Name: 人类乳腺上皮细胞的激素反应3D文化模式 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 24 s
Description: 了解人类乳腺上皮细胞的3D培养方法，用于研究雌激素、孕激素和催乳素对乳腺上皮形态发生的影响。该标准化技术可模拟体内激素反应，为乳腺癌治疗策略提供重要见解。

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我们非常感谢 Cheryl Schaeberle 提供的编辑支持。本研究由 Avon 基金会资助项目 #02-2009-093 和 02-2011-095，以及 NIEHS/NIH ES 08314 对 AMS 的资助支持。本内容完全由作者负责，不一定代表美国国家环境卫生科学研究所或美国国立卫生研究院的官方观点。

1. 试剂的准备
<ol>
	<li>将合成孕激素醋酸甲孕酮（R5020）和17-β-雌二醇（E2）溶于乙醇中，配制成10-3 M的储备液。将催乳素溶于重蒸去离子水中，配制成1 mg/ml的储备液。将抗雌激素ICI 182,780溶于DMSO中，配制成10-2M的储备液。将这些溶液于-20 °C保存，最长可保存6个月。</li>
	<li>炭吸附右旋糖酐（CD）处理的血清及CDFBS培养基：
	<ol>
		<li>将胎牛血清（FBS）置于57 °C水浴中加热灭活30分钟。 
		注意：本实验后续步骤中仅可使用酸洗过的玻璃器皿。</li>
		<li>计算所需活性炭的用量。为补偿活性炭所占体积，使用比血清体积多10%的容积，称取5% wt/vol的活化粉末状活性炭。</li>
		<li>用与血清等体积的冷重蒸去离子水洗涤活性炭两次。每次洗涤后以50 × g离心2分钟使活性炭沉淀。两次洗涤之间弃去上清液。向最后一次得到的活性炭沉淀中加入0.5% wt/vol的右旋糖酐T-70。用重蒸去离子水重悬后，以100 × g离心5分钟。吸弃上清液。</li>
		<li>向沉淀中加入适量血清，并将炭吸附右旋糖酐沉淀充分重悬于血清中。于37 ºC缓慢滚动（6 RPM）孵育60分钟。以2,000 × g离心20分钟。若上清液浑浊，需重复离心；但此时血清可能尚未完全澄清，将在后续过滤步骤中进一步澄清。</li>
		<li>先通过0.80微米滤膜过滤，再通过0.45微米滤膜过滤，以去除较大颗粒物质。最后使用0.20微米滤膜进行过滤除菌。将过滤后的CDFBS储存于玻璃管或T-25培养瓶中，于-20 ºC保存。</li>
		<li>含炭吸附右旋糖酐处理胎牛血清的培养基（CDFBS培养基）：取375 ml无酚红DMEM与125 ml DMEM/F-12混合。移除37.5 ml混合液，并加入等体积的炭吸附右旋糖酐处理胎牛血清。加入青霉素至终浓度为106 U/ml，并加入L-谷氨酰胺至终浓度为2 mM。所得培养基组成为：75% DMEM、25% DMEM/F-12、7.5% 炭吸附右旋糖酐处理FBS、2 mM L-谷氨酰胺和106 U/ml青霉素。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>配制10X PBS、1N NaOH及重蒸去离子水。根据所需胶原溶液的体积配制足够量的上述溶液。所有溶液均需经滤膜除菌。10X PBS和无菌重蒸去离子水可在4 °C保存最多一个月。1N NaOH溶液不可储存，需现配现用。</li>
	<li>根据生产商提供的“大鼠尾I型胶原替代凝胶化操作步骤”（&#34;Alternate Gelation Procedure for Collagen I, Rat tail&#34;）配制终浓度为1 mg/ml的胶原溶液。每块凝胶使用1.5 ml胶原溶液。例如，为制备12块凝胶，需配制18.5 ml胶原溶液（额外0.5 ml以补偿移液过程中的损耗）。胶原溶液应立即使用，或置于冰上保存最多2–3小时。</li>
	<li>明矾卡红染液：
	<ol>
		<li>将1 g卡红与2.5 g硫酸铝钾溶于500 ml重蒸水中，边搅拌边煮沸20分钟。密切观察以防暴沸。用额外的重蒸水补足最终体积至500 ml。</li>
		<li>加入一粒硫柳汞晶体以发挥抗菌作用，并用铝箔包裹瓶体以避光。每次使用前需经实验室级滤纸过滤。该卡红溶液可重复使用，最长不超过三个月。室温保存，避光。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>胶原酶溶液：将胶原酶以0.125% w/v的浓度溶于DMEM/F12培养基中。该溶液不可储存，需现配现用。</li>
