制备及个体表征和多载药物理截留聚合物胶束

以下实验的总体目标是概述在评估我的细胞处于感兴趣的疾病状态之前制备和表征载药细胞的分步过程。这是通过溶剂浇注方法制备 My 细胞以产生可重复的 My 细胞用于研究来实现的。第二步，评估 my 细胞加载稳定性和大小，这决定了 my 细胞加载和保留临床相关浓度的能力。

接下来，确定药物从 My 细胞中释放的速率，以确保 My 细胞在评估体内稳定性之前具有适当的体外释放特性。结果表明，可重复生成的稳定 my 细胞可以提供一个平台，根据此处介绍的评估技术，在各种疾病状态下进行药物递送。该技术或现有方法（如平衡负载或透析方法）的主要优点是，肌球蛋白的制备速度要快得多，药物负载量和大小可重复。

这项技术的影响延伸到各种疾病状态的治疗或诊断，因为纳米级药物提供了超越传统形式的机会，通常刚开始的人可能会努力使用这些技术，即使它们很简单，因为你仍然可以进行释放研究，你无法真正评估爆发效应。演示这些程序的是我的研究生 Shaman Duke 和我的合作者 Deepa首先称出 1 毫克 DTX、1 毫克 EVR 和 15 毫克 Peg 4， 000 块 PLA 2200，用于双重药物 my cells 或 DDM。称量后，将药物和聚合物溶解在 0.5 mL 乙腈中，然后使用旋转蒸发器在减压下蒸发药物聚合物乙腈溶液，将溶液转移到 5 mL 圆底烧瓶中，形成一层薄的药物分布聚合物薄膜。

然后，用 0.5 毫升预热至 50 摄氏度的去离子水对药物聚合物膜进行再水化，并在 50 摄氏度的水浴中轻轻摇动烧瓶以形成小鼠细胞。将溶液加入离心管中，以 7， 200 倍 G 离心 3 分钟。用针吸取溶液，并使用 0.2 微米尼龙过滤器将所得胶束溶液过滤到新的 1.5 毫升离心管中，以去除任何未解决的药物或污染物此时，使用在 40 摄氏度下平衡的 C 8 柱进行反相 HPLC 分析，使用乙酰基 I 试验的流动相和水稀释新鲜制备的 MyCells 在 ace Eye 试验中1：100 的比例，然后通过反相 HPLC 分析以确定初始药物载量。

未稀释的细胞在室温下储存 48 小时后，准备新鲜的稀释样品，通过反相 HPLC 重新评估，并确定 48 小时内细胞中的药物稳定性。监测 227 纳米和 279 纳米处的 DTX 和 DVR 峰，保留时间分别为 1.7 分钟和 5.7 分钟。将数据表示为药物负荷的平均值正负标准差。

接下来，以 1 比 20 的比例稀释新鲜制备的细胞和去离子水，最终聚合物浓度为 1.5 毫克/毫升。将溶液转移给兽医进行动态光散射测量。测量 173 度氦氖激光的强度以确定散射。

将数据表示为平均 Z 平均大小加上或减去标准差以及分布的多分散指数或 PDI。如前所述制备 DDM 后，将 2.5 毫升 my 细胞加载到 3 毫升透析盒中，截留分子量为每摩尔 7， 000 克。在以下时间间隔内，将透析盒放入 2.5 升 10 毫摩尔 pH 7.4 磷酸盐缓冲液中。

取出 150 微升溶液，并用 150 微升新鲜缓冲液代替。每 3 小时更改一次缓冲区，以确保同步条件。使用反相 HPLC 分析样品以确定药物浓度曲线。

使用统计软件 D-T-X-E-V-R 基于具有一相指数关联的简单扩散模型拟合药物释放数据，DDM 在 PEG 2000 块 PLA 1800 或 PEG 2000 块 PLA 2200 中显示出相似的稳定性超过 48 小时。所有这一切，我的细胞在室温下 48 小时时保留了 97% 或更多的初始负荷。根据动态光散射结果，我的所有细胞都显示出 PDI 值小于 0.2 的单峰分布。

根据数据，单个 mycells 和 DDM 的 DTX 释放在 48 小时内约为 60%。单个 my 细胞和 DDM 的 EVR 释放分别为 60% 和 50%。此处介绍了单个 my 细胞和 DDM 释放 50% 药物所需的时间以及拟合优度数据。

除了 EVR 个体之外，我的所有细胞的曲线拟合的优点都在 0.950 以上，这意味着一阶释放的假设是一个很好的近似值，可以解释单个我的细胞和 DDM 的药物释放一旦掌握了这些技术，这些技术就可以在几小时到一周内对我的细胞的药物和聚合物库进行常规处理。在执行此程序时，重要的是要记住在按照这些程序访问细胞培养物或动物模型之前完全表征 my 细胞。其他递送系统，如脂质体递送系统，也可以进行评估或表征，以回答有关药物递送系统在治疗效果中的作用的问题。

观看此视频后，您应该对如何在疾病中评估细胞之前制备和表征载药细胞有很好的了解。感兴趣的状态。