Name: 使用静态器官培养研究腭融合的方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 58 s
Description: 学习使用静态器官培养技术研究小鼠腭融合的方法。该技术通过解剖腭板并在体外培养，评估药物对腭发育的影响，为理解唇腭裂机制及开发治疗策略提供重要平台。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

作者没有需要致谢的内容。

所有所述操作步骤必须遵循脊椎动物使用相关的指南和规定，并须事先获得当地机构动物护理和使用委员会的批准。
1. 解剖器械和培养基的准备
<ol>
	<li>所有用于解剖的器械先用 3% 过氧化氢预洗，然后在 121 °C 下高压灭菌 20 分钟。在生物安全柜中，使用 0.22 µm 孔径滤膜和真空抽滤装置过滤含有抗生素和抗真菌剂的 BGJb 培养基。</li>
</ol>
2. 培养设备的准备
<ol>
	<li>将用于支撑腭器官的聚碳酸酯膜滤器剪成小三角形，用70%酒精喷洒后晾干。取中心井器官培养皿（60×15 mm），在培养皿中放置洁净且已灭菌的等边三角形金属丝网（20 mm），然后向井中加入1 ml BGJb培养基。注意：培养基的量应足以达到金属丝网的水平，但不可淹没腭组织。将膜滤器有光泽的一面朝下，放置在金属丝网上（每张网放置3–4个膜滤器）。根据实验需要，可在培养基中加入处理物（如蛋白质、抗体或抑制剂）</li>
</ol>
3. 小鼠胚胎的收集与培养前准备
<ol>
	<li>为获取野生型小鼠胚胎，使用配孕13.5天的CD-1小鼠作为遗传背景品系。用70%乙醇清洁解剖区域。 
	注意：也可使用其他小鼠品系。我们倾向于使用CD-1小鼠，因其产仔数较多。</li>
	<li>采用经批准的实验方案，以5%异氟烷麻醉后行颈椎脱位法处死E13.5 dpc（交配后天数）的怀孕小鼠，确保动物死亡。</li>
	<li>用70%乙醇喷洒腹部腹侧表面，防止腹部毛发粘附于器械上。然后使用尖头-钝头手术剪和显微解剖镊从腹侧打开腹腔，暴露子宫。用镊子提起整个子宫，并用轻便手术剪在子宫体及子宫角尖端处剪断，将其从体内分离。</li>
	<li>将子宫置于冰上铺有洁净纸巾的表面（依据实验动物护理与使用规程指南）。再用另一张洁净纸巾覆盖子宫，以防污染。在继续操作前，使用70%乙醇喷雾对器械进行灭菌。子宫及胚胎可置于冰上运送至实验室。</li>
	<li>在开放式的层流罩内，使用尖头-钝头手术剪和显微解剖镊小心地在卵黄囊上剪开一个小口。逐渐扩大切口，然后轻轻推动以使胚胎从卵黄囊中完全露出。</li>
	<li>立即将胚胎转移至含有冷的1×磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）的培养皿中。为确认发育阶段是否正确，需在解剖显微镜下观察胚胎的躯体、头部大小及肢体形态。 
	注意：发育阶段不符合要求的胚胎不得用于实验。</li>
</ol>
<img alt="显示胚胎肢体发育从E11.5到E13.5阶段的示意图。" src="/files/ftp_upload/53063/53063fig2.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图2"> 
图2. 肢芽形态学。 前肢和后肢需检查趾间蹼状结构凹陷的程度。在E13.5时，所有趾的间充质凝聚区均已明显可见，趾间的蹼状结构及远端凹陷非常清晰。后肢的发育比前肢滞后约半天。12 上排：前肢；下排：后肢。
4. 腭部解剖
<ol>
	<li>每次将一个胚胎置于含有 PBS 的培养皿中，在解剖显微镜下操作。使用小型解剖剪和镊子将胚胎的头部与身体分离。</li>
	<li>用镊子小心夹住小鼠颅骨眼平面上方部位（避免接触上颌突），在唇线两侧各做一切口。随后去除下颌骨和舌。在眼平面处进行切割，分离出上颌突区域，并移除脑组织、眼睛、鼻中隔及邻近组织。</li>
</ol>
<img alt="胚胎解剖过程示意图；包括组织切片方法及显微分析的设置。" src="/files/ftp_upload/53063/53063fig3.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图3"> 
图3.从13.5天胚胎中获取的腭组织，此时腭板已抬升但尚未接触。 将腭板置于滤膜上的器官培养系统中，在气液交界面进行静态模型培养，持续72小时。(A) E13.5胚胎的解剖层面。(B) 蓝色星号标示在解剖过程中用镊子夹持组织的区域。(C) 解剖后的腭板放置于梯形滤膜上的视图。(D) 放置解剖所得腭组织并加入培养基后，培养皿的侧面视图。
<ol start="3">
	<li>将腭部口腔面朝上放置，去除鼻中隔及其周围组织，保留初级腭以帮助确定从前往后的方向。使用勺形刮匙，小心地将腭突（鼻面朝下）转移至培养皿网格上已准备好的滤膜上。注意：调整培养基体积，以确保形成适当的气-液界面。</li>
	<li>在体视显微镜下分离初级腭，并用镊子将腭突彼此靠近放置。若腭突未接触，则不会发生融合。在滤膜的三角形区域切割，该区域对应腭部的前部。梯形形状有助于定位腭的前段部分。</li>
	<li>使用 BGJb 培养基，将腭突单独培养，或每皿两至三个共同培养于同一器官培养皿中。</li>
</ol>
5. 小鼠腭架的培养
<ol>
	<li>将组织置于37 °C、加湿的气体环境（5% CO2 和95%空气）中孵育72小时，每24小时更换一次培养基。</li>
</ol>

