Name: 人的股外侧肌骨骼肌活检使用韦尔 - Blakesley Conchotome (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 16 s
Description: 学习使用韦尔-布拉克斯利圆锥刀进行股外侧肌经皮肌肉活检技术。该方法安全有效，可获取足够组织用于组织化学和分子分析，同时最大程度减少受试者不适和创伤。

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我们感谢研究参与者使本工作得以实现，并感谢南安普顿大学医院国家健康研究所（NIHR）南安普顿生物医学研究中心和惠康信托临床研究设施的工作人员在研究测量方面提供的协助。
本工作由南安普顿国家健康研究所（NIHR）生物医学研究中心营养项目、医学研究理事会生命历程流行病学单位以及南安普顿大学资助。本报告属于NIHR BRC资助计划的独立研究。本出版物中表达的观点为作者个人观点，并不代表英国国家医疗服务体系（NHS）、国家健康研究所（NIHR）或卫生部的观点。AMB获得NIHR临床研究奖学金支持，HPP获得南安普顿国家健康研究所生物医学研究中心支持。

伦理声明：以下介绍的是本机构目前遵循的肌肉活检操作流程。该肌肉活检操作用于赫特福德郡肌少症研究（Hertfordshire Sarcopenia Study），该研究已获得赫特福德郡研究委员会（编号 07/Q0204/68）的批准。所有参与者均签署了书面知情同意书20。 
注意：该操作可由一名操作者独立完成，但建议配备一名助手，通过与参与者交谈以减轻其焦虑情绪，并确保其在整个过程中保持舒适。操作室应配备洗手池、高度可调节的检查床、清洁的操作表面以及操作推车。
1. 准备受试者（图2）
<ol>
	<li>让受试者舒适地仰卧在检查床上。暴露从腹股沟皱褶开始的偏好侧大腿。在暴露的大腿下方铺一张一次性吸水垫。确保在整个操作过程中腿部保持伸直和放松，但需短暂绷紧大腿以勾勒出股外侧肌（vastus lateralis）的轮廓。</li>
	<li>在从髂前上棘到髌骨的假想连线约下三分之二处标记操作部位。</li>
</ol>
2. 准备皮肤（图2）
<ol>
	<li>将皮肤剃至约4 cm&#160;用无菌剃须刀在预定活检部位周围直径范围内剃净，并用酒精棉片清洁皮肤。 
	注意：这是为了防止在愈合过程中毛发进入伤口。此步骤可根据操作者的偏好选择是否执行。</li>
	<li>用局部麻醉剂浸润皮肤及浅筋膜。使用25 G针头在皮下形成2%利多卡因水疱，随后用23 G针头进一步向皮下组织深部浸润。进针深度应达到约0.5至1英寸，具体取决于活检部位皮下组织的厚度。此深度足以确保浅筋膜被充分麻醉。等待2至5分钟&#160;待麻醉剂起效。用针头或手术刀片尖轻轻探触皮肤，确认麻醉效果。</li>
</ol>
3. 准备无菌区域（图2）
<ol>
	<li>用肥皂洗手，并在穿戴无菌手术衣前始终保持双手清洁。在操作推车上建立无菌区域前，先戴上无菌手套覆盖双手。</li>
	<li>使用2%氯己定/异丙醇溶液或含碘皮肤消毒剂对活检部位进行消毒。铺设带有粘性开口的无菌洞巾，以暴露活检部位，同时维持无菌区域。</li>
</ol>
4. 执行实验步骤（图 2）
<ol>
	<li>使用11号手术刀，在皮肤上做一道5 - 10 mm的切口，并切开其下方的筋膜。将耳钳的闭合钳端以垂直于股骨长轴的方向，经切口插入肌肉，深度约为半英寸至一英寸。必要时，用非持钳手固定并支撑 biopsy 部位周围的 thigh。在肌肉内打开并闭合耳钳钳端时，可借助手部稳定操作。</li>
	<li>将耳钳旋转90 - 180°以切断肌肉组织。退出耳钳后，将其钳端打开至无菌纱布上，纱布应预先用无菌生理盐水润湿。若需要，可在同一伤口部位重复操作，以获取足够的肌肉组织。将带有组织的纱布转移至置于冰上的容器中，并立即将容器送至制备实验室，按照本机构的本地操作规程处理肌肉样本。</li>
</ol>
5. 术后处理（图2）
<ol>
	<li>对伤口施加直接压力，持续长达5分钟。使用免缝胶带闭合伤口时，应将胶带平行于伤口方向粘贴，避免与伤口呈直角粘贴，以防不慎撕脱胶带时牵拉瘢痕组织，导致伤口重新裂开。在免缝胶带上覆盖无菌吸收性敷料，并用两层绷带进行加压包扎，最后用胶布固定。</li>
	<li>向受试者详细说明伤口敷料更换方法，因其需在术后3至4天自行更换敷料。确保受试者在当天晚上就寝前取下加压绷带。</li>
</ol>
6. 活检后建议
<ol>
	<li>告知受试者，出现一定程度的大腿僵硬是常见现象，可通过轻柔的运动缓解例如．，行走）。使用简单的镇痛药，如对乙酰氨基酚。告知参与者，穿刺部位周围可能出现短暂麻木，持续时间最长可达两周，同时提醒其存在伤口感染等潜在并发症的风险。</li>
</ol>
7. 受试者操作后指导说明
<ol>
	<li>要求受试者在 72 小时内避免剧烈活动（如爬山、跑步、提重物）。要求受试者在 48 至 72 小时内避免浸入水中。然而，应指导受试者在淋浴时用保鲜膜或类似材料包裹活检部位，以保持敷料干燥。</li>
	<li>要求受试者在 3 至 4 天后更换敷料，并在一周后移除免缝胶带。 
	注意：应向受试者提供书面的活检后护理说明、备用敷料以及负责实施该操作的团队的紧急联系方式。</li>
</ol>

