Name: 在条件影响社会空间果蝇 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: 学习使用社会空间室量化黑腹果蝇的社会距离偏好。该方法通过图像分析测量果蝇行为，为研究神经遗传学和环境因素对社交行为的影响提供有效框架。

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作者感谢Tadmiri Venkatesh博士对撰写本文的鼓励，感谢Dova Brenman和Selwyn Chui提出的建设性意见，感谢Elyssa Burg和Wayne Rasband设计了用于计算ImageJ中所有果蝇间距离及最近邻距离的宏程序。作者还感谢审稿人提出的建设性意见。
A.A.A、M.C.C. 和 A.F.S. 负责研究设计；S.N.J.、A.A.A、M.N.、Z.R. 和 A.J.M. 进行了实验；A.A.A、M.N.、A.J.M.、M.C.C. 和 A.F.S. 分析了数据；A.R.M. 和 A.F.S. 撰写了论文。
本研究得到了PSC-CUNY研究奖的支持，该奖项由专业职员大会（The Professional Staff Congress）和纽约城市大学（The City University of New York）共同资助，授予A.F.S.；同时获得西方大学（Western University）向A.F.S.提供的内部资助；A.A.A.获得了面向师范生的数学、生物、化学和地质学专业奖学金，以及路易斯·斯托克斯少数族裔参与联盟（Louis Stokes Alliance for Minority Participation）奖学金。