</ol>
2. T47D 细胞在大鼠尾部 I 型胶原凝胶中的三维培养及激素处理
注意：将无菌移液管和移液器吸头保存在 4 °C。
<ol>
	<li>制备单细胞悬液并进行细胞计数。在T47D细胞培养物达到70%融合度之前进行传代。离心所需数量的细胞悬液。注意每个凝胶中应含有约75,000个T47D细胞。</li>
	<li>使用预冷的移液器，将细胞沉淀重悬于适当体积的胶原蛋白溶液中。每个凝胶由1.5 ml胶原蛋白组成。轻柔混匀细胞与胶原蛋白，避免产生气泡。</li>
	<li>为防止静电对细胞分布的影响，在打开12孔板后，使用抗静电刷轻轻刷拭其边缘、顶部和底部。为避免在超净台工作面上操作时产生静电积聚，将该12孔板放置在另一个同样经抗静电刷处理过的空白12孔板上。然后，轻柔地将1.5 ml混合液倒入12孔板的每个孔中。</li>
	<li>将12孔板放入37 °C培养箱中孵育30分钟。从培养箱中取出后，放回超净台内。</li>
	<li>使用p200无菌吸头，以轻柔的环形动作小心将凝胶从孔壁边缘剥离。凝胶也应从孔底脱离。</li>
	<li>将激素溶于CDFBS培养基中用于添加至各孔。雌二醇（E2）和R5020的终浓度为10-10 M，催乳素（prolactin）的终浓度为10-7 M。对照组使用不含激素但含有与激素储备液等体积DMSO的CDFBS培养基。确保每孔含有1.5 ml培养基。将3D培养物置于37 °C、5% CO2、100% 湿度的组织培养箱中培养1至2周，每隔2天更换一次培养基。</li>
</ol>
3. 整体样本的凝胶处理
<ol>
	<li>移除培养基，向每个孔中加入 1.5 ml PBS。</li>
	<li>将凝胶转移至载玻片，使用弯头手术刀将凝胶切成两半。取其中一半继续处理，另一半保存用于组织学分析。</li>
	<li>将用于整体封片的一半凝胶转移至载玻片，让凝胶干燥 5 分钟，然后将载玻片放入含有 10% 甲醛的考普林罐中。 
	注意：所有孵育步骤均应在室温下进行。</li>
	<li>在摇床上将凝胶于考普林罐中固定过夜（O/N）。</li>
	<li>在摇床上用 PBS 洗涤载玻片两次，每次 10 分钟。将载玻片转移至 70% 乙醇中，在摇床上孵育 1 小时。再将载玻片转移至胭脂红铝溶液中过夜（O/N）。</li>
	<li>次日，在摇床上依次用 70% 乙醇、95% 乙醇和 100% 乙醇对载玻片进行脱水，每步各 1 小时。随后将载玻片转移至二甲苯中两次，每次 1 小时，并持续置于摇床上。使用以甲苯为基质的封片介质对凝胶进行封片，并使用厚度为 1.5 mm 的盖玻片。</li>
	<li>在普通光镜（显微镜或体视显微镜）下观察整体封片样本。如需对形态和管腔进行更详细的分析，可使用共聚焦显微镜，并采用 HeNE 633 nm 激光检测胭脂红染料信号。</li>
</ol>
4. 用于组织学分析的凝胶处理
<ol>
	<li>将凝胶的剩余一半转移至含有10%福尔马林的20 ml玻璃小瓶中，在摇床上固定过夜（O/N）。</li>
	<li>在摇床上用PBS洗涤凝胶两次，每次10分钟。将凝胶放入包埋盒中，用于石蜡包埋。</li>
	<li>将凝胶转移至70%乙醇中孵育1小时，随后依次转移至95%乙醇中1小时，更换新鲜95%乙醇再孵育1小时，再转移至100%乙醇中1小时，最后更换新鲜100%乙醇再孵育1小时。此时，凝胶可在室温下于100%乙醇中过夜保存，或转移至二甲苯中孵育1小时，再更换新鲜二甲苯孵育1小时。</li>
	<li>将包埋盒置于60 °C的真空孵育器中，浸入石蜡中1小时，再更换新鲜石蜡重复处理两次。</li>
	<li>用干净的石蜡填充塑料模具。打开包埋盒，取出凝胶并将其放入含有石蜡的塑料模具中。加满石蜡后，将带有标签的包埋盒盖放在顶部，使组织块冷却固化。</li>
	<li>取下塑料模具，使用切片机对组织块进行切片。切取5 µm厚的切片用于苏木精-伊红（H-E）染色和免疫细胞化学分析。</li>
</ol>
5. 使用胶原酶处理从凝胶中提取细胞
<ol>
	<li>从孔中取出凝胶，转移至含有 PBS 的培养皿中，短暂冲洗凝胶。</li>
	<li>将凝胶转移至含有 2 ml 0.125% 胶原酶的 15 ml 离心管中，上下吹打 4–5 次，使凝胶破碎成小块。</li>
	<li>在 37 °C 下孵育 25 分钟（直至凝胶完全溶解，细胞呈悬浮状态）。</li>
	<li>加入 2 ml 含血清的培养基，通过离心（1,000 × g，5 分钟）收集细胞，弃去上清液，重悬细胞并计数。</li>
</ol>