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</ol>

未声明任何事项。

为了确保受试者的安全并高效地进行肌肉活检，必须关注方案中的关键步骤。
必须在仔细考虑排除标准后选择受试者，以避免出血和伤口愈合不良等并发症。整个操作过程中必须严格保持无菌。采用正确的技术可确保受试者的舒适性，最大限度减少对受试者组织的不必要损伤，并获得足够的样本量用于分析。有时可能难以获取肌肉样本，尤其是当受试者皮下脂肪组织过多时。即使在仔细筛选受试者后，仍可能出现过度出血，在此情况下应决定是否继续操作。可能需要对伤口部位施加长达5分钟的直接压力&#160;，以促进止血并减少瘀伤。另一种减少出血的方法是使用含肾上腺素的利多卡因，这会引起局部血管收缩。然而，肾上腺素可能干扰后续分析，必须谨慎使用。作者倾向于在本操作中不使用肾上腺素。
得益于显微技术、图像分析、组织化学和分子分析方法的进步，可在肌肉组织中进行多种分析，包括评估肌肉形态学 例如纤维组成、纤维横截面积、血管化程度、单根纤维收缩活性、RNA分析、蛋白质分析以及酶活性分析 23,24,25,19,26,27 尽管肌肉活检在肌病的临床...

获取骨骼肌组织用于肌病及其他神经肌肉退行性疾病的诊断，依赖于安全、高效且对患者可接受、不致残的方法1。历史上，用于分析的肌肉组织获取方法包括在全身麻醉下进行的开放性活检或尸体解剖获取。这些技术可直接观察肌肉，并能获取较大块的肌肉组织用于活检。然而，由于这些方法可能带来住院时间较长和恢复期较长等不利影响，经皮“半开放”肌肉活检技术被引入作为替代方案。该技术最早由杜兴（Duchenne，1806–1875）实施，他使用自制的带有套管针的穿刺针，能够在无需全身麻醉的情况下从活体受试者中获取肌肉样本2。此后，多种类型的活检针被陆续应用3,4,5。然而，自1962年伯格斯特伦（Bergstrom）设计的活检针问世以来，因其在儿童和成人临床实践以及科研中的广泛应用，已成为最常用的活检工具6,7,8,9,10。该活检针包含一个锋利的套管针、一个切割用的套管以及一根用于活检后推出组织的推杆。据报道，采用该方法经多次取样后获得的肌肉组织产量可达25–293 mg11,9。
Henriksson 于1979年引入了Weil-Blakesley肌锥切刀，作为一种半开放式肌肉活检方法的替代方案（图1）12。该器械为单一结构，不同于Bergstrom设计，其外形类似一把镊子，带有锋利的咬合尖端。咬合尖端的宽度范围为4 mm至6 mm。当咬合尖端的两个边缘闭合时，会形成一个空腔，以确保捕获肌肉组织。肌锥切刀通过5–10 mm的皮肤切口插入，无需使用套管针穿透肌肉及覆盖的筋膜，因为可使用手术刀直接切开通路至肌肉。
该方法可实现高度灵活操控下的可控组织穿透 13,14 对于可能因过度压力而损伤神经血管或深层骨性结构的部位尤为适用 例如.，位于胫骨前肌处 15,14使用贝壳状活检钳获取的肌肉组织产量可能存在差异，在我们的实践中，经过多次取样后可获得20–200 mg的肌肉组织。与Bergstrom穿刺针相比，贝壳状活检钳除具有更高的操作灵活性外，另一个潜在优势在于其咬合头无需像Bergstrom装置的套管针那样频繁地进行 sharpening 或更换。 16 .
使用Weil Blakesley环钻进行肌肉活检的总体目标是获取足量的肌肉组织，以进行组织化学和分子分析，用于诊断和科学研究。该操作简单、安全，易于掌握。采用此技术时，适用于活检的肌肉包括肱二头肌、肱三头肌、三角肌、腓肠肌、胫骨前肌、比目鱼肌以及骶棘肌17,15,7,18,14。vastus lateralis的最外侧区域是最常用的活检部位，因其可避开大腿内的主要神经血管结构。该部位位于连接髂前上棘与髌骨的假想连线约下三分之二处。vastus lateralis取样所得的肌肉形态学数据（例如肌纤维面积、肌纤维比例、毛细血管密度）在文献中广泛可查，便于不同研究之间的比较11,19。

