Name: 采用双选择播放测试确定超声波发声首小鼠 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-09-03T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: 了解如何使用双选择播放测试确定小鼠对超声波发声的偏好。该方法通过记录和播放不同USV特征，评估小鼠的识别与行为反应，为研究动物通讯机制提供重要工具。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本研究得到了日本学术振兴会（JSPS）研究员项目对 A.A. 的资助；日本学术振兴会（JSPS）创新领域科学研究项目（编号 4501 和 25132712）对 T.K. 的资助；以及由麻布大学资助的研究项目支持。图 2 重印自 Kihara, T., Harada, T., &amp;#38; Koshida, N. 《纳米晶硅热诱导超声发射器的晶圆兼容制备与特性》，载于《Sensors and Actuators A: Physical》第125卷，Elsevier，第 426 页，(2006)，经 Elsevier 许可授权。

所有实验程序均经麻布大学伦理委员会批准。所有实验均在隔音室内进行。
1. 动物准备
<ol>
	<li>用于记录的雄性小鼠
	<ol>
		<li>选取性成熟且有交配经验的雄性小鼠。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>雌性实验对象
	<ol>
		<li>选取未交配过的雌性小鼠，每笼饲养 2 至 5 只同窝仔鼠（通常为 8 – 12 周龄）。</li>
		<li>根据 McLean21 的方法，在实验前每日采集阴道涂片以确定动情周期的阶段。操作时应尽量减少对阴道的刺激，以避免假孕的发生。</li>
		<li>使用吉姆萨染色法对涂片进行染色，并根据白细胞、角化上皮细胞和有核上皮细胞的存在与否判断动情周期的阶段，具体方法参照 Nelson22。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 仪器设备（图1）
<img alt="超声设置示意图；啮齿类动物行为研究、声场区域、A/D 和 D/A 转换、数据分析。" src="/files/ftp_upload/53074/53074fig1.jpg" data-altupdatedat="1787630408000" data-alt="图 1"> 
图 1. 双选择测试箱及设备示意图。 小鼠可通过位于中性区与房间 A 和 B 之间的狭小门道进入房间 A 和 B。双选择测试箱和两个超声发射器放置在隔音室的地面。麦克风悬挂在隔音室内。缩写：PC，个人计算机。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53074/53074fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<ol>
	<li>用于录音
	<ol>
		<li>使用 USB A/D 转换器将超声电容式麦克风连接到计算机。</li>
		<li>将 A/D 转换器的增益水平设置为“7”。</li>
		<li>使用音频采集软件以 16 位格式、400 kHz 采样率记录声学数据。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用于回放
	<ol>
		<li>通过 USB 接口将 D/A 转换器连接到计算机。</li>
		<li>通过衰减器将两个放大器连接到 D/A 转换器。（后者用于防止过载。）</li>
		<li>将超声波发射器连接至每个放大器。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 超声波发声（USV）记录
<ol>
	<li>将一只雄性小鼠放入一个带有侧壁孔洞（直径6 cm）的小型（17 x 10 x 11 cm）或中型（21 x 14 x 13 cm）笼子中，孔洞用0.5 cm金属网覆盖。使用中型笼子时，需在笼子中央设置隔板以减小活动区域。</li>
	<li>笼内不要使用垫料，以避免因垫料摩擦产生的噪音污染录音。</li>