<ol><li>Barnes, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+single+cells+to+tissues%3A+interactions+between+the+matrix+and+human+breast+cells+in+real+time%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">From single cells to tissues: interactions between the matrix and human breast cells in real time.</a> PLoS ONE. 9, e93325(2014).</li>
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<li>Vignon, F., Bardon, S., Chalbos, D., Rochefort, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiestrogenic+effect+of+R5020%2C+a+synthetic+progestin+in+human+breast+cancer+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.Clin.Endocrinol.Metab%22%5BJournal%5D)">Antiestrogenic effect of R5020, a synthetic progestin in human breast cancer cells in culture.</a> J.Clin.Endocrinol.Metab. 56, 1124-1130 (1983).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本文介绍了一种激素敏感的三维培养模型，用于检测激素对乳腺上皮的作用。可在组织形态学、细胞增殖和基因表达水平上评估组织对激素的反应12。该技术的一个局限性在于，由于培养物生长在塑料底板中，培养期间的观察仅限于光学显微镜。该三维培养系统可改造为使用玻璃底板，从而实现对培养物的活细胞成像1。
细胞的培养方式似乎对维持其激素响应表型至关重要。在这些细胞中，定期检测其对雌二醇（E2）的响应性非常重要。我们建议在冻存管解冻后的第4代进行一次E2剂量-反应曲线实验，并在此后每传代10次后常规重复该检测。在二维（2D）培养条件下，与在CDFBS培养基中培养1周的对照组相比，通常10-10 M的E2浓度可使细胞数量达到对照组的3倍；在三维（3D）培养中则可达2倍12。由于酚红已被证实具有雌激素活性2，因此所有涉及激素响应性的实验均应使用不含酚红的培养基。此外，本实验方案中列出的品牌均为目前确认无激素活性的产品。如果在二维或三维培养中观察到雌激素响应发生变化，应评估组织培养所用的塑料材料是否浸...

与标准的二维培养不同，三维细胞培养替代模型能够在更接近组织生理环境的条件下研究上皮细胞的行为。乳腺的三维培养已帮助阐明了乳腺发育和肿瘤发生过程中的诸多方面。然而，目前大多数可用的三维培养模型并不适合研究激素作用，因为用于此类研究的人体上皮细胞系缺乏激素受体的表达6,7,9。
本文介绍一种适用于研究激素作用的人类乳腺上皮三维培养模型12。该模型采用 commercially available 的激素响应性人类乳腺上皮细胞系 T47D3,11,13，该细胞系最初来源于一名54岁女性乳腺浸润性导管癌患者的胸腔积液。我们使用大鼠尾部I型胶原作为基质。该三维培养模型适用于研究三种主要哺乳动物激素（雌二醇、醋酸甲羟孕酮（黄体酮类似物）和催乳素）对人类乳腺上皮细胞的作用。通过形态计量学分析，可对激素诱导的上皮形态随时间的变化进行定量评估12。
适当的接种密度可使这些三维培养物维持培养达2周。在此期间，结构发育已足够充分，能够对激素对上皮形态的影响进行可靠的定量评估。凝胶也可在更早的时间点收获，用于细胞增殖和基因表达分析。此外，该模型适用于测试序贯激素处理的效果；例如，第一周用雌二醇处理，第二周更换为其他激素或激素组合。使用该三维培养模型还可研究雌激素类化合物及抗雌激素（如ICI 182,780）的作用12。