<table><tbody><tr><td>韦尔-布莱克斯利肌肉活检钳</td><td>Gebr&amp;uuml;der Zepf Medizintechnik, D&amp;uuml;rbheim, Germany</td><td>无</td><td>6 mm 切割头</td></tr><tr><td>5 ml 2% 利多卡因</td><td>通用</td><td>无</td><td>一支 5 ml 安瓿足以实现充分麻醉</td></tr><tr><td>酒精棉片</td><td>通用</td><td>无</td><td></td></tr><tr><td>5 ml 注射器</td><td>通用</td><td>无</td><td></td></tr><tr><td>25 G 和 23 G 无菌针头</td><td>通用</td><td>无</td><td></td></tr><tr><td>无菌11号手术刀片</td><td>通用</td><td>无</td><td></td></tr><tr><td>无菌纱布块</td><td>通用</td><td>无</td><td></td></tr><tr><td>0.9% 氯化钠溶液 10 ml</td><td>Fannin</td><td>1122/002/001</td><td></td></tr><tr><td>Steri-Drape&amp;trade; 小型带粘性开口的无菌手术巾</td><td>3M</td><td>1020</td><td></td></tr><tr><td>ChloraPrep 2% w/v /70% v/v 皮肤消毒液&amp;nbsp;</td><td>CareFusion</td><td>270400</td><td>两支</td></tr><tr><td>Steri-Strip&amp;trade; 1/4 英寸 × 3 英寸 加强型粘合性皮肤缝合条</td><td>3M</td><td>R1541</td><td></td></tr><tr><td>PRIMAPORE 无菌敷料 15 cm × 8 cm</td><td>Smith &amp;amp;&amp;nbsp;&lt;br/&gt; Nephew</td><td>66000318</td><td></td></tr><tr><td>棉质弹力绷带 Hospicrepe 233 7.5 cm × 4.5 m</td><td>Hartmann</td><td>915562</td><td></td></tr><tr><td>柔性自粘绷带 Co-Plus LF</td><td>BSN medical</td><td>2904565</td><td></td></tr><tr><td>一次性吸收垫</td><td>通用</td><td>无</td><td></td></tr><tr><td>Micropore 或 Transpore 胶带</td><td>通用</td><td>无</td><td></td></tr><tr><td>无菌手术衣及无菌纸巾</td><td>通用</td><td>无</td><td></td></tr><tr><td>无菌手套</td><td>通用</td><td>无</td><td></td></tr></tbody></table>

人类 股外侧肌 使用weil-blakesley conchotome进行骨骼肌活检

Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome

采用Weil-Blakesley骨钳进行经皮肌肉活检在临床和科研实践中已得到广泛应用。该技术安全、有效且耐受性良好。Weil-Blakesley骨钳具有锋利的咬合尖端，其空心部分宽4–6 mm，可通过5–10 mm的皮肤切口插入，并可操控以实现可控的组织穿刺。尖端在组织内张开并闭合，随后旋转90–180°以切割肌肉。通过多次取样所获得的肌肉组织量可介于20 mg至290 mg之间，可用于组织学和分子生物学研究。术后伤口需保持干燥，剧烈体力活动应尽量减少约72小时，但正常活动水平可在操作后立即恢复。只要严格注意受试者选择、完全无菌操作以及术后护理，该操作是安全且有效的。&#160;根据受试者的偏好，右侧和左侧vastus lateralis均适合作为活检部位。