	<li>将麦克风放置在金属网旁边。</li>
	<li>使用步骤2.1中所示的录音装置开始超声发声监测。</li>
	<li>将一只性成熟的、处于间情期或动情后期的雌性小鼠放入与雄性小鼠相同的笼子中。</li>
	<li>记录超声发声（USVs）3–5分钟。</li>
</ol>
4. 测试盒
<ol>
	<li>使用亚克力板构建测试箱（图1）。 
	注意：测试箱（35 × 20 × 20 cm 高）分为三个区域：一个中性区（15 × 20 cm）以及A室和B室（每个20 × 10 cm）。A室和B室的末端各设有一个直径为4 cm的孔，孔上覆盖0.5 cm的金属网。在中性区与A室、B室之间分别设置闸门（每个5 × 5 cm）。</li>
	<li>为防止声音泄漏，使用橡胶板将超声波发射器除朝向金属网的一侧外的其余部分包裹绝缘，并在每个金属网周围将橡胶板密封固定在箱体上。</li>
	<li>在A室与B室之间的隔墙两侧加装铅密封条以实现隔音。</li>
</ol>
5. 准备声音播放
<ol>
	<li>播放声音的制备
	<ol>
		<li>使用数字音频编辑软件从录音文件中截取一段20秒的超声波发声（USV）片段。</li>
		<li>从20秒的USV片段文件中选取并截取背景噪声（0.35秒），通过重复该噪声片段创建一个20秒的背景噪声文件。</li>
		<li>为同时播放两个声音文件，将它们导出为单个立体声声音文件，其中一个文件对应“左耳”，另一个文件对应“右耳”。</li>
		<li>使用截止频率为40 kHz的高通滤波器对声音文件进行滤波。</li>
		<li>在后期处理软件中使用降噪工具降低噪声。选取文件中不含USV的片段作为降噪轮廓，以等级40执行降噪处理。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>播放声音的校准
	<ol>
		<li>确保超声波发射器与麦克风之间的距离为10 cm。</li>
		<li>为校准超声波发射器发出的声音压力水平，使用步骤2.1中描述的配置进行超声监测。通过麦克风测量以分贝（dB）为单位的声音压力水平。</li>
		<li>利用衰减器和放大器，将超声波发射器产生的USV音量调节至与步骤3中记录的雄性USV相同的声音压力水平。</li>
		<li>当使用两个超声波发射器及由USV和背景噪声组成的声音文件时，在进行行为测试前，使用校准声音（e.g.，75 kHz纯音）确认两个超声波发射器具有相同的声音压力水平。</li>
		<li>当重放由两路USV组成的声音文件时，应在测试前将两个生成的声音压力水平调节至相同水平。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
6. 二选一测试
<ol>
	<li>将超声波发射器放置在测试箱的网格后方。</li>
	<li>使用丙烯酸板关闭A室和B室的门，让雌性受试动物在中性区域适应30分钟。用丙烯酸板覆盖箱子，防止小鼠逃逸。</li>
	<li>使用安装在箱子上方的CCD相机开始视频记录。该相机（未在图1中显示）覆盖所有三个隔室的区域。</li>
	<li>移除门板和覆盖板，允许雌性小鼠自由探索测试箱，包括声音区域。</li>
	<li>当雌性小鼠已探查过两个网格并返回中性区域后，开始重复播放一段20秒的声频文件，持续5或10分钟。</li>
	<li>进行5或10分钟的行为监测。</li>
	<li>为减少前一只受试动物留下的不必要嗅觉线索，每次测试之间使用70%乙醇清洁测试笼。</li>
	<li>随机交换超声波发射器A和B的位置，以避免对A室或B室产生固有的侧向偏好效应。</li>
</ol>
7. 统计分析
<ol>
	<li>使用行为事件评分软件，分析以下参数：进入每个房间的总次数；在每个中央区域停留的总时长；在每个声音区域停留的总时长；以及在超声发射器前方每个网格前搜索行为的总时长。图1展示了“中央区域”和“声音区域”的具体定义。 
	注意：当小鼠停留在两个区域之间的分界线上时（图1，虚线），应根据其头部朝向判断所在区域。若头部朝向网格一侧，则记为处于声音区域。</li>
	<li>针对每个行为参数，使用Wilcoxon符号秩检验或配对t检验（显著性水平设为0.05），比较房间A与房间B的反应差异。</li>
</ol>