1. 实验室自制设备与试剂（其他材料参见材料列表）
<ol>
	<li>制备 果蝇 如前所述的冷麻醉装置 8.</li>
	<li>按照之前所述的方法制备果蝇吸管器 13.</li>
	<li>准备社交空间装置和支架。
	<ol>
		<li>订购或制作玻璃板和亚克力间隔物，以构建社交空间装置。每个社交空间装置由两块方形玻璃板（17.6 cm × 17.6 cm，厚度 0.3 cm）、两个直角三角形亚克力间隔物（高 16.5 cm，底边 8.9 cm，厚度 0.3 cm）以及两个矩形间隔物（9 cm × 1.5 cm，厚度 0.3 cm）组成。图1A).</li>
		<li>组装玻璃和丙烯酸材质的社交空间实验舱，使其与原实验舱完全相同 图1B首先，将一个三角形垫片平放在一块方形玻璃片上，使三角形垫片的直角与方形玻璃片的一个角对齐。接着，将第二个三角形垫片以与第一个三角形垫片对称的方式平放在方形玻璃片上。 
		注意：务必佩戴手套，以免手上的油脂和气味污染部件。</li>
		<li>将两个小型矩形垫片平放在方形玻璃片未覆盖的一侧边缘上方。此时，方形玻璃片上方的丙烯酸垫片应形成一个三角形区域。</li>
		<li>将第二块方形玻璃板放置在亚克力垫片上方，使其与下方原始的玻璃板对齐。</li>
		<li>使用四个长尾夹将玻璃板和间隔物固定在一起，形成社交空间室。在每个三角形间隔物的长边靠近角落处放置一个夹子，将其固定在玻璃板内侧。在相同侧边的相邻角落处，将夹子放在每个矩形间隔物上方，将其固定在玻璃板内侧。</li>
		<li>组装一个支撑架和烧瓶夹，使烧瓶夹能够将社交空间装置保持在直立位置，此时社交空间装置以其边缘置于工作台面上。</li>
		<li>每次实验重复时，组装一个社交空间装置和支撑架。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>准备一个攀爬能力检测装置，用于检测果蝇的攀爬能力。
	<ol>
		<li>使用逆流装置，方法如前所述 14,15.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>在覆盖白色实验台垫的工作台面上进行实验，并使用白色背景，以确保光照条件均匀。</li>
</ol>
2. 实验前果蝇的准备
<ol>
	<li>在含有标准培养基的瓶子中饲养果蝇 果蝇 果蝇食物。将它们置于25 °C、12小时光照/12小时黑暗循环的培养室中饲养。</li>
	<li>实验前一至两天，按照先前所述方法，在低温麻醉下收集并鉴定果蝇性别 8.
	<ol>
		<li>将冷麻醉装置预冷至 -4 °C。将果蝇放入 50 ml 塑料管中。将装有果蝇的塑料管完全浸入绝缘冰桶的冰中，静置至少 5 分钟，直至果蝇完全不动。</li>
		<li>将果蝇置于冷麻醉装置的聚乙烯板上。在室温下，使用体视显微镜将雄蝇与雌蝇分开。将果蝇分组饲养于含标准培养基的试管中 果蝇 每管果蝇食物所饲养的果蝇数量不超过40只。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>实验开始前两小时，确保实验房间的温度保持在24–25 °C之间，湿度约为50%。</li>
	<li>将果蝇转移至含有食物的新离心管中，并置于实验操作台面上静置2小时。 
	注意：本实验所用的果蝇品系为 黑腹果蝇 品系：Canton-Special 或 Canton-S (CS)， w1118Cs10 （或 W - w1118 与中国台湾、俄勒冈和撒马尔罕果蝇均来自本实验室品系的野生型果蝇杂交10代以上 162011年秋季，在美国纽约长岛亨廷顿的埃尔伍德社区采集了埃尔伍德果蝇 8除非另有说明，本文展示的结果均使用Canton-S品系果蝇（以红色系表示）获得。</li>
</ol>
3. 实验操作
<ol>
	<li>在中午12点至下午3点之间进行实验（即光照开始后的时间，即ZT 4至ZT 7）。</li>
	<li>准备用于转移果蝇的社会空间装置。
	<ol>
		<li>将社会空间装置平放在工作台面上，使带有矩形间隔块的一侧靠近身体。</li>
		<li>取下靠近身体一侧的一个夹子，并将其中一个矩形间隔块向外滑动，使两个矩形间隔块之间形成约1 cm的缝隙。</li>
		<li>使用胶带和记号笔在装置的上方角落标记性别、品系和重复编号。注意确保胶带不会遮挡内部三角形实验区域的一部分。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将果蝇转移至社会空间装置中。
	<ol>
		<li>将果蝇从其原含食物的试管转移至一个新的空试管中。用吸管从空试管中吸取果蝇，并将其转移至社会空间装置中。
		<ol>
			<li>通过吸气将果蝇吸入吸管的尖端，将尖端插入社会空间装置中两个矩形间隔块之间的1 cm缝隙中，然后以稳定的速度呼气，将果蝇推入内部三角形实验区域。</li>
			<li>立即把矩形间隔块滑回原位，封闭内部三角形区域的底部，并重新装上文件夹夹子。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>在敲击垫上（该垫位于与实验操作台不同的实验台上），将社会空间装置垂直竖立，使矩形间隔块位于底部。敲击三次，确保所有果蝇均已落至实验区域底部。 
	注意：由于丙烯酸间隔块突出于最小腔室尺寸（图1D），在保持牢固握持装置的同时，可用肘部轻敲工作台面，以确保果蝇全部落到底部。</li>
	<li>启动计时器。</li>
	<li>将社会空间装置放置在工作台面上，并使用支撑架和烧瓶夹固定其垂直状态。将一把直尺或已知长度的贴纸平贴于社会空间装置外侧，但不得遮挡内部三角形实验区域的任何部分。
	<ol>
		<li>对于水平放置的实验，不要将社会空间装置放入支撑架中；而是将其平放在工作台面上。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>当果蝇基本静止后（通常约30分钟后），拍摄社会空间装置的照片。确保照片中包含完整的内部三角形实验区域、直尺和标签。</li>
	<li>对每种基因型和实验条件重复该实验（理想情况下进行3次内部重复和3次独立重复）。</li>
</ol>
4. 分析社交空间数据
<ol>
	<li>在 ImageJ 中导入以下宏17
	<ol>
		<li>ImageJ 可在此处获取：http://rsbweb.nih.gov/ij/。</li>
		<li>可通过将下方宏保存为名为 'Measure_Distances.txt' 的文件至 ImageJ/plugins 文件夹中的 macro 子文件夹，并使用 Help&#62;Update Menus 命令，在 Plugins 菜单中创建“测量距离”命令。</li>
		<li>将补充数据中提供的宏（最初发表于3）复制到一个 .txt 文件中。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将图片上传至计算机，并使用 ImageJ 打开一张图片。
	<ol>
		<li>通过在图片中的尺子上从 0 cm 标记画线至 1 cm 标记，然后在 Analyze 选项卡下选择 Set Scale 功能，将该距离设为 1 cm 的标尺（对于已知长度的贴纸采用相同方法）。在应用标尺前，请选择 Global 选项。</li>
		<li>使用 Image 选项卡下的 Crop 功能裁剪图片，使其包含所有果蝇，同时尽可能去除图片其余部分。</li>
		<li>通过在 Image 选项卡下的 Type 选项中选择 8-bit，将图片转换为黑白图像。</li>
		<li>通过进入 Image 选项卡下 Adjust 选项中的 Threshold 功能，去除图片中所有背景噪声。拖动滑块以增强或降低对比度，使每只果蝇的身体清晰可见，且图像中无其他标记。如果存在非果蝇的标记，使用矩形工具选中并删除。</li>
		<li>使用 Analyze 选项卡下的 Set Measurements 工具设置测量参数。选择 Area、Center of Mass、Centroid 和 Display Label。然后选择 Analyze 选项卡下的 Analyze Particles 功能，生成代表果蝇的所有黑色斑点的编号列表。
		<ol>
			<li>使用 Analyze Particles 时，设置大小为 0.01–0.1（不要选择像素单位），圆度为 0.00–1.00，显示轮廓，显示结果，并添加至管理器。</li>
			<li>通过将编号列表与原始图片进行比较，确保每个黑色斑点（每个粒子）准确代表原始图片中的果蝇。 
			注意：如果某些靠得很近的果蝇被计为一个粒子，可在二值图像上手动绘制一条白线以分离两只果蝇。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>在选中列表的情况下，使用 Plugins 选项卡中第二个 Macros 选项下的 Nearest Neighbor — List Distances 宏，生成一个新列表，其中包含每只果蝇到其最近邻果蝇的距离（单位：cm）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>从 ImageJ 中复制最近邻距离数据，并粘贴到电子表格程序的一列中。
	<ol>
		<li>将每次重复实验的数据汇总到同一张电子表格中，并按基因型和条件进行整理。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用统计软件进行数据分析。本实验中使用 Graph Pad Prism（MacOSX 版本 6，GraphPad Software，美国加利福尼亚州圣地亚哥，www.graphpad.com）进行单因素方差分析（one-way ANOVA）和 Kruskal-Wallis 检验，以及 Tukey 和 Dunnett 事后检验。</li>
	<li>距离分布符合非参数分布1，数据以箱线图和 Tukey 须线图表示（以剔除异常值）。</li>
</ol>
5. 攀爬实验（对照行为）
<ol>
	<li>使用攀爬实验作为对照来检测果蝇的攀爬能力 14,15,18.
	<ol>
		<li>使用逆流装置，以便可同时平行进行三个试验。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将50至100只未受过测试的果蝇（naïve flies）分别转移至三个不同的测试小瓶中，并迅速插入1st, 3rd 在逆流装置底部的最后几个槽位，用新的空瓶替换相对位置的瓶子。</li>
	<li>将新的空管置于仪器底部的空位中。</li>
	<li>轻敲装置三次，使所有果蝇均位于每根试管底部，以启动实验。</li>
	<li>启动计时器，计时15秒（此时间足以使约3–7天龄的Canton-S果蝇全部到达上方瓶中——参见 图&#160;3F).</li>
	<li>将逆流装置的上部滑动，使顶部的试管依次移动一个槽位。</li>
	<li>轻敲装置，使所有果蝇落入底部的收集管中。
	<ol>
		<li>1st 和 2nd 管（或3rd 和 4th, 5th 和 6th）分别对应未到达顶部以及到达顶部小瓶的果蝇。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>计算性能指数（PI）。
	<ol>
		<li>统计每个小瓶中的果蝇数量。</li>
		<li>PI 是指能够爬升至上方试管的果蝇所占的百分比。</li>
		<li>PI 的均值服从正态分布1，数据以均值加减标准误（SEM）的柱状图表示。 
		注意：或者，PI 也可以计算为能够在规定时间内到达下部试管上部区域的果蝇百分比（对于年老果蝇，5 秒已足以通过静止图片量化感染与未感染的 12 日龄 Canton-S 果蝇在攀爬能力上的差异：见结果部分）。其他研究者也曾采用不同的惊吓诱导负向趋地性表现指标，这些指标同样适用于量化攀爬能力。 19-22.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