<table><tbody><tr><td>12孔组织培养板（Falcon）</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-29</td><td></td></tr><tr><td>15 ml 聚苯乙烯圆锥形试管</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-959-49D</td><td></td></tr><tr><td>活性炭</td><td>Sigma</td><td>C-5510</td><td></td></tr><tr><td>胭脂红明矾</td><td>Sigma</td><td>C1022-100G</td><td></td></tr><tr><td>胶原酶，III型</td><td>Worthington</td><td>S0C11784</td><td></td></tr><tr><td>共聚焦显微镜</td><td>Zeiss</td><td>LSM510</td><td>配备 HeNe 633nm 激光器</td></tr><tr><td>葡聚糖 T-70</td><td>Abersham/Pharmacia</td><td>17-0280-01</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12，含 HEPES，无酚红&amp;nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>11339-021</td><td>用于激素实验的无酚红培养基</td></tr><tr><td>DMEM，低糖，含丙酮酸，无谷氨酰胺，无酚红</td><td>Life Technologies</td><td>11054-020</td><td>用于激素实验的无酚红培养基</td></tr><tr><td>17-&amp;beta;-雌二醇</td><td>EMD Millipore</td><td>3301</td><td>溶于乙醇</td></tr><tr><td>乙醇</td><td>Koptec</td><td>V1001</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.03</td><td>用于激素实验时，必须经活性炭-葡聚糖处理去除激素&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>滤器（115 ml）</td><td>Nalgene</td><td>380-0080, 245-0045, 120-0020</td><td>孔径分别为 0.88、0.45、0.20 微米&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>10% 福尔马林</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF93-20</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酰胺（200 mM）</td><td>Life Technologies</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>ICI 182,780（氟维司群）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I4409-25MG</td><td>溶于 DMSO</td></tr><tr><td>切片机&amp;nbsp;</td><td>Leica</td><td>RM2155</td><td></td></tr><tr><td>组织包埋介质</td><td>McCormick Scientific</td><td>39502004</td><td></td></tr><tr><td>青霉素</td><td>Sigma</td><td>7794-10MU</td><td>溶于 10 ml 去离子蒸馏水中</td></tr><tr><td>Permount 封片剂</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-500</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液，pH 7.4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3813-10PAK</td><td></td></tr><tr><td>催乳素</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L4021-50UG</td><td>溶于去离子蒸馏水中</td></tr><tr><td>醋酸甲羟孕酮</td><td>Perkin Elmer</td><td>NLP004005MG</td><td>溶于乙醇</td></tr><tr><td>大鼠尾胶原&amp;nbsp;</td><td>Corning&amp;nbsp;</td><td>354236</td><td>不同批次浓度可能不同，请注意标注</td></tr><tr><td>手术刀</td><td>Miltex</td><td>4311</td><td></td></tr><tr><td>半封闭式台式组织处理仪</td><td>Leica</td><td>TP1020</td><td></td></tr><tr><td>氢氧化钠</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td>配制 1N NaOH 储存液</td></tr><tr><td>StaticMaster 防静电刷&amp;nbsp;</td><td>Amstat</td><td>C3500</td><td></td></tr><tr><td>Stripette 血清移液管&amp;nbsp;</td><td>Corning&amp;nbsp;</td><td>4101</td><td></td></tr><tr><td>T-25 培养瓶</td><td>Corning&amp;nbsp;</td><td>430168</td><td></td></tr><tr><td>组织包埋盒</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-200-403E</td><td></td></tr><tr><td>Wheaton 玻璃小瓶，20 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-341-25D&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>二甲苯&amp;nbsp;</td><td>VWR</td><td>95057-822</td><td></td></tr></tbody></table>