6. 用于组织学分析的腭部处理
<ol>
	<li>在培养 72 小时后，用 4% 多聚甲醛/磷酸盐缓冲液在 4°C 过夜固定腭板 4° C. 然后用移液管轻轻吸取PBS洗涤培养皿中的组织。将腭片用一片实验室擦拭纸包裹后放入包埋盒中。   
	注意：将腭片用实验室擦拭纸包裹，可防止其在脱水过程中丢失。</li>
	<li>依次使用70%、80%和100%乙醇脱水，每次1小时，随后进行常规石蜡包埋。包埋时，将腭部前段朝向包埋盒方向放置。</li>
	<li>连续切片 6 µm 从前往后取冠状面切片。完整的腭部切片可获得350–450张切片。使用苏木精和伊红（H&amp;E)。10 每20分评分一次th 使用先前所述的平均融合评分（Mean Fusion Score, MFS）量表（表1）进行评分。 8</li>
</ol>

<ol><li>Nawshad, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Palatal+seam+disintegration+to+die+or+not+to+die+that+is+no+longer+the+question%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Palatal seam disintegration to die or not to die that is no longer the question.</a> Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 237, 2643-2656 (2008).</li>
<li>Strong, E. B., Buckmiller, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+the+cleft+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Facial+plastic+surgery+clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Management of the cleft palate.</a> Facial plastic surgery clinics of North America. 9, 15-25 (2001).</li>
<li>Witt, P. D., Marsh, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+assessing+outcome+of+surgical+repair+of+cleft+lip+and+cleft+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+reconstructive+surgery%22%5BJournal%5D)">Advances in assessing outcome of surgical repair of cleft lip and cleft palate.</a> Plastic and reconstructive surgery. 100, 1907-1917 (1997).</li>
<li>4miloro, principles of oral and maxillofafcial surgery. 209, 231-249 (1984).</li>
<li>Mima, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+epithelial+adhesion+molecule+CEACAM1+is+important+for+palate+formation%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Regulation of the epithelial adhesion molecule CEACAM1 is important for palate formation.</a> PloS one. 8, e61653(2013).</li>
<li>Carette, M. J., Ferguson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fate+of+medial+edge+epithelial+cells+during+palatal+fusion+in+vitro+an+analysis+by+DiI+labelling+and+confocal+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">The fate of medial edge epithelial cells during palatal fusion in vitro an analysis by DiI labelling and confocal microscopy.</a> Development (Cambridge, England). 114, 379-388 (1992).</li>
<li>Ferguson, M. W., Honig, L. S., Slavkin, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+cultured+palatal+shelves+from+alligator+chick+and+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22The+Anatomical+record%22%5BJournal%5D)">Differentiation of cultured palatal shelves from alligator chick and mouse embryos.</a> The Anatomical record. 209, 231-249 (1984).</li>
<li>San Miguel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ephrin+reverse+signaling+controls+palate+fusion+via+a+PI3+kinase+dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">Ephrin reverse signaling controls palate fusion via a PI3 kinase dependent mechanism.</a> Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 240, 357-364 (2011).</li>
<li>Kang, P., Svoboda, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI+3+kinase+activity+is+required+for+epithelial+mesenchymal+transformation+during+palate+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+dynamics+an+official+publication+of+the+American+Association+of+Anatomists%22%5BJournal%5D)">PI 3 kinase activity is required for epithelial mesenchymal transformation during palate fusion.</a> Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 225, 316-322 (2002).</li>
<li>RD, L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRD%2C+L+%22Histopathologic+Technic+and+Practical+Histochemistry%22">Histopathologic Technic and Practical Histochemistry</a>. , 3rd edn, McGraw Hill Book Co. New York. (1965).</li>
<li>Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKaufman%2C+MH+%22The+Atlas+of+Mouse+Development%22">The Atlas of Mouse Development</a>. , Elsevier. (1992).</li>
<li>Taher, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+gene+expression+analysis+of+murine+limb+development%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Global gene expression analysis of murine limb development.</a> PloS one. 6, e28358(2011).</li>
</ol>