<ol><li>Panksepp, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affiliative+behavior%2C+ultrasonic+communication+and+social+reward+are+influenced+by+genetic+variation+in+adolescent+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Affiliative behavior, ultrasonic communication and social reward are influenced by genetic variation in adolescent mice.</a> PLoS One. 2 (4), e351(2007).</li>
<li>Scattoni, M. L., Ricceri, L., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+repertoire+of+vocalizations+in+adult+BTBR+T%2Btf%2FJ+mice+during+three+types+of+social+encounters%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Unusual repertoire of vocalizations in adult BTBR T+tf/J mice during three types of social encounters.</a> Genes Brain Behav. 10 (1), 44-56 (2010).</li>
<li>Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+and+usage+of+female+and+male+mouse+ultrasonic+vocalizations+reveal+only+minor+differences%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The structure and usage of female and male mouse ultrasonic vocalizations reveal only minor differences.</a> PLoS One. 7 (7), e41133(2012).</li>
<li>Merten, S., Hoier, S., Pfeifle, C., Tautz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+ultrasonic+vocalisation+in+social+communication+and+divergence+of+natural+populations+of+the+house+mouse+%28Mus+musculus+domesticus%29%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A role for ultrasonic vocalisation in social communication and divergence of natural populations of the house mouse (Mus musculus domesticus).</a> PLoS One. 9 (5), e97244(2014).</li>
<li>Amato, F. R., Moles, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+vocalizations+as+an+index+of+social+memory+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic vocalizations as an index of social memory in female mice.</a> Behav. Neurosci. 115 (4), 834-840 (2001).</li>
<li>Chabout, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+male+mice+emit+context-specific+ultrasonic+vocalizations+that+are+modulated+by+prior+isolation+or+group+rearing+environment%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Adult male mice emit context-specific ultrasonic vocalizations that are modulated by prior isolation or group rearing environment.</a> PLoS One. 7 (1), e29401(2012).</li>
<li>Ehret, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infant+rodent+ultrasounds%E2%80%93a+gate+to+the+understanding+of+sound+communication%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">Infant rodent ultrasounds–a gate to the understanding of sound communication.</a> Behav. Genet. 35 (1), 19-29 (2005).</li>
<li>Holy, T. E., Guo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+songs+of+male+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic songs of male mice.</a> PLoS Biol. 3 (1), e386(2005).</li>
<li>Portfors, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Types+and+functions+of+ultrasonic+vocalizations+in+laboratory+rats+and+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Types and functions of ultrasonic vocalizations in laboratory rats and mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 46 (1), 28-34 (2007).</li>
<li>Holfoth, D. P., Neilans, E. G., Dent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrimination+of+partial+from+whole+ultrasonic+vocalizations+using+a+go%2Fno-go+task+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Acoust.+Soc.+Am%22%5BJournal%5D)">Discrimination of partial from whole ultrasonic vocalizations using a go/no-go task in mice.</a> J. Acoust. Soc. Am. 136 (6), 3401(2014).</li>
<li>Neilans, E. G., Holfoth, D. P., Radziwon, K. E., Portfors, C. V., Dent, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrimination+of+ultrasonic+vocalizations+by+CBA%2FCaJ+mice+%28Mus+musculus%29+is+related+to+spectrotemporal+dissimilarity+of+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Discrimination of ultrasonic vocalizations by CBA/CaJ mice (Mus musculus) is related to spectrotemporal dissimilarity of vocalizations.</a> PLoS One. 9 (1), e85405(2014).</li>
<li>Hammerschmidt, K., Radyushkin, K., Ehrenreich, H., Fischer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+mice+respond+to+male+ultrasonic+%E2%80%98songs%E2%80%99+with+approach+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Female mice respond to male ultrasonic ‘songs’ with approach behaviour.</a> Biol. Lett. 5 (5), 589-592 (2009).</li>
<li>Musolf, K., Hoffmann, F., Penn, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+courtship+vocalizations+in+wild+house+mice%2C+Mus+musculus+musculus%5BTitle%5D)+AND+%22Anim.+Behav%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic courtship vocalizations in wild house mice, Mus musculus musculus.</a> Anim. Behav. 79 (3), 757-764 (2010).</li>
<li>Asaba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+social+environment+imprints+female+preference+for+male+song+in+iice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Developmental social environment imprints female preference for male song in iice.</a> PloS one. 9 (2), e87186(2014).</li>
<li>Uematsu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maternal+approaches+to+pup+ultrasonic+vocalizations+produced+by+a+nanocrystalline+silicon+thermo-acoustic+emitter%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Maternal approaches to pup ultrasonic vocalizations produced by a nanocrystalline silicon thermo-acoustic emitter.</a> Brain Res. 1163, 91-99 (2007).</li>
<li>Okabe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+social+experience+and+gonadal+hormones+on+retrieving+behavior+of+mice+and+their+responses+to+pup+ultrasonic+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22Zoolog.+Sci%22%5BJournal%5D)">The effects of social experience and gonadal hormones on retrieving behavior of mice and their responses to pup ultrasonic vocalizations.</a> Zoolog. Sci. 27 (10), 790-795 (2010).</li>