一种激素响应性的人类乳腺上皮三维培养模型

A Hormone-responsive 3D Culture Model of the Human Mammary Gland Epithelium

乳腺上皮形态发生过程受激素影响。利用二维培养研究激素对乳腺上皮的作用，仅限于细胞增殖和基因表达终点的分析。然而，在生物体内，乳腺形态发生是在三维环境中进行的。三维培养系统有助于弥合单层细胞培养（二维）与生物体复杂性之间的差距。本文描述了一种适用于研究激素作用的人乳腺上皮三维培养模型。该模型采用 commercially available 的激素响应性人乳腺上皮细胞系 T47D，并以大鼠尾部胶原蛋白 I 型作为基质。该三维培养模型可响应主要的哺乳动物激素：雌二醇、孕激素和催乳素。根据不同的检测终点，经过 1 周或 2 周的激素处理后，即可观察这些激素对上皮形态发生的影响。三维培养物可用于上皮形态发生、细胞增殖及基因表达的分析。

图1总结了制备激素敏感型三维培养物的流程。在仅添加E2或E2与其他激素联合添加的条件下，培养2周后可在凝胶的整体装片中观察到上皮结构。当培养基（CDFBS培养基）中未添加任何激素时，仅可见单个细胞或2-3个细胞组成的小细胞团（图2）。该条件作为阴性对照。
三维培养中的细胞会形成在形态、大小和管腔存在方面各不相同的结构。凝胶中结构的分布通常具有异质性。如先前所示，凝胶边缘区域的结构数量通常多于中心区域4。由于这种空间异质性，样本间的比较应仅限于各样本中对应的区域。
I型胶原蛋白的来源物种会影响所形成的上皮结构的表型和质量5。本实验选用大鼠尾部来源的I型胶原蛋白，因为在牛源I型胶原蛋白中接种细胞会导致形成无序的细胞团（图3）。
利用共聚焦显微镜可对上皮结构进行详细分析（图4）。E2处理导致形成圆形和...

我们描述了一种适用于研究激素作用的人类乳腺上皮三维培养模型。

乳腺上皮形态发生过程受激素影响。利用二维培养研究激素对乳腺上皮作用的方法是……

本生理相关三维培养方法的总体目标是检测主要促乳腺发育激素对乳腺上皮形态发生的作用。该方法有助于解答内分泌学和乳腺生物学领域的一些关键问题，例如雌激素、孕激素和催乳素如何影响乳腺上皮的形态发生。该标准化方法的主要优势在于，激素敏感的乳腺上皮细胞在激素刺激下能够形成三维结构，其方式与体内观察到的现象相似。该技术的应用前景涉及乳腺癌治疗领域，因为它是一种与生理条件相关的复杂人乳腺上皮培养体系。我们最初提出该方法的想法，源于注意到目前尚缺乏标准化的体外模型来研究激素对人乳腺形态发生的影响。首先，对T47D细胞的单细胞悬液进行细胞计数。细胞的培养方式对于维持其激素响应表型至关重要。我们建议在复苏新冻存管后的第四代对T47D细胞进行一次试验性检测，以确认其响应性，并在此后每十代检测一次。然后将每凝胶75,000个细胞离心沉淀。使用预冷的移液器，将沉淀物在每凝胶1.5毫升胶原蛋白中轻轻重悬，避免产生气泡。接下来，使用防静电刷清洁12孔板上下边缘。然后将该板放置在另一个已去除静电的空12孔板之上。在制备凝胶过程中，静电的存在可能影响细胞的分布，导致细胞在凝胶铺展时沉降至底部，并以二维模型层的形式生长。当培养板准备就绪后，轻轻将1.5毫升细胞-胶原混合物加入每个孔中，并将培养板置于37°C培养箱中。30分钟后，向每个孔中加入1.5毫升新鲜配制的添加了激素的cdFBS培养基。使用无菌的P200枪头，以轻柔的环形动作小心地将每个凝胶从孔壁边缘分离。然后，将3D培养物置于37°C、5%CO2、100%湿度的组织培养箱中培养一至两周，每两天更换一次培养基。为了进行整体封片处理凝胶，将每个孔中的培养基替换为1.5毫升的磷酸盐缓冲液（PBS）。然后，一次将一个凝胶转移至载玻片上，并使用弯头手术刀将每个凝胶切成两半。将其中一半凝胶分别转移至单独的载玻片上进行尝试。五分钟后，将凝胶置于摇床上，用10%甲醛固定过夜。次日早晨，在摇床上用PBS洗涤凝胶两次，每次十分钟。第二次洗涤后，在摇床上用70%乙醇孵育凝胶一小时，随后在滤过的卡明明矾溶液中孵育过夜。第二天，将凝胶依次浸入梯度乙醇溶液中，每种溶液振荡孵育一小时，随后用二甲苯振荡孵育两次，每次一小时。最后一次二甲苯孵育后，用甲苯基封片剂封片，并加盖1.5毫米厚的盖玻片。如需对凝胶进行组织学分析，将保存的凝胶半块分别放入盛有20毫升10%福尔马林的玻璃瓶中，在振荡器上过夜固定。第二天早晨，在摇床上用 PBS 洗涤凝胶两次，每次十分钟，方法如前所述。然后将凝胶放入包埋盒中，用于石蜡包埋。接着，按照所示步骤，依次用浓度递增的乙醇在新鲜乙醇中孵育，每次一小时，对凝胶进行脱水处理。然后，将凝胶在二甲苯中孵育，每次一小时，共孵育两次；接着将包埋盒转移至真空孵育箱中，在60摄氏度下用石蜡进行三次一小时的孵育，每次均使用新鲜石蜡。最后一次真空孵育后，将凝胶从包