在本实验方案中，描述了量化社交距离的详细步骤。为确保实验成功，一些关键步骤包括：1）在清洁和设置装置时务必佩戴手套，以避免手上的油脂和气味污染装置的内室；2）果蝇应在实验前至少一天收集，以减少低温麻醉可能带来的影响；3）实验前2小时提供装有新鲜食物的新培养管，确保果蝇未处于饥饿状态并已完成自身清洁；4）在这2小时内，让果蝇适应其新环境；5）记录实验时的温度和湿度条件，尽量保持在24–25 °C和50%湿度范围内一致；6）实验过程中务必避免扰动社交距离检测室；7）每天在相同时间进行实验，最好在昼夜节律时间ZT4至ZGT7之间进行。
当果蝇的整体耐力和攀爬能力允许时，我们发现垂直放置的实验装置是最佳选择，因为它会迫使果蝇聚集得极为紧密，随后促使它们彼此分离并寻找各自理想的社会空间。对照组果蝇通常靠得更近，从而更有利于区分空间分布上的差异。此外，果蝇在垂直环境中通常会更快地稳定下来，这可能是因为这种条件更接近其熟悉的状态，至少在实验室环境中如此。事实上，果蝇通常被饲养在垂直放置的小瓶或瓶子中，常可观察到它们安静地聚集在这些食物容器的侧壁上。然而，对于因衰老、遗传或生理原因导致运动或攀爬能...