<li>Okabe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pup+odor+and+ultrasonic+vocalizations+synergistically+stimulate+maternal+attention+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Pup odor and ultrasonic vocalizations synergistically stimulate maternal attention in mice.</a> Behav. Neurosci. 127 (3), 432-438 (2013).</li>
<li>Shinoda, H., Nakajima, T., Ueno, K., Koshida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermally+induced+ultrasonic+emission+from+porous+silicon%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Thermally induced ultrasonic emission from porous silicon.</a> Nature. 400 (6747), 853-855 (1999).</li>
<li>Kihara, T., Harada, T., Koshida, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wafer-compatible+fabrication+and+characteristics+of+nanocrystalline+silicon+thermally+induced+ultrasound+emitters%5BTitle%5D)+AND+%22Sensor.+Actuat.+A-Phys%22%5BJournal%5D)">Wafer-compatible fabrication and characteristics of nanocrystalline silicon thermally induced ultrasound emitters.</a> Sensor. Actuat. A-Phys. 125 (2), 422-428 (2006).</li>
<li>Kikusui, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross+fostering+experiments+suggest+that+mice+songs+are+innate%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Cross fostering experiments suggest that mice songs are innate.</a> PloS One. 6 (3), e17721(2011).</li>
<li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+Vaginal+Lavage%2C+Crystal+Violet+Staining%2C+and+Vaginal+Cytological+Evaluation+for+Mouse+Estrous+Cycle+Staging+Identification%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification.</a> J. Vis. Exp. (67), e4389(2012).</li>
<li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+I.+Cycle+frequency%2C+length+and+vaginal+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li>
<li>Tomihara, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+ER-beta+gene+disruption+on+estrogenic+regulation+of+anxiety+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Effect of ER-beta gene disruption on estrogenic regulation of anxiety in female mice.</a> Physiol. Behav. 96 (2), 300-306 (2009).</li>
<li>Zheng, Q. Y., Johnson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hearing+loss+associated+with+the+modifier+of+deaf+waddler+%28mdfw%29+locus+corresponds+with+age-related+hearing+loss+in+12+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hear.+Res%22%5BJournal%5D)">Hearing loss associated with the modifier of deaf waddler (mdfw) locus corresponds with age-related hearing loss in 12 inbred strains of mice.</a> Hear. Res. 154 (1-2), 45-53 (2001).</li>
<li>Haga, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+male+mouse+pheromone+ESP1+enhances+female+sexual+receptive+behaviour+through+a+specific+vomeronasal+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The male mouse pheromone ESP1 enhances female sexual receptive behaviour through a specific vomeronasal receptor.</a> Nature. 466 (7302), 118-122 (2010).</li>
<li>Grimsley, J. M., Monaghan, J. J., Wenstrup, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+social+vocalizations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Development of social vocalizations in mice.</a> PLoS One. 6 (3), e17460(2011).</li>
<li>Sugimoto, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+strain+differences+in+waveforms+of+ultrasonic+vocalizations+during+male-female+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">A role for strain differences in waveforms of ultrasonic vocalizations during male-female interaction.</a> PLoS ONE. 6 (7), (2011).</li>
<li>Hanson, J. L., Hurley, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+presence+and+estrous+state+influence+mouse+ultrasonic+courtship+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Female presence and estrous state influence mouse ultrasonic courtship vocalizations.</a> PLoS One. 7 (7), e40782(2012).</li>
<li>Wang, H., Liang, S., Burgdorf, J., Wess, J., Yeomans, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+vocalizations+induced+by+sex+and+amphetamine+in+M2%2C+M4%2C+M5+muscarinic+and+D2+dopamine+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic vocalizations induced by sex and amphetamine in M2, M4, M5 muscarinic and D2 dopamine receptor knockout mice.</a> PLoS One. 3 (4), (2008).</li>
<li>Moles, A., Kieffer, B. L., D'Amato, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deficit+in+attachment+behavior+in+mice+lacking+the+mu-opioid+receptor+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Deficit in attachment behavior in mice lacking the mu-opioid receptor gene.</a> Science. 304 (5679), 1983-1986 (2004).</li>
<li>Hiramoto, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tbx1%3A+identification+of+a+22q11.2+gene+as+a+risk+factor+for+autism+spectrum+disorder+in+a+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Tbx1: identification of a 22q11.2 gene as a risk factor for autism spectrum disorder in a mouse.</a> Hum. Mol. Genet. 20 (24), 4775-4785 (2011).</li>
<li>Ey, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Absence+of+deficits+in+social+behaviors+and+ultrasonic+vocalizations+in+later+generations+of+mice+lacking+neuroligin4%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Absence of deficits in social behaviors and ultrasonic vocalizations in later generations of mice lacking neuroligin4.</a> Genes Brain Behav. , (2012).</li>
<li>Roy, S., Watkins, N., Heck, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+analysis+of+ultrasonic+vocalizations+in+a+mouse+model+of+fragile+X+syndrome+reveals+limited%2C+call+type+specific+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comprehensive analysis of ultrasonic vocalizations in a mouse model of fragile X syndrome reveals limited, call type specific deficits.</a> PLoS One. 7 (9), e44816(2012).</li>
</ol>