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Research

科研

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Bioengineering

生物工程

人类乳腺上皮细胞的激素反应3D文化模式

本文描述了一种分析组织成纤维细胞对相关上皮细胞影响的简单方法。该方法与三维组织培养相结合，可促进从三维结构中分离后细胞的分析。该技术适用于具有不同恶性潜能的细胞，有助于系统研究肿瘤相关间质对肿瘤细胞的影响。...

从三维混合细胞球体共培养物中分离乳腺上皮细胞

在标准培养方法中，细胞被从其生理环境中取出，并在培养皿的塑料表面进行生长。为了研究原代人骨髓细胞的行为，我们建立了一种三维培养系统，使细胞在能够模拟组织天然微环境的条件下生长。...

一种用于研究原代人骨髓及其恶性病变的三维组织培养模型

在重建基底膜上进行乳腺上皮细胞的三维培养是一种有效模拟 体内...

三维培养：研究乳腺细胞正常腺泡结构与恶性转化的工具

一种用于研究激素在人类乳腺中作用的ex vivo模型

本文所述的间接免疫荧光实验方案可用于检测和定位小鼠乳腺组织中的蛋白质。文中提供了完整的实验方法，包括乳腺组织样本的制备、免疫组织化学染色、荧光显微镜下组织切片的成像，以及图像的重建。...

小鼠乳腺组织冰冻切片的间接免疫荧光染色

本文描述了一种基于软光刻技术的方法，用于构建由细胞外基质包绕的、具有明确几何形状的三维（3D）上皮组织的均一阵列。该方法适用于多种细胞类型和实验条件，并可实现对相同重复样本的高通量筛选。...

在细胞外基质中构建三维上皮组织

我们描述了两种乳腺上皮细胞系HC11和EpH4的分化诱导技术。尽管两种细胞系均需要胎牛血清、胰岛素和催乳素以产生乳蛋白，但EpH4细胞可在三维培养条件下完全分化为乳腺球。这两种互补模型可用于分化及肿瘤发生过程中信号转导研究。...

小鼠乳腺上皮HC11和EpH4细胞的分化

乳腺是一种双层结构，由外层的肌上皮细胞和内层的腔面 epithelial...

通过差异性胰蛋白酶消化法生成嵌合型乳腺类器官

本实验方案描述了3D培养体系的建立方法 '在非转化型乳腺上皮细胞系 MCF10A 的上层培养物中，该细胞系经改造用于研究血小板活化因子（Platelet Activating Factor,...

三维培养中磷脂介质诱导的转化

本方案介绍了一种通过差速离心法从原代正常及肿瘤乳腺组织中生成上皮类器官的方法。此外，还包括对包埋类器官进行三维培养以及免疫荧光成像的操作说明。...

无需传代培养的小鼠与人正常及肿瘤乳腺组织上皮类器官的生成与成像

本方案描述了一种基于明确成分水凝胶的方法，可在可控的三维培养系统中生成模拟乳腺形态发生关键特征的人类乳腺类器官。...

一种基于明确水凝胶的三维人乳腺类器官生成方法，可重现乳腺形态发生过程

了解人类乳腺上皮细胞的3D培养方法，用于研究雌激素、孕激素和催乳素对乳腺上皮形态发生的影响。该标准化技术可模拟体内激素反应，为乳腺癌治疗策略提供重要见解。

一种激素响应性的人类乳腺上皮三维培养模型

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