的Perigenital敏感性和前列腺肥大细胞活化新生母婴分离的小鼠模型评估

以下实验的总体目标是通过测量接受新生儿母体分离的雄性 C 57 black 6 小鼠的生殖器周围机械敏感性和前列腺内的肥大细胞活化，确定早期生活压力对泌尿生殖系统的影响。这是通过首先对 C 57 只黑色 6 只小鼠幼崽的窝进行新生儿母体分离来实现的，以连续 20 天诱导早期生活压力。第二步是通过将一系列 Von Fre 单丝应用于生殖器周围区域来测量生殖器周围机械敏感性。

接下来，对小鼠前列腺的低温恒温器切片进行酸化甲苯胺蓝染色。为了量化肥大细胞活化。根据我们的行为和组织学分析，结果表明，新生儿母体分离增加了生殖器周围机械敏感性和人工肥大细胞活化。

与现有方法（如实验性自身免疫性前列腺炎）相比，该技术的主要优点是它在早期发育过程中结合了压力暴露，这会在以后的生活中引发症状，类似于在慢性前列腺炎患者中观察到的情况。这种方法可以帮助回答慢性盆腔疼痛领域的关键问题，例如早期生活压力对行为的影响，并提供疼痛状态改变的组织学证据。虽然这种方法可以提供对慢性前列腺炎的了解，但它也可以应用于其他功能性疼痛综合征，例如间质性膀胱炎、膀胱疼痛综合征、外阴痛、纤维肌痛或偏头痛。

它甚至可以应用于其他常见的心理合并症，如焦虑和抑郁 出生后的第二天，将母带从家笼中取出，放入干净的二级容器中。用戴着干净手套的手揉搓一把床上用品，以保持家笼的气味，然后将家笼床上用品的一到两厘米深度转移到一个干净、贴有适当标签的两升玻璃扬声器中。此外，接下来将家笼中存在的任何额外强化床上用品（如小窝或皱纹纸）的大约一半单独放入玻璃扬声器中，将一窝幼崽的所有幼崽放入准备好的烧杯中，并立即将烧杯置于 33 摄氏度和 50% 湿度下 180 分钟。

在分离的孵化期内，从二级容器中取出分膜，将其放回家笼中。将家笼放回饲养箱内适当的住房位置。在分离期结束时，取回家笼并取下支气管，将其放入干净的辅助容器中。

然后从培养箱中取出烧杯，将一把床上用品放在戴着手套的干净手之间，以便在处理幼崽时保持家笼的气味。轻轻地将幼崽从烧杯中单独移动到家笼中，然后将烧杯中剩余的任何丰富物和垫料放回家笼中。将所有幼崽送回后，将水坝从辅助容器移至家笼，并将其放回饲养箱内的适当住房位置。

对每窝接受新生儿产妇分离的窝重复整个过程，直到出生后第 21 天。然后在整个实验期间给幼崽断奶并将它们饲养在与对照小鼠相同的条件下。通过在 55 厘米高的高架金属丝网顶桌下方放置吸收性底垫来准备测试区域。

桌子应提供足够的空间，让研究者可以从底部接近而不会惊吓到老鼠。将最多 12 只 8 周龄的小鼠分别放在金属丝网台顶部的透明多孔塑料室下。在腔室顶部放置一个重物，以防止老鼠逃跑。

握住三点 22 克 von 框架单丝的基部，露出缩回的单丝。放置探针，使单丝垂直定向。当老鼠警觉时，它不会动，它的体重会在后爪之间均匀分布。

将其涂抹在阴囊的左侧或右侧，避开中线，直到在细丝中观察到轻微弯曲。将单丝固定在原位 10 秒钟或直到动物表现出积极的反应，例如轻快的抽搐或跳跃或舔舐或咬人行为。如果小鼠在 10 秒的单丝应用过程中既不移动，也不表现出任何积极反应，则记录使用相同大小细丝的所有小鼠的阴性反应测试，然后切换到下一个合适的单丝。

根据其他四种应用，使用下一个更大或更小的单丝继续测试每只小鼠。观察到第一个阳性反应后，解剖然后冷冻切片，将 9 周龄小鼠的前列腺组织固定成 7 微米厚的冷冻切片。接下来，通过将 1 克甲苯胺蓝 O 添加到 100 毫升 70% 乙醇中来制备 1% 甲苯胺蓝储备液，并将混合物涡旋直至其进入溶液。

将储备液在室温下储存长达三周。在另一个烧杯中，将 1 克氯化钠加入 100 毫升水中，放在搅拌板上。使用 12 摩尔盐酸调节盐溶液的 pH 值，直到达到 0.5 至 1.0 的 pH 值范围。

然后，将 8 毫升乌迪内蓝原液和 32 毫升酸性 1% 氯化钠溶液混合，制备 0.25% 酸化的甲苯蓝工作溶液。上下管道以确保 odine blue 储备液完全掺入并混合 使用涡旋，为每批载玻片准备新鲜的工作溶液。通过将载玻片单独浸入含有足够体积 PBS 的 50 毫升锥形管中约一秒钟来洗涤组织切片，以完全浸没组织。

让载玻片在纸巾上风干。接下来，将玻片放入含有足够 0.25% 甲苯胺蓝工作溶液的玻璃静置罐中，以确保组织切片完全浸没。将玻片在设置为 15 RPM 的平台摇杆上孵育 10 至 15 分钟。

然后将载玻片浸入 PBS 中约一秒钟，以洗去任何多余的高乌丁蓝，并将载玻片放入载玻片盒中，使载玻片侧放。允许排水。将玻片放入 37 摄氏度的烘箱中干燥至少两小时或在室温下过夜。

干燥后，将玻片浸入 95% 乙醇中约 1 秒钟，然后让切片完全干燥。重复此过程 1 到 10 次，直到组织干燥时蓝色多于紫色。接下来，将载玻片浸入 100% 乙醇中约 1 秒钟，并让切片完全干燥。

重复此过程 1 到 10 次，直到组织呈深蓝色至中蓝色但不呈紫色。最后，将玻片在 100% 二甲苯中孵育 3 分钟，固定染色剂。让它们干燥，然后盖上，用甘油 PPS 或二甲苯基永久性封固剂滑过玻片。

排干多余的培养基，并将完成的玻片储存在室温下。当用一系列分级的 Von Frame 单丝、8 周龄新生儿母体分离进行测试时，与幼稚小鼠相比，小鼠表现出生殖器周围机械性异常性疼痛。这被证明是机械戒断阈值的显着降低，从而引起了积极的行为反应。

前列腺炎 慢性盆腔疼痛综合征的其他证据可见，此处的组织学显示前列腺组织的低温恒温器切片用酸化 o 甲苯胺蓝染色，以观察肥大细胞内的类胰蛋白酶颗粒。在新生分离小鼠的前列腺切片中观察到脱颗粒肥大细胞的百分比显着升高。与幼稚小鼠相比 在进行新生儿母体分离时，重要的是要记住保持家笼的气味，以避免母鼠排斥幼崽 遵循此程序。

其他方法，如旷场试验或二选一液体偏好，可用于评估共病心境障碍的行为证据。观看此视频后，您应该对如何评估生殖器周围机械敏感性和前列腺肥大细胞活化作为新生儿母体分离后慢性前列腺炎和小鼠的行为和组织学证据有很好的了解。