作者声明不存在任何竞争利益。

本实验的代表性结果表明，雌性小鼠能够区分人工雄性超声 vocalization（USVs）与背景噪声（图3）。从这些结果可以得出结论：小鼠的辨别行为体现在其在房间和声音区域停留的时间，以及在测试前5分钟内对网格区域的搜寻时间，但在第二个5分钟内则无此表现（图3C、E和F）。这些数据表明，小鼠对播放的声音产生了习惯化，可能是因为在超声发射器附近缺乏真实的社会互动。因此，最佳测试时长为5分钟。
这些发现或许可以解释一个现象，即超声波发声（USVs）可能仅仅是“比噪声听起来更新颖”。然而，之前的一项回放研究表明，雌性小鼠会被雄性超声波发声的声音所吸引，但不会被新颖的人工声音吸引12。因此推测，仅仅具有新颖性的声音对雌性小鼠并不具备吸引力。
与预期一致，超声波发声（USV）偏好依赖于动情周期的阶段，因为中等水平的雌激素会增强对雄性的社交探查行为23。先前一项研究发现，处于动情前期或动情期的雌性并未表现出对本研究中观察到的异品...

许多动物利用发声进行种内交流。在小鼠 Mus musculus 中，一种重要的交流信号是超声波发声（USVs），其频率高于 20 kHz。小鼠发出的超声波发声被认为在雄性-雌性1-4、雌性-雌性1, 5 和雄性-雄性1, 6 的互动中参与社会识别过程。当幼鼠与母鼠分离时，也会发出超声波发声，从而增强母鼠的捡回行为，进而提高幼鼠的存活率7。尽管已有大量研究对小鼠的超声波发声进行了分析和分类8,9，但接收个体的行为反应及其神经机制的报道相对较少10, 11。后者对于阐明超声波发声各种特征的生物学意义至关重要。为了揭示这些机制，回放实验是一种高效的方法。近期的回放研究表明，雌性小鼠会被超声波发声所吸引12，并且更偏好来自与其亲本不同的雄性小鼠的超声波发声13, 14。
本文介绍了用于评估小鼠对超声波发声（USV）偏好的回放测试。设计了一种双选择测试箱，可在测试 enclosure 的两个隔间内同时播放两种不同的超声波发声，如图1所示。该类型的测试箱通过使用铅板将测试区域分隔为三个子腔室，从而防止声音交叉污染。超声波发射器位于每个房间的外部。在房间与超声波发射器之间的墙壁上设有小孔，小孔覆盖有金属网。小鼠可在三个房间内自由活动，并表现出“寻找金属网”的行为，仿佛对超声波发射器回放的超声波发声作出反应。在此测试中，小鼠会在不同时间段内停留在某一声音发射器附近或另一发射器附近。这些参数可被记录下来，以获得对声音偏好的敏感测量指标。
为了回放小鼠超声 vocalizations（USVs），采用纳米晶硅热声发射器（即“nc-Si 发射器”），方法与先前研究一致15-17。该装置由一层薄膜加热电极、一层纳米多孔硅层以及一片单晶硅晶圆组成。数字音频文件被转换为模拟信号后，通过加热电极传递。该装置将随之产生的电压依赖性热信号转化为具有低失真的显著声压。此装置的独特之处在于，不同于依赖机械振动的常见声音发生器，它无需振膜即可重现声音。该发射器在 20 至 160 kHz 频率范围内表现出平坦的声压级（图 2），并能在持续时间、频率和声压级方面非常准确地重放数字记录的小鼠超声 vocalizations（USVs）15, 18, 19。
在 图3 所示的一个代表性实验中，C57BL/6（B6）雌性小鼠被允许在BALB/c（BALB）雄性小鼠的超声发声（USVs）与背景噪音之间进行选择。此外，图4 展示了B6和BALB雌性小鼠在同时播放的BALB雄性与B6雄性USV之间的选择行为，该结果来自先前的一项研究14。B6与BALB品系雄性小鼠的USV特征存在差异20。这些结果表明，利用本实验方案可以评估USV的吸引力，该方案包括从活体个体中记录声音、进行声学分析，并将声音回放给其他个体。