作者不存在任何竞争性经济利益。

本文所述方案提供了一种在胚胎发育第13.5天（embryonic day 13.5）从小鼠胚胎中分离腭突的方法。从小鼠胚胎中获取的腭突被置于无血清培养基中，在37 °C、95% O2 和5% CO2的气体环境中进行培养。成功的腭突分离操作在多个步骤中均受到多种因素的关键影响，从处死孕鼠时的胚胎发育时间到培养完成均需严格控制。其中，影响腭突融合的最重要因素之一是开始器官培养所需的时间；胚胎必须处于胚胎发育第13.5天，此时次级腭突呈水平方向，但尚未开始融合（图&#160;1）。
操作过程中的另一个关键步骤是从卵黄囊中取出胚胎。此步骤需格外小心，以避免对面部结构造成损伤。一旦将胚胎从卵黄囊中取出，需将头部与身体分离，并置于培养皿中，使用具有双侧光纤照明的体视显微镜进行观察。随后移除下颌和舌头，以暴露腭部。在与眼睛齐平的位置去除脑组织及残余组织。此时需特别注意腭突周围的上皮层。必须非常小心地操作组织，以保持这些细胞的完整性。上皮细胞负责黏附作用以及中缝上皮结构（MES）的形成。
<p class="jo...

口面裂是发病率最高的颅面出生缺陷。此外，若考虑所有可能的颅面缺陷，这类缺陷在新生儿中是第二常见的出生异常2。在美国（US），每年约每700例出生中就有1例发生腭裂，即每月约有475名儿童出生时患有腭裂，或每天约有15名儿童患有口面裂3。全球每年出生的儿童中，约有1%表现出某种形式的颅面畸形。
唇腭裂需要昂贵且复杂的治疗过程，对患者一生都有影响。每位口腔裂畸形患者的估计治疗费用约为100,000美元4。唇腭裂患者的治疗需要多学科医生团队协作，包括颅面外科医生、耳鼻喉科医生、遗传学家、麻醉师、言语语言病理学家、营养师、正畸医生、修复牙科医生、心理学家、神经外科医生和眼科医生。
在腭形成过程中，次级腭以成对的突起形式出现，这些突起初先垂直生长，并在舌背上方发生腭突上抬。上抬之后，左右腭突向中线方向生长（小鼠为胚胎14.5至15天，人类为第9周）。覆盖在腭突顶端的内侧边缘上皮（MEE）相互黏附，形成中线处的上皮缝。
随后发生上皮-间充质转化和/或细胞凋亡，以促进间充质融合。相对的中鼻突上皮（MEE）之间的黏附是一个关键事件，其异常可导致腭裂。然而，仅有少数研究探讨了腭突最初的黏附过程5。硬腭由间充质细胞分化为成骨细胞而形成。腭的发育异常可导致单纯性腭裂或伴有唇部受累的唇腭裂。
过去30年来，腭器官培养技术已被许多实验室广泛使用6,7。
在本方案中，我们详细描述了一种腭部解剖及静态器官培养的方法。静态器官培养的优势在于其能够使腭突融合。该技术已在我们的实验室成功用于多项融合与信号传导实验8,9。然而，该技术的应用范围广泛，凡需要静态器官培养系统的实验均可采用，包括评估外源性化学物质的反应、不同信号通路中调控性生长因子的作用以及特定蛋白质的功能。
<img alt="胚胎腭发育；扫描电镜图像序列；E11.5至E15.5的形态学变化。" src="/files/ftp_upload/53063/53063fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图1"> 
图1. 小鼠腭发生过程。 小鼠腭的发育阶段。(B-F) 次级腭在代表性发育时间点的扫描电子显微照片（SEM）。红色箭头：显示腭黏附和融合的起始部位。黄色箭头：指示初级腭与次级腭之间的间隙，该间隙将在融合后消失（经PLOS one许可转载自Kaufman11）。

