一种用于诱发啮齿类动物抑郁症状、行为改变及负面健康后果的不可预测性慢性轻度应激方案

以下实验的总体目标是使一种啮齿类动物品系暴露于一系列随机确定的慢性不可预测应激源中，从而使其无法有效代偿，导致抑郁症状逐渐加重。该目标通过每天对动物施加一种预先设定的应激刺激来实现，这些刺激旨在产生应激效应，但不会对动物造成损伤或伤害。动物每周接受应激刺激五至六天，持续八周。在规律的时间间隔内，通过评估编码状态以及动物对施加刺激的反应（例如蔗糖偏好实验）来监测其抑郁症状的发展情况。

结果显示，对动物所处环境施加长期随机且无法解决的应激源会阻碍动物适应能力，并在数周内引发抑郁症状的产生。该方法有助于回答慢性疾病研究领域中的关键问题，例如慢性抑郁症状如何导致其他组织或器官系统的不良健康后果。当我们在临床人群中了解到晚期心血管疾病与疾病风险之间存在显著的共病关系，同时伴有严重的抑郁症表现时，首次提出了采用该方法的想法。

本实验操作将由本实验室的博士研究生 Steven Brooks 先生和 Kayla Brannon 女士进行示范。为产生轻度应激，需将小鼠单独饲养在笼中，并每天随机施加一种或两种应激源，每种应激源持续至少三至四小时。对于潮湿垫料应激源，应将 10 至 20 盎司的清洁水倒入标准鼠笼中，以润湿垫料。

将小鼠置于潮湿的笼子中3至4小时。之后将笼内垫料移除，继续让小鼠在无垫料的笼中停留3至4小时，随后将其转移至另一个需要空笼环境的应激条件中，或将其放入带有新鲜垫料的清洁笼子中。使用稳固物体将无垫料的笼子倾斜至约45度，并维持3至4小时，确保物体在小鼠于笼内活动时仍保持固定。在此应激条件下，将正常的12小时光照、12小时黑暗循环改为持续8小时的交替周期，每30分钟切换一次光照与黑暗。

将小鼠从其原笼转移到已移走小鼠的相邻笼中，进行为期三小时的应激处理。移除笼中垫料，加入约0.25英寸深的水，将小鼠置于其中约四小时。水刺激结束后，用柔软毛巾短暂擦干小鼠。

通过在笼子中随机分布添加自然捕食者物种的毛发或10至20毫升尿液，使小鼠暴露于捕食者的气味或声音，持续三至四小时。或者，在每日应激期结束时，在笼子附近播放来自自然捕食者物种的咆哮声或捕食性声音，持续三小时。每天将小鼠转移至清洁的笼子，并送回饲养设施。

每周检查每只动物是否出现需要兽医治疗的伤口或溃疡，并安排两名经过评估理毛行为代码培训的研究人员进行检查。对每只动物进行检查，并根据0到1的评分标准，为其分配每周的理毛行为代码评分。通过将八个身体区域中的每一个区域分别评为0分（表示清洁）或1分（表示脏污），将各区域评分相加，得到个体总分。

头部、颈部、背部被毛、腹部被毛、尾巴、四肢、后肢以及生殖区域。将动物放置于一个铺有棉垫或毛巾的清洁笼子中，以防止垫料粘附在其被毛上。随后，向每只动物的头部和背部被毛喷洒10%蔗糖溶液，并记录其连续五分钟的理毛行为总时长。

测量在此期间面部理毛行为的潜伏期和频率。潜伏期是指首次喷雾与开始面部理毛之间的时间间隔，频率应以面部理毛的次数来衡量。经过八周不可预测的慢性轻度应激后，与非应激对照组啮齿类动物相比，慢性应激组动物在行为学和生理学指标上均出现显著改变。

小鼠在经历不可预测的慢性轻度应激后出现类似抑郁的症状，并表现出毛发梳理评分的进行性下降。毛发外观的显著恶化提示梳理行为减少，可能反映了动机缺乏。 recent evidence has suggested that there is a substantial quantitative divergence in the responses to unpredictable chronic mild stress between male and female mice.

具体数据显示，与同龄雄性小鼠接受相同应激方案相比，雌性小鼠会表现出更为严重的应激行为反应。在完成该操作后，可进一步开展适用于特定器官功能的其他方法，以回答更多科学问题，例如慢性抑郁症状的存在如何影响目标器官系统的正常功能。观看本视频后，您应能够充分理解如何运用UCMS方案中的各个步骤和操作流程，逐步在啮齿类动物模型中建立日益加重的抑郁症状条件。