<table><tbody><tr><td>隔音室</td><td>Muromachi Kikai</td><td></td><td></td></tr><tr><td>小型笼具</td><td>CLEA Japan</td><td>CL-0113-1</td><td></td></tr><tr><td>中间笼位</td><td>CLEA Japan</td><td>CL-0103-1</td><td></td></tr><tr><td>超声波电容式麦克风</td><td>Avisoft Bioacoustics</td><td>CM16/CMPA</td><td></td></tr><tr><td>A/D转换器</td><td>Avisoft Bioacoustics</td><td>UltraSoundGate116H</td><td></td></tr><tr><td>音频软件</td><td>Avisoft Bioacoustics</td><td>RECORDER USGH</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Audition 3.0 / 音频编辑软件</td><td>Adobe 系统公司</td><td>Adobe Audition 3.0</td><td></td></tr><tr><td>非晶硅发射极</td><td>原始</td><td></td><td>目前尚未商业化，但预计在不久的将来会实现商业化</td></tr><tr><td>D/A转换器</td><td>国家仪器公司</td><td>NI USB-6251 BNC</td><td></td></tr><tr><td>衰减器</td><td>原始</td><td></td><td></td></tr><tr><td>放大器</td><td>Yamatake</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PC</td><td>Windows 7 专业版</td><td></td><td>英特尔&amp;reg; 酷睿 i7-2600K 处理器 @ 3.4GHz，8GB 内存，64 位操作系统</td></tr><tr><td>事件记录器 Excel宏 / 事件评分软件</td><td>原始</td><td></td><td>由 Naoto Akagawa 编程 &amp;& Takeru Yamamoto</td></tr><tr><td>CCD相机</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>橡胶板（由弹性体树脂制成）</td><td>东京暴乱</td><td>TI-75BK B4</td><td>将它们裁剪至合适尺寸 http://www.piano-bouon.jp/shopping/?pid=1329272401-447630&amp;amp;ca=6&amp;amp;p=3</td></tr><tr><td>吉姆萨伊红亚甲蓝溶液</td><td>默克密理博</td><td>1.09204.0500</td><td></td></tr></tbody></table>

利用双选择回放测试确定小鼠超声波发声偏好

Determining Ultrasonic Vocalization Preferences in Mice using a Two-choice Playback Test

小鼠在多种情况下会发出超声波叫声（USVs），例如幼崽隔离和成年个体之间的社交互动。这些超声波叫声会因发声动物的年龄、性别、状态和遗传背景而有所不同。尽管已有大量研究对这些差异进行了表征，但尚不清楚接收叫声的小鼠是否能够区分客观上不同的超声波叫声，并对某些特定的声音特征表现出偏好。为了确定小鼠是否能够区分超声波叫声的不同特征，近期开发了一种回放实验，可通过位置偏好来评估小鼠对两种不同超声波叫声的偏好反应。
首先，记录小鼠的超声波发声（USVs）。然后，对记录到的超声波发声进行编辑，按需裁剪，并导出为立体声音频文件。接下来，调节实验中使用的两个超声发射器所生成的USV振幅，使其达到相同的声音压力水平。采用纳米晶硅热声发射器回放超声波发声。最后，为了研究受试小鼠对特定超声波发声的偏好，在双选择测试箱中同时回放两种不同的USV信号。小鼠通过反复进入靠近某一超声发射器的指定区域，并在该发射器前方的金属丝网处搜寻，表现出对其中一种声音的偏好。该模型可用于在不同情境下比较小鼠超声波发声各种特征的吸引力。

在代表性实验中（见图3），播放声音采用了一只BALB雄性小鼠记录到的超声发声（每20秒161个音节）以及背景噪声。本实验使用了7只9周龄的B6品系雌性小鼠。为确定雌性小鼠对播放声音反应的最佳测试时长，将整个10分钟测试时间分为前5分钟和后5分钟，分别分析其行为参数。
首先，在播放前的探索时间内，小鼠在A室和B室的总停留时间无显著差异(图3A)，表明不存在侧向偏好。结果还显示，在分析前5分钟、后5分钟及整个测试时间时，背景噪声侧与雄性超声 vocalization（USVs）侧在进入房间次数上均无差异（图3B）。图3C展示了播放期间在各房间的累计停留时间（即在中央区域和声音区域的总停留时间）。在分析前5分钟（p = 0.043）或整个测试时间（p = 0.043）时，实验对象在BALB品系雄性USVs侧的停留时间显著长于背景噪声侧。但在分析最后5分钟时，这些参数无显著差异。在中央区域，背景噪声侧与雄性USVs侧之间也无显著差异（<s...