<table><tbody><tr><td>BGJ&lt;sub&gt;b&lt;/sub&gt;</td><td>Invitrogen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>青霉素/链霉素</td><td>Lonza 公司</td><td>17-602E</td><td>100X</td></tr><tr><td>培养皿</td><td>VWR</td><td>25384-088</td><td>100 × 15 mm</td></tr><tr><td>中心井式器官培养皿</td><td>Falcon&amp;nbsp;</td><td>#353037</td><td>60 × 15 mm</td></tr><tr><td>金属丝三角网格</td><td>定制，采用不锈钢丝网制成，适配器官培养皿。&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>聚碳酸酯滤膜</td><td>GE&amp;amp; Water and Process Technologies</td><td>K04BP04700</td><td>黑色，孔径 0.4 微米，直径 47 mm</td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>ZEISS&amp;nbsp; Stemi SR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>超净工作台</td><td>NUAIRE 层流罩</td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微解剖镊</td><td>Dumont Medical&amp;nbsp;</td><td></td><td>#5</td></tr><tr><td>显微解剖剪</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS14003-G</td><td>Vannas 剪，直头，长 8 cm，尖端 0.1 mm，刀刃 5 mm，德国制造</td></tr><tr><td>显微解剖剪</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS500086</td><td>Vannas 剪，直头，长 8.5 cm，尖端 0.025 mm × 0.015 mm，刀刃 7 mm</td></tr><tr><td>显微解剖剪</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>INS14127-G</td><td>弹簧式弯头剪，双弯，长 10.5 cm，刀刃 8 mm，德国制造</td></tr><tr><td>外科刮匙（勺形刮刀）</td><td>Hu-friedy</td><td></td><td>CM 2/4</td></tr><tr><td>防护型实验操作罩</td><td>Labconco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>培养箱</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>Farma</td></tr><tr><td>Series11 水套式</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 培养箱</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS&amp;nbsp;</td><td>GIBCO</td><td>10010-023&amp;nbsp;</td><td>1X</td></tr><tr><td>光纤光源</td><td>Fiber-light&amp;nbsp; Dolan-Jenner</td><td>PL-750</td><td></td></tr><tr><td>包埋盒&amp;nbsp;</td><td>Statlab</td><td>EC301</td><td></td></tr><tr><td>吸水纸（Kim Wipes）</td><td>VWR</td><td>470173-504</td><td></td></tr></tbody></table>

利用静态器官培养研究腭融合的方法

Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture

唇裂和腭裂是最常见的出生缺陷之一。继发性腭由被上皮覆盖的间充质突起发育而来，这些突起黏附融合形成中线上皮缝（MES）。理论认为，MES细胞经历上皮-间充质转化（EMT）、凋亡和迁移，最终形成融合的腭1。MES的完全解体是腭融合过程的最终关键阶段，使周围间充质细胞得以汇合。我们提供了一种腭器官培养的方法。该建立的体外方案可用于研究融合过程中的生物学和分子事件。该技术具有多种应用，包括评估对外源化学物质的反应、调控因子与生长因子以及特定蛋白质的影响。腭器官培养具有多项优势，例如可在发育的不同阶段进行操作，而这是体内研究无法实现的。