社会互动对于群体中个体的正常发育和健康至关重要，这种现象在众多物种中均可观察到，从人类（Homo sapiens）到较为简单的生物如果蝇（Drosophila melanogaster）5,6。无论是果蝇还是人类个体，在这些互动过程中都具有处理感觉信息的共同方式，包括听觉、视觉、嗅觉、触觉或味觉。我们及其他研究者推测，社会互动行为反应背后可能存在共有的神经环路，且所涉及的神经细胞和基因可能在进化上具有保守性7。一旦初始互动发生，互动个体之间的社会距离会随之增加（社会回避8）或减小（群体形成/聚集5）。随后可能发生更为复杂的互动行为，例如攻击性行为或求偶行为。
量化这种简单的社会行为既不需要复杂的工具和方法，也不需要投入大量时间和培训，因此它是一种强大的分析工具。本文将详细说明一种用于量化果蝇间距离（即社会空间）的简单实验方案，以评估稳定群体中黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的社会互动行为，该方法已在以下研究中应用1-4,9。社会空间是指一只果蝇与其最近邻个体之间的距离的度量10。当实验条件保持一致时，特定黑腹果蝇（D. melanogaster）群体的社会空间具有可重复性（平均约为1-2个体长），且会随果蝇的社会经历而变化：若个体曾被单独饲养，则其社会空间会增大1。正常视觉对于维持正常社会距离是必要的，但经典气味分子或cVA感知则非必需1。因此，社会空间的测量可作为诊断工具，用于分析黑腹果蝇（D. melanogaster）的社会互动并量化其社会行为1。 本文将详细描述如何进行该量化操作，以及常见实验变量对此行为的影响程度。
我们发现，实验所用培养室的摆放方向以及果蝇的数量（在一定程度上）会影响果蝇的社会空间。先前的研究表明，培养室的几何形状会影响果蝇的自发探索行为11,12，这种现象最终可能影响果蝇选择停留的位置。然而，只要果蝇的密度（果蝇数 / cm2）和培养室的方向保持一致，果蝇的社会空间也保持恒定。该实验方法的稳健性体现在：不同的独立实验室即使使用不同大小、形状和方向的培养室，仍能重复出white基因突变体（影响眼睛色素）所表现出的结果，即社会空间增加（见文献1中的垂直三角形或水平圆形，以及文献3中带气流的水平方形）。
我们的结果还表明，保持社交空间实验的进行时间对于结果的一致性至关重要，因为我们发现雄性果蝇在傍晚时距离更远，而雌性则没有这种现象。然而，白天与傍晚之间的差异并非由果蝇活动量的不同所致，我们讨论了相关论据，表明活动水平与社交空间之间并无关联。
最后，社会空间的确定具有遗传基础，这一点已由前述的white突变体1,3以及本文所展示的不同近交系和野生捕获果蝇品系之间的差异所证实。
因此，该检测方法是研究遗传因素以及环境因素影响的理想工具。