小鼠的超声波发声（USVs）因年龄、性别、状态和遗传背景的不同而有所差异。通过在不同位置同时使用两个超声波发射器，这种双选择测试可评估小鼠对USVs不同特征的识别和偏好反应。

小鼠在多种情况下会发出超声波叫声（USVs），例如幼崽隔离和成年个体之间的社交互动。这些超声波叫声随年龄而变化，……

本实验的总体目标是通过双选择回放测试，确定小鼠对超声波发声（USV）的偏好。首先，从活体个体中记录超声波发声信号；其次，对记录的 USV 进行编辑和裁剪，并生成立体声音频文件。接下来，校准超声波发射器并调整超声刺激音量。通过衰减器和放大器调节后，最后一步是将实验小鼠放入测试箱中，同时播放两个声音文件。最终，通过行为监测可判断小鼠是否对其中一种声音表现出偏好。我们开发的超声波发射器有助于回答有关我的轮辐通信的关键问题，例如参与者以及不同类型超声波通信的生物学意义。与现有的帕佐电动换能器等设备相比，我们的压电发射器主要优势在于其频率响应没有共振峰。在超声波频段内实现宽带平坦响应且无谐波失真，使得该发射器可用于重现复杂的声学通信信号。通过该方法可深入了解雌性对雄性或同性的反应。该方法也可应用于其他类型的社会互动研究，例如母体与幼崽之间、成年雄性之间以及成年雌性之间的互动。实验开始时，获取性经验丰富的雄性小鼠和未交配过的雌性小鼠，并通过每日采集阴道涂片追踪雌鼠的动情周期。根据标准操作程序，使用吉萨染液对涂片进行染色，并确定esra周期的阶段。为记录超声波发声（USVs），请将超声电容式麦克风通过USB音频转换器连接至计算机。将模数转换器的增益水平设置为7，以16位格式记录声学数据。使用音频采集软件以400千赫兹的采样率对文件进行格式化。将数模转换器连接到计算机，然后通过衰减器将两个放大器连接到数模转换器。准备一个小型笼子，在侧壁上开一个直径为6厘米的孔，并用0.5厘米的金属网覆盖该孔。避免使用垫料或任何可能产生沙沙声并污染录音的物品。将超声波麦克风放置在覆盖有网孔的孔洞旁边。准备就绪后。将一只雄性小鼠和一只性成熟的雌性小鼠放入笼中，使其处于动情间期或动情后期。记录其超声波发声（us）3至5分钟。测试箱被划分为三个区域：一个中立区以及A室和B室。中立区与其他两个房间相互隔开。A室和B室的末端各有一个直径四厘米的孔，孔上覆盖有金属网。将超声波发射器紧贴网格，并用橡胶板包围，以防止声音泄漏。在A室与B室之间墙体的两侧放置铅密封条，以实现隔音并生成播放声音。从先前录制的文件中截取第22段USB信号。使用数字音频编辑软件，从该片段中选取并提取背景噪声，通过重复该噪声片段以播放两个声音文件，创建第22个背景噪声文件。同时将它们导出为单个立体声声音文件，其中一个文件用于左耳，另一个文件用于右耳。使用截止频率为40 kilohertz的高通滤波器对声音文件进行滤波。使用降噪工具降低噪声。在后期处理软件中，选择并截取一段不包含超声波发声信号（US VS）的文件片段作为噪声降噪轮廓，并以40级强度执行降噪，以校准回放期间的声学水平。首先将麦克风放置在距离超声波发射器10厘米的位置。开始播放，并测量以分贝为单位的声压级。使用衰减器和放大器调节超声波发射器产生的超声波音量，使其声压级与雄性超声波的声压级相同。先前已记录。通过播放包含两路超声信号的声音文件并使用校准音，确认两个超声发射器具有相同的声音压力水平。调节两个发射器产生的声音压力水平，使其达到一致。开始进行双选测试时，关闭房间A和B的门，并让雌性受试动物在中性区域适应环境。用丙烯酸板覆盖盒子30分钟，以防止其逃逸。30分钟后，使用安装在盒子上方的摄像机全程记录实验过程。移除隔门，使雌性动物能够自由探索测试箱的其余区域，包括声音区域。待雌性动物探查过两个网格圆形区域并返回中性区域后，开始播放先前准备好的第22号声音文件。在重复播放该声音文件的同时，持续监测动物行为5至10分钟。随机切换超声发射器的位置，以避免两个房间之间产生侧向偏差。在允许雌性小鼠探索两个房间后再播放声音之前，它们对房间A和房间B未表现出偏好。含有背景噪声或雄性超声的房间之间的进入次数相似。然而，受试对象在重新生成 us vs 的区域停留的时间显著更长，尤其是在前五分钟内。声音回放对中央区域的探索行为没有产生影响。雌性小鼠在播放雄性超声波（US）的隔间内停留的时间显著更长，并且更多地探索该隔间的金属网，尤其是在前五分钟内，无论是B6还是BUB品系的雌性均表现出此行为。雌性小鼠花更多时间探究与另一品系雄性超声波配对的一侧。观看本视频后，您应能很好地理解如何利用双选口味测试来确定小鼠对喷雾剂的偏好。该技术在建立之后，为品牌研究领域的研究人员探索声音与人类互动的关系铺平了道路。小鼠的超声 vocalizations（USV）会因年龄、性别状况和遗传背景的不同而有所差异。通过此步骤，可测量转基因组织的USB谱型，以确定发送和保存的USB是否发生改变。