该技术可应用于多种类型的实验。以下研究旨在检测尼古丁的致畸效应 体外 关于腭融合。本实验使用了两种小鼠品系，CD1 和 C57。腭组织用 0.06 和 6 mM 浓度的烟碱半硫酸盐处理。观察发现，两种不同品系小鼠的腭融合模式和时间存在差异。在 CD1 小鼠中，对照组的腭突随时间推移持续发生融合。然而，在处理组中，尼古丁延迟了融合过程，尤其是在 6 mM 尼古丁浓度下尤为明显（图 4A）。CD1小鼠腭部的组织学切片显示，对照组标本在培养72小时后完全融合。在较低浓度尼古丁处理下，腭板虽能黏附，但上皮细胞在培养3天后仍持续存在。而在高浓度尼古丁中孵育的腭板，经72小时孵育后仍未发生接触。
在C57小鼠中，对照组的腭突以时间依赖性方式持续融合。然而，当标本在尼古丁浓度为6 mM条件下孵育48小时时，C57小鼠的腭突评分高于在0.6 mM浓度下孵育相同时间的标本（图4B）。C57小鼠腭部的组织学切片显示，在处理组中，中线处持续存在连续的上皮缝。融合仅在72小时的对照组中被观察到。
<p class...

腭发育研究的动力源于腭裂的发生率，腭裂是一种出生缺陷，会给患者带来巨大的健康负担，并可能导致持久的畸形。本文展示了一种培养腭突的技术，可用于研究参与腭发育及融合过程中的不同信号通路。

唇裂和腭裂是最常见的出生缺陷之一。继发性腭由被上皮覆盖的间充质突起发育而成，这些突起……

本实验的总体目标是描述一种腭部解剖及静态器官培养的方法。首先获取小鼠胚胎以完成第一步；在第二步中，去除下颌骨并解剖分离腭部。在最后一步中，将腭突置于静态器官培养体系中进行培养。最终，通过评估培养物的平均融合评分，可以评价特定感兴趣药物对腭融合的影响。该方法有助于回答关于腭发育的关键问题，例如在融合过程中涉及哪些因素。尽管该方法可为哺乳动物小鼠腭部融合提供见解，也可应用于其他模式生物，如鸡的腭部。我的研究生玛丽亚·塞拉诺（Maria Serrano）和伊斯梅尔·易卜拉欣（Israel Ibrahim）将演示这一获取小鼠胚胎的操作步骤。首先用70%乙醇清洁妊娠13.5天的小鼠腹部腹侧表面。然后使用锋利的钝头手术剪和显微解剖镊切开腹腔。接着提起整个子宫，并使用轻便的手术剪在子宫体以及子宫角尖端处剪断，使用经乙醇消毒的锋利钝头手术剪和显微解剖镊将子宫从体腔中分离出来。小心地在卵黄囊上做一个初始的小切口，随后扩大切口，轻柔按压卵黄囊组织以使胚胎外露，立即转移胚胎至含有冷PBS的培养皿中。为逐个解剖腭部，将胚胎转移至另一盛有新鲜PBS的培养皿中，并在解剖显微镜下操作。去除第一个胚胎的头部后，用镊子小心夹住小鼠眼睛上方的颅骨，并在唇线两侧各做一切口。移除下颌骨和舌头。随后，为分离上颌突区域，在眼睛水平位置做一切口，并移除脑组织、眼睛、鼻中隔及邻近组织。将腭板鼻侧朝上放置，去除鼻中隔及周围组织，保留初级腭以维持其方向性。接着，使用勺形刮匙小心地将腭板鼻侧朝下转移至培养皿中网格上方预先准备好的滤膜上。调整培养基体积，以形成适当的气-液界面。然后在解剖显微镜下，剪开位于腭前部的三角形膜。将组织的前部定位，并用镊子将腭突彼此靠近放置。最后，将最多三个样本置于同一器官培养皿中，使用BGJB培养基在37摄氏度、5%二氧化碳条件下培养72小时，每24小时更换一次培养基。本实验利用两种不同品系的小鼠，研究了尼古丁在体外对腭融合过程的致畸效应，所用腭组织来源于CD-1小鼠。对照组处理的腭突以时间依赖的方式持续完成融合，而经尼古丁处理的腭突则表现出融合延迟，尤其在C57小鼠中，当尼古丁浓度为6毫摩尔时更为显著。对照组中的可融合腭突在48小时时也呈现时间依赖性融合，然而，仅用0.6毫摩尔尼古丁处理的C57小鼠腭突即出现融合障碍，与对照组动物的腭突相比，提示C57小鼠对尼古丁处理效应的敏感性高于CD-1小鼠。进行该方法操作时，必须牢记要小心处理组织。观看本视频后，您应能够充分掌握如何开展静态器官培养。

