易地从普通的,低成本的组织学材料构成,并作为在石蜡块和切片的可靠视觉标记。
该程序的总体目标是构建一种工具来帮助在多组织石蜡块中进行组织鉴定。这是通过首先将 HistoGel 与组织标记染料结合以形成颜色鲜艳的凝胶塞来实现的。第二步是按照标准组织处理和包埋技术处理和包埋彩色 HistoGel 栓塞。
接下来,使用活检打孔器去除小圆柱体。这些是标本方向标签或点。最后一步是将斑点嵌入多组织块中,并仔细记录斑点的位置和每个样品,以便于参考。
最终,该点为组织微阵列和多组织块中的标本定位和鉴定提供了清晰的视觉提示。与缝合或不对称核心等现有方法相比,该技术的主要优点是该点不会改变组织,并允许灵活地排列样品以实现最佳分析。当我们收到研究人员的要求,将来自多个动物的组织标本合并成一个石蜡块以节省资金并简化分析时,我们首先想到了这种方法要准备斑点,首先在 15 毫升锥形管中将 50 毫克生化级 BSA 添加到一毫升组织标记染料中。
涡旋混合物至少一分钟,直至完全溶解。接下来,将 9 毫升羟乙基 aros 加工凝胶装入 15 毫升锥形管中,并在微波炉中以 30% 的功率加热。以 10 秒的增量脉冲加热,直到凝胶完全融化。
现在将熔化的加工凝胶和染料 BSA 溶液混合在一个 15 毫升锥形管中,并用移液管充分混合。然后将溶液涡旋,转移到冰箱中几个小时以凝固。硬化后,用窄刮刀轻轻释放凝胶中的固体扩张物。
将塞子切成 5 毫米厚的段。不要使用圆形的末端。将 3 到 6 个切片转移到组织学盒中,将它们浸入 70% 乙醇中,每 2 到 4 小时更换一次 70% 乙醇溶液,并在 24 小时内至少更换 3 次,直到塞子完全脱水。
它们会将一些标记染料浸出到乙醇溶液中。最初使用新鲜乙醇有助于冲洗掉一些多余的染料,从而获得更干净的塞子,不太可能浸出颜色。接下来,将透析盒转移到 80% 乙醇中,然后转移到 95% 乙醇中,在每个浴中转移 1 小时。
染料可能会从凝胶塞中泄漏,这可能会影响其他组织和自动组织脱水机中的液体试剂。因此,强烈建议手动脱水。但是,自动化处理同样有效。
用 100% 乙醇洗涤 3 次,每次 1 小时,完成脱水。在每个浴中浸泡在非烃或二甲苯中 3 次,持续 1 小时,以澄清样品。现在用三个 1 小时的浴液渗透到各个部分。
在熔融石蜡中。像往常一样嵌入处理过的切片,当块处于室温时,使用真皮打孔针制作点芯。一个块可以制作 22 毫米的内核,甚至更多 1.5 毫米的内核。
首先制作一个图表,以指示要嵌入在一起的所有单个组织块的所需位置和身份以及点的位置。准备一份副本以备不时之需。成功使用标本方向标签需要一个清晰易懂的生物样本图,该图可以准确详细说明所有生物样本的位置以及相对于该点的位置。
处理完纸巾块后,将它们排列在包埋站上。根据组织方向图,正确的方向绝对至关重要。点芯比将嵌入块中的所有组织块高也很重要。
完成组织排列后,嵌入斑点。用镊子将每个点直立,直到石蜡凝固,以免倾倒。一两分钟就足够了。
对于手动 TMA 套件,用熔化的石蜡填充 TMA 模具。当模具冷却时,以类似的方式将点连接到阵列边缘。现在切片并用污点染色切片。
使用标准方法,这里制作了 5 微米截面。要将切片放在载玻片上,请将它们漂浮在 40 摄氏度的水浴中,然后将它们转移到带正电的载玻片上。连接到载玻片上后,在 60 摄氏度下干燥至少 20 分钟。
玻片现在可以手动或在自动染色系统上染色。对于常规 h 和 d 染色,特殊染色或免疫组织化学斑点显示为颜色鲜艳的圆形。在石蜡块和所有石蜡切片中。
斑点允许在包含来自不同个体和治疗组的相似外观组织的多组织块中轻松定位和组织识别。当用于组织时,微阵列斑点允许将每个核心用于有价值的组织样品,并且可以很容易地挑选出靠近组织微阵列核心的斑点。在尝试此程序时,重要的是要记住,准确清晰地记录生物样本和块中的位置对于其成功使用至关重要。
观看此视频后,您应该对如何轻松创建和使用标本定向标签作为多组织石蜡块中的组织鉴定辅助工具有很好的了解。
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标本定位标签(SpOT)旨在帮助识别多组织石蜡包埋块中的各个组织。本文介绍了使用常规组织学材料构建SpOT的方法,以确保其作为可靠的视觉标记物。
在多组织石蜡块中实现可靠的组织识别,对于高通量组织学分析至关重要,有助于在发现性研究和转化研究中保持实验一致性及数据完整性。标本定向标签(Specimen Orientation Tag,SpOT)可实现对单个组织的精确定位与识别,减少不确定性,支持可重复且可扩展的工作流程。这一能力对于生物制药团队在基于组织的研究中最大化样本利用率并最小化操作风险至关重要。
SpOT 可整合到从样本包埋、切片到分析的组织学工作流程中,支持发现、筛选和转化研究阶段。