上述操作在临床和科研环境中均安全且可接受。当活检作为诊断过程的一部分时，应根据患者的症状和肌肉无力体征选择肌肉部位。活检部位应避开既往损伤、挛缩或器械操作区域21,1。在科研中，可能需要标准化条件，例如禁食或排除糖尿病患者19。抗凝药物（如华法林）需在操作前停用，并检测凝血时间。根据我们的经验，75mg剂量的普通阿司匹林可继续使用，因其不会显著增加过度出血的风险22。此外，应考虑参与者是否正在使用影响伤口愈合的药物。本质上，每例患者均需权衡停药风险与操作获益。在受试者筛选过程中，应详细询问对局部麻醉药、碘/氯己定及伤口敷料的潜在过敏史，并根据需要使用替代品。应告知受试者尽管罕见，但仍可能发生过敏反应，表现为皮肤发红加重、局部肿胀或起泡。在此情况下，可能需要移除敷料并使用抗组胺药或类固醇治疗。
该操作过程大约需要 15 - 20 分钟。必须严格注意无菌操作，以尽量降低伤口感染的风险。操作过...

本视频演示了人体经皮肌肉活检技术 股外侧肌 使用Weil-Blakesley角膜刀。

人类 股外侧肌 使用Weil-Blakesley Conchotome进行骨骼肌活检

使用Weil-Blakesley骨凿进行经皮肌肉活检在临床与科研实践中已得到广泛应用。该方法安全、有效且……

本方法的总体目标是介绍一种安全、有效且耐受性良好的股外侧肌活检技术，以获取足够的组织用于诊断和研究中的组织化学及分子分析。该方法可帮助研究人员以最小的不适和创伤为受试者获取充足的肌肉组织。该技术的主要优势在于其在临床和科研环境中均具有良好的安全性和可接受性。采用标准技术操作时，并发症较少，且可将不适感降至最低。开始时，请受试者仰卧于检查床上，取舒适体位。暴露首选大腿自腹股沟皱褶以上的区域，并在暴露的大腿下方铺置一次性吸水垫巾。在整个操作过程中，确保腿部保持伸直和放松，但需短暂收紧大腿以勾勒出股外侧肌的轮廓。在从髂前上棘到髌骨的假想连线上，约下2/3处标记操作部位。皮肤准备时，如有需要，男性应使用无菌剃刀对拟定活检部位周围约4厘米直径范围进行剃毛。使用酒精棉片清洁皮肤。使用局部麻醉剂浸润皮肤及浅层筋膜，然后用25号针头在皮下注射2%利多卡因，形成皮丘。接着，使用23号针头进一步深入皮下组织进行浸润，进针深度至少达半英寸，具体深度取决于活检部位的皮下组织含量。麻醉起效需 2 至 5 分钟，可用针头或手术刀片轻触皮肤以确认麻醉效果。为准备无菌区域，需用肥皂和水洗手，并在穿戴无菌手术衣前始终保持手部清洁。在手术推车上建立无菌区域前，应先戴上无菌手套覆盖双手。使用2%氯己定异丙醇溶液或含碘皮肤消毒剂对活检部位进行消毒。铺设带有粘性开口的无菌洞巾，以暴露活检部位并维持无菌区域。第一步关键操作是刺穿皮肤，并在筋膜内及更深部位形成足够深度的穿刺通道。进行活检操作时，使用11号手术刀在皮肤上做一个5至10毫米的切口，并穿过其上方的筋膜。在固定并支撑 biopsy 部位周围大腿组织的同时，将杯状活检钳的闭合钳头以垂直于股骨长轴的方向经切口插入，深度约为1/2至1英寸。接着，将活检钳旋转90至180度以切割肌肉组织，然后退出活检钳，并将钳头打开至无菌纱布上，纱布应以无菌生理盐水适当润湿。将纱布转移至置于冰上的容器中。第二个关键步骤是将鼻甲钳插入通道内，并操作鼻甲钳，以确保获取足够的肌肉组织。如有必要，可在同一通道内和单一伤口部位重复操作，以获得足够的肌肉组织。按照操作步骤，对伤口施加直接压力，持续长达五分钟。然后将无菌胶带平行于伤口放置，以闭合伤口。在无菌胶带上覆盖无菌吸收性敷料，并使用两层绷带进行加压包扎，用胶带固定。向受试者说明伤口敷料的方法，以便他们在操作后三到四天内进行。指导受试者在当天晚些时候睡觉前取下加压绷带。解释出现一定程度的大腿僵硬是常见现象，可通过轻柔的运动（如步行）缓解。可告知受试者可使用对乙酰氨基酚缓解疼痛。如本表所示，在赫特福德郡肌少症研究中，疼痛评分采用疼痛视觉模拟量表进行测量，该量表以0毫米表示无疼痛，100毫米表示可想象的最严重疼痛。研究中的疼痛评分通常较低，在操作过程中中位评分为7毫米，操作后一天为4毫米。这表明本研究中的受试者认为该操作几乎不引起

