2015年12月22日
本文介绍了一种构建快速布里渊光谱仪的方案。通过级联虚拟成像相位阵列(VIPA)标准具,可实现比传统扫描法布里-珀罗光谱仪快1000多倍的测量速度。这一改进使得在低激光功率下对组织和生物材料进行活体(in vivo)布里渊分析成为可能。
该光谱仪的总体目标是测量组织和生物材料的布里渊散射特征。布里渊散射光谱可提供有关材料特性的无接触、无创信息,例如纵向弹性模量。该方法有助于解答组织生物力学中的关键问题。例如,在角膜组织中,我们可测量角膜强度,以辅助圆锥角膜的诊断与治疗。
该技术的主要优势在于,我们可以在低光功率下进行光谱分析,从而确保其在活体中应用的安全性,实现生物成像。首先将相机和光纤放置在光学平台上合适的位置。此处,一台E-M-C-C-D相机安装在光路的一端。相机应持续采集图像,并将其显示在监视器上。
在相机前方约 1600 毫米处,将一个光纤准直器置于与相机相同的高度。将该准直器连接至单纵模激光器。
使用低于0.1毫瓦的激光功率,并通过沿期望的光轴移动光阑来检查光路对准情况。此示意图概述了当前的装置设置。接下来,在相机前方添加一对芳香族透镜。
这对匹配的消色差透镜组的焦距为30毫米。现在开始添加用于水平平台的元件。首先,在一个水平平移台上添加一个水平掩模,使其通过消色差透镜成像在相机上。
载物台应沿垂直于光束路径的方向移动。在计算机屏幕上监控图像,以确认图像显示出与此照片中相同的清晰边缘。随后准备在水平掩模前方600毫米处放置一个球面透镜。
首先,在支架和支架座上各安装两个光阑,以辅助光束准直;将其中一个光阑置于预定透镜位置与水平掩模之间,另一个光阑置于预定透镜位置之后。确保光阑的高度使光束能够无遮挡地穿过这两个光阑。
完成对准检查后,继续使用安装在支架上的球面透镜,其焦距为200毫米。使用透镜支架将该透镜置于两个光阑之间的水平掩模前方600毫米处,并固定透镜支架。以下是球面透镜S1就位后装置的示意图。
接下来要添加的元件是虚拟成像相位阵列(VIPA)中的第一个。要安装VIPA,需先在光学平台上放置一个水平平移台。在球面透镜前方约200毫米处,调整平移台方向,使其移动方向垂直于光束方向,并在平移台上固定一个安装在支撑杆及支撑杆夹具上的VIPA支架。然后取出待安装的VIPA元件。
每个 vipa 都有一个入口狭缝,该狭缝必须针对此 vipa 正确取向。将 vipa 放入 vipa 持架中,使狭缝垂直取向,并微调 vipa 安装座的位置,使 vipa 入口 precisely 位于球面透镜的焦平面上。
继续将 VIPA 移出光路,以完成后续的光路搭建。接下来,准备放置第二个球面透镜,将其置于水平方向带光阑的掩模前方 200 毫米处,两侧使用可调光阑进行准直对准。请注意,在示意图中 VIPA 2 被偏移显示,以表明其处于光路之外。使用安装在平移台上的支架,将球面透镜固定在两个光阑之间。
在继续操作前,调整平移台的方向,使其沿光路移动。检查透镜的后向反射光是否能顺利通过光阑。同时,检查出射光束是否能顺利通过透镜另一侧的光阑。
然后移动 VIPA,使其入口 SL 再次位于光路中。通过调节其安装的平移台位置来完成此操作。当光进入 VIPA 时,观察计算机显示器上相机图像的垂直线。
继续调整第二个球面透镜的位置,同时观察显示器上的线条。微调平移台以使线条更加清晰,当线条聚焦时停止调整。接下来,操作 VIPA 持有装置。