method-of-studying-palatal-fusion-using-static-organ-culture

Research

科研

JoVE Journal

Developmental Biology

发育生物学

使用静态器官培养研究腭融合的方法

本实验方案描述了一种分离和培养小鼠耳蜗柯蒂器官（可选择性保留或去除螺旋缘和螺旋神经节神经元）的方法。我们还展示了通过电穿孔技术在柯蒂器官外植体中表达外源报告基因的方法。...

小鼠耳蜗柯蒂氏器的原代培养与质粒电穿孔转染

我们提出了一种用于对正畸矫治器上自然形成的口腔生物膜进行结构与成分分析的实验方案，该方案结合了 原位...

通过荧光原位杂交与共聚焦激光扫描显微镜对腭部扩弓器进行口腔生物膜分析

我们旨在建立一种可重复的方案，用于分离和长期培养人菌状味蕾细胞。通过活检获取的人菌状乳头细胞在体外培养中成功维持了超过八代（12个月），且细胞活力未见下降。...

分离与培养人 fungiform 味蕾细胞

本文介绍了一种培养咽弓的实验方案，用于研究心脏和肌肉前体细胞及其微环境的生物学特性。...

离体 培养咽弓以研究心脏与肌肉前体细胞及其微环境

本文介绍了一种利用共聚焦显微镜对小鼠继发性腭融合过程进行活体成像的实验方案。该方案可与多种荧光报告小鼠品系及信号通路抑制剂联合使用，以获得机制性见解。本方案亦可适用于其他发育系统的活体成像研究。...

小鼠次级腭融合的活体成像

小鼠椭圆囊和耳蜗的三维类器官培养在光学透明的I型胶原凝胶中，可保持组织固有的形态结构，通过调节基质硬度实现机械刺激，并允许病毒介导的基因递送。...

前庭和听觉感觉器官的三维类器官培养

本文介绍了对轮廓乳头、叶状乳头和腭部味蕾进行组织制备、染色及分析的方法，这些方法能够稳定地获得完整且结构完好的全器官味蕾（包括支配味蕾的神经纤维），并维持味蕾内部各结构之间以及味蕾与周围乳头组织之间的空间关系。...

完整组织染色、可视化及味蕾分析：菌状乳头、轮廓乳头与腭部味蕾

我们介绍了一种分离和培养原代小鼠胚胎腭部间充质细胞的方案，用于进行二维（2D）生长和伤口修复实验的延时成像。同时提供了分析延时成像数据的方法，以确定细胞流的形成及定向运动能力。...

分离与原代小鼠胚胎腭间充质细胞的延时成像以分析集体运动特性

本实验方案描述了从小鼠成年腭部分离和培养口腔角质形成细胞的方法。同时报道了一种使用免疫染色进行评估的方法。...

从小鼠成年腭部分离和培养原代口腔角质形成细胞

本文提供了一项详细的实验方案，用于描述一种 体外...

人鼻上皮类器官的培养与成像

学习使用静态器官培养技术研究小鼠腭融合的方法。该技术通过解剖腭板并在体外培养，评估药物对腭发育的影响，为理解唇腭裂机制及开发治疗策略提供重要平台。

利用静态器官培养研究腭融合的方法

探索更多视频