<table><tbody><tr><td>体视变倍显微镜&amp;nbsp;</td><td>Nikon&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>SMZ-645</td><td>任何其他用于果蝇操作的标准显微镜均可使用</td></tr><tr><td>小型画笔&amp;nbsp;</td><td></td><td></td><td>用于推动果蝇</td></tr><tr><td>Jazz-mix</td><td>Fisher</td><td>33545</td><td>任何其他标准果蝇培养基均可使用</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>迷你报警计时器/秒表</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&amp;nbsp;Sharpie 记号笔</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>胶带</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>中号文件夹夹子</td><td>Staples</td><td></td><td>用于固定实验腔室：1-1/4&quot;（32 mm）中型夹子，夹持能力为 5/8&quot;</td></tr><tr><td>小型支撑架</td><td>Carolina&amp;nbsp;</td><td>707161</td><td>用于将实验腔室保持垂直方向</td></tr><tr><td>滴定管夹</td><td>Carolina</td><td>707362</td><td></td></tr><tr><td>数码相机</td><td>Nikon</td><td>&amp;nbsp;Coolpix S8000&amp;nbsp;</td><td>用于拍摄静态图像</td></tr><tr><td>小型直尺</td><td></td><td></td><td>用于图像比例标定</td></tr><tr><td>三折板和白色实验台覆盖物</td><td></td><td></td><td>提供白色背景和均匀光照</td></tr><tr><td>减震垫</td><td></td><td></td><td>任何鼠标垫均可使用</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prism 6</td><td>GraphPad Software Inc.</td><td>Prism 6 for Mac OS X</td><td>任何具备 t 检验、单因素和双因素方差分析功能的统计分析软件均可使用</td></tr></tbody></table>

影响社交空间的条件 黑腹果蝇

Conditions Affecting Social Space in Drosophila melanogaster

本文所述的社会空间实验可用于以简单直接的方式量化黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）或其他小型昆虫的社会互动行为。正如我们先前所证明的1，在二维实验腔室中，我们首先迫使果蝇聚集形成紧密群体，随后允许它们自行选择彼此之间的偏好距离。待果蝇稳定分布后，我们通过免费在线软件（ImageJ）分析静态图像，测量每个个体与其最近邻个体之间的距离（即社会空间）。对最近邻距离的分析使研究人员能够在控制潜在混杂因素的前提下，确定遗传和环境因素对社会互动的影响。多种因素，如果蝇的攀爬能力、一天中的时间、性别以及果蝇数量，均可能影响其社会间距。因此，我们建议设置一系列实验对照，以减轻这些混杂效应。该实验至少可用于两个目的：第一，研究人员可探究其关注的环境变化（如隔离、温度、应激或毒素暴露）对果蝇社会间距的影响1,2；第二，研究人员可解析这种基本社会行为背后的遗传与神经机制1,3。具体而言，我们曾将其作为诊断工具，用于研究在其他生物中被认为参与社会行为的同源基因的功能，例如人类孤独症谱系障碍的候选基因4。

社交空间实验装置可用于量化黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的社交行为。通过将丙烯酸垫片与玻璃板夹合在一起，形成一个内部三角形区域，为果蝇提供一个二维空间，使其能够在排除多种潜在干扰因素的情况下形成稳定的群体。当果蝇被转移至垂直放置的实验区域时，通过轻敲使其受到惊吓，引发逃避反应——负向趋地性。果蝇会向上爬行至直立三角形的顶点，在该处被迫聚集形成紧密群体，随后给予其一定时间逐渐分散并探索整个实验区域。经过20至40分钟后，果蝇停止移动，形成稳定的群体结构。通过拍摄图像可测量每只果蝇与其最近邻个体之间的距离，从而量化其偏好的社交空间。果蝇与其邻近个体的距离越近，被认为其社交性越强。
在达到容量不足的临界点之前，果蝇密度在腔室内对社交距离没有影响。对于放置在较大垂直腔室中的20至70只果蝇的大群体而言，社交距离与群体密度无关（图2A,B）。当社交距离腔室中仅有10或15只果蝇时，个体数量很可能不足以形成稳定的社交群体，从而导致社交距离增加（图2A,B）。然而，在某些情况下，测试...