determining-ultrasonic-vocalization-preferences-mice-using-two-choice

Research

科研

JoVE Journal

Behavior

行为

采用双选择播放测试确定超声波发声首小鼠

小鼠的超声波发声被用作研究神经精神疾病小鼠模型中发声交流障碍遗传基础的替代指标。本实验方案描述了三种能够可靠诱发幼鼠（贯穿发育过程）和成年小鼠（同性别互动、雄性与发情雌性互动）产生超声波发声的实验情境。...

记录小鼠超声波发声以评估社交交流

小鼠能够发出复杂且包含多个音节的超声波发声（USVs）。这些超声波发声被广泛用作神经精神疾病的研究指标。本实验方案描述了我们在持续诱导、采集和分析小鼠鸣叫声的声学特征与发声序列结构过程中总结并发展出的一些实践方法。...

诱发与分析雄性小鼠超声 vocalization（USV）鸣唱

十字迷宫用于测量啮齿类动物的类焦虑行为。该装置包含两条相对的封闭臂和两条相对的开放臂，焦虑的啮齿类动物会回避开放臂。中央区域既非完全开放也非完全封闭，因此在此区域停留的时间具有模糊性，难以解释。本文介绍了一种改进的十字迷宫方案，消除了这一中央区域。...

小鼠和大鼠焦虑的连续通道测试

本文介绍了一种利用视频分析系统评估小鼠恐惧学习与记忆的场景性和提示性恐惧条件反射实验方案。...

使用视频分析系统对小鼠进行情境与线索性恐惧条件反射测试

本方案描述了改良型孔板装置，这是一种行为测试装置，结合了开放场和传统孔板的特点。该装置能够对小型实验哺乳动物的非条件性行为进行差异分析，同时也能用于分析其认知能力。...

改良型孔板实验——测量小鼠和大鼠的行为、认知与社会互动

以往关于压力社会维度的研究主要集中在两个重要变量上：社会认同和社会支持。本实验方案介绍了一种有效操控这两个社会变量的方法，并描述了如何将其应用于标准的压力诱导范式（特里尔社会压力测试）中。...

压力的社会维度：在特里尔社会应激测试中对社会支持与社会认同的实验性操控

甜味对所有年龄段的人群，尤其是儿童，具有强烈的享乐吸引力。本文介绍了一种可靠且有效的方法，可用于确定最受偏好的甜度水平，使其成为科研人员有价值的心理物理学工具。...

用于测量儿童与成人味觉偏好的心理物理学追踪方法

本文描述了一种大鼠版本的人类心理运动警觉性测试（PVT），用于测量与人类PVT所评估的相似的注意力特征，包括人类警觉性的多个方面，如行为准确性、运动速度、过早反应以及注意力 lapses（ lapses...

啮齿类心理运动警觉性测试（rPVT）：一种评估大鼠和小鼠神经行为表现的方法

物体识别实验（ORT）是一种用于评估小鼠学习和记忆能力的简单且高效的检测方法。该方法的具体步骤如下所述。...

小鼠学习与记忆研究中的新物体识别实验

本方案描述了条件性位置偏爱（Conditioned Place Preference,...

使用条件性位置偏爱范式在小鼠中重建觅药行为

了解如何使用双选择播放测试确定小鼠对超声波发声的偏好。该方法通过记录和播放不同USV特征，评估小鼠的识别与行为反应，为研究动物通讯机制提供重要工具。

利用双选择回放测试确定小鼠超声波发声偏好

探索更多视频