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医学

人的<em&gt;股外侧肌</em&gt;骨骼肌活检使用韦尔 - Blakesley Conchotome

本视频旨在介绍在人体受试者上应用的改良式 Bergström...

采用改良式 Bergström 技术的人类骨骼肌活检操作规程

从人类肌肉中获得的主要贴壁细胞类型为成肌细胞和成纤维细胞。本实验通过基于CD56抗原的磁性激活细胞分选技术对细胞群体进行富集。随后使用特异性抗体进行免疫标记，并结合图像分析技术，实现对单个细胞胞质和细胞核特征的定量分析。...

人骨骼肌中初级成肌细胞和成纤维细胞的分离与定量免疫细胞化学表征

经皮穿刺针活检获取的骨骼肌组织中分离线粒体的制备与呼吸测定评估

本文介绍了一种从小鼠后肢长骨（股骨和胫骨）中进行解剖的实验方案。此外，我们还描述了一种快速分离这些骨骼中骨髓的技术，该技术利用离心法将骨髓从骨髓腔中分离出来。...

小鼠后肢长骨解剖与骨髓分离

三维超声成像（3DUS）可实现对骨骼肌组织快速且经济有效的形态测量。本文介绍了一种利用三维超声成像测量肌肉体积和肌束长度的实验方案。...

三维超声成像：快速且经济高效的肌肉骨骼组织形态测量

肌球蛋白重链同工型的免疫组织化学染色已成为骨骼肌纤维类型鉴定的先进技术即，I型、IIA型、IIX型、IIB型）。本文介绍了一种染色方案，并提供一种新型半自动算法，可促进对肌纤维类型及肌纤维形态的快速评估。...

小鼠骨骼肌形态及纤维类型组成的半自动分析

我们介绍了使用完整小鼠骨骼肌进行小角X射线衍射实验的详细方案。随着用于人类疾病研究的转基因小鼠模型日益普及，该实验平台可作为解析遗传性肌肉疾病结构基础的有效测试系统...

X射线衍射技术用于完整小鼠骨骼肌以研究肌肉疾病的结构基础

我们介绍了从骨骼肌活检组织中分离、培养、鉴定和诱导人原代肌前体细胞（hMPCs）的技术。...

从骨骼肌活检手术中分离、培养、鉴定及诱导人肌肉前体细胞分化

本文介绍了一种对肌肉冷冻切片中坏死肌纤维进行直接免疫标记的实验方案。坏死细胞对血清蛋白具有通透性，包括免疫球蛋白G（IgG）。通过显示肌纤维对IgG的摄取，可识别并定量发生坏死的肌纤维，且不受肌肉状态的影响。...

免疫标记肌肉活检中的肌纤维变性

本技术报告描述了一种改良的 Bergström...

从人体胫骨前肌上部隔室采集骨骼肌活检样本以进行力学评估

本方案旨在通过机械剥离、酶解离、过滤和差速超速离心法，从啮齿类动物肌肉组织中分离和纯化骨骼肌间质细胞外囊泡（SkM-EVs）。该方法具有良好的重复性和可靠性。所获得的SkM-EVs有助于研究肌肉稳态及肌肉相关疾病，并有望作为诊断生物标志物或治疗载体加以应用。...

骨骼肌间质细胞外囊泡的酶法分离

学习使用韦尔-布拉克斯利圆锥刀进行股外侧肌经皮肌肉活检技术。该方法安全有效，可获取足够组织用于组织化学和分子分析，同时最大程度减少受试者不适和创伤。

人类股外侧肌使用Weil-Blakesley Conchotome进行骨骼肌活检

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