通过一种强大而直接的分析范式，可以量化基因和环境对黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）社会空间的影响。本文展示了可能影响该社会空间的不同因素，因此在设计此类范式实验时需予以充分考虑。

此处描述的社会空间实验可用于量化黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）或其他小型昆虫在……中的社会互动行为

本实验的总体目标是量化果蝇社会行为的一个方面，即它们偏好的社会距离。首先组装社会空间室以实现这一目标。同时，将一组果蝇转移至新的离心管中，并置于环境受控的检测室内进行适应性培养。两小时后，将果蝇群体转移至社交空间实验装置中。轻敲使果蝇沉降至底部，随后使用夹具将其垂直固定。待果蝇稳定后，记录其位置，并通过软件分析拍摄图像，计算果蝇之间的距离。最终，社交空间实验可量化一种社交行为，可用于研究影响该行为的环境因素和神经遗传学机制。与计算机辅助视频追踪等现有方法相比，该技术在量化社交行为方面的主要优势在于无需复杂的工具或方法，也无需在时间和培训上投入大量资源。该方法有助于回答社交行为研究领域中的关键科学问题。我们已将此方法作为一种诊断工具，用于研究自体基因在社会行为中所起的作用，以及这些基因在其他生物体中的功能，例如人类自闭症谱系障碍的候选基因。我最初产生这一方法的想法，是在加州大学洛杉矶分校（UCLA）注意到，储藏室中试管内的果蝇并非随机分布，而是在其间形成具有撕裂状间隔的聚集物。本实验流程描述了在佩戴手套的情况下开始组装社交空间实验装置的步骤。将一个三角形垫片放置在方形玻璃片上，使它们的角在一处对齐，然后放置第二个三角形垫片以镜像第一个。接着，将两个小型矩形垫片沿两个未覆盖的边缘放在方形玻璃片的顶部，从而使四个垫片形成一个三角形区域。然后用另一块方形玻璃片将垫片夹在中间，并使用四个夹子固定组件。从三角形垫片角开始，在四个角放置夹子，以确保正确组装。将腔室垂直放置，底边置于实验台上。室温应与果蝇培养温度相同，并保持相似的湿度。用于本实验的果蝇应在实验前一至两天在标准条件下饲养于培养瓶中，在低温麻醉下收集并进行性别分离。将40只果蝇实验种群放入新的果蝇培养管中。实验开始前两小时，将果蝇转移至新的培养管，并放置于实验台上，两小时后在此处装载实验装置。开始实验。移除最近端的夹子，并抽出矩形垫片，使垫片之间形成一厘米的间隙。可利用腔室的左上角位置粘贴标签，以标识正在测试的果蝇群体，但切勿遮盖测试区域的任何部分。现在将群体转移到一个新的空瓶中，并用吸管将果蝇从瓶中吸出。接着，将吸管的尖端插入缝隙中，轻轻且均匀地呼气。果蝇应全部被吹入实验区域。立即将矩形垫片滑回原位并重新装上夹子。轻敲三次，使所有果蝇震落到竞技场底部。启动计时器，并将竞技场放入受控环境舱中。将实验装置垂直固定在烧瓶上。在受控室的边缘用夹具固定，但不要固定在实验区域上方。在果蝇后方附上已知长度的尺子或标签。静置约30分钟。拍照记录整个实验区域，确保尺子在画面中。至此，实验结束。每种条件应设置三个重复。卸载实验装置时，将装置放入冰箱冷冻5到10分钟，然后将冻僵的果蝇倒入果蝇处理容器中。在ImageJ中打开所有用于分析的图片。使用直尺，在“分析”选项卡下的厘米刻度处创建标尺。选择“设置”、“标尺”，并按照提示操作。

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在条件影响社会空间<em&gt;果蝇</em

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影响社交空间的条件黑腹果蝇

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