为调整光谱,使用水平平移自由度来调节光束进入狭缝的位置。在平移入口狭缝时,观察计算机显示器上图像的响应变化。此外,使用水平倾斜自由度来调节光束进入光谱仪的输入角度。
再次在计算机屏幕上监控图像,以获取倾斜调整的反馈。此时,光谱仪的水平调节已完成。要设置垂直调节装置,请使用平移台将 VIPA 从光束中移出。
接下来,在位于球面透镜前方 200 毫米处的位置,将一个垂直掩模安装在垂直平移台上,以便使掩模能够移出光路。确保该垂直掩模在 CCD 相机上成像清晰。
下一个组件将是柱面透镜,位于垂直光阑前方600毫米处。使用支架将一个焦距为200毫米的透镜放置在两个光圈之间。
第二个VIPA将安装在圆柱透镜前方200毫米处的垂直平移台上。将VIPA支架置于垂直平移台上,以便将VIPA移出光路。使用支撑杆和支撑杆夹具将VIPA固定到平移台上,并注意使其入射狭缝精确处于水平方向。
调整 vipa 的位置,使其精确地位于柱面透镜的焦平面内,然后将其移出光路。最后一个元件是第二个柱面透镜。
将平移台放置在垂直掩模前方200毫米处。对于此透镜,将平移台沿光路方向安装,并在平移台上对准第二个柱面透镜。然后返回到最近放置的VIPA(VIPA 1),将其重新移入光路中。
利用垂直平移自由度调节光束进入波导的入射位置。在计算机显示器的相机图像上观察调节效果。随后调节垂直倾斜自由度,以优化光束的入射角度。
观察计算机显示器,以获取调整效果的反馈。现在将系统的两个阶段组合起来,通过滑动VIPA二,将其第一个安装到光路中。
在观察水平和垂直排列的点时,调节 vipa S。当点的光谱特征与单频激光器的光谱特征聚焦一致时,计算机显示器将停止变化。使用该软件中的相机软件拍摄此光谱特征的图像。
右键单击图像,选择线图选项。对角拖动光标穿过图像以生成线图。然后释放光标以查看线图,在此示例图中,用于确定精细度的两个必要测量值已标出。
首先,测量两个点之间的对角线距离,即自由光谱范围。接着,测量半高全宽。将自由光谱范围除以半高全宽,若比值大于30,则继续后续操作。
回到实验台后,用一个覆盖遮光布的箱形框架将光谱仪包围起来(如图所示为另一种设置),在继续操作前,确保掩模和VIPA易于接触。最后,将光纤连接至标准光学探头。本例中,使用共聚焦显微镜。
采用未遮盖的装置来演示测量布里昂位移的步骤。首先,选择其中一个待调节的掩模。本例中,通过微米计开始闭合水平方向的掩模。
在计算机显示器上观察激光特征。目标是遮挡在角落处可见的激光特征。使用平移台将掩模在水平方向上居中,以帮助遮挡该特征。
继续在监视器上观察激光信号的行为。通过反复关闭和移动掩膜,直到信号被完全遮挡。然后对垂直方向的掩膜进行相同的操作。
加载样品后,打开垂直位舞台光阑以开始优化垂直位舞台的通量。接着进入垂直位舞台 VIPA,逐一改变 VIPA 的倾斜位置,以在不同输入角度下扫描光谱仪的衍射级次,并停留在信号最锐利的级次处。随后再次关闭光阑,直至激光信号消失。
在进行测量之前,使用水平掩模和 VIPA 重复优化过程。以下是测得的甲醇、乙醇和聚苯乙烯的 Brion 光谱。在这些图中,测量数据以蓝色显示。
联曲线拟合以红色表示。所用的法布里-珀罗标准具厚度为五毫米,产生的自由光谱范围约为20吉赫兹。积分时间为100毫秒。
共进行了100次测量并取平均值。Brion位移与之前发表的结果一致。该直方图显示了在甲醇连续250次测量中得到的Brion位移分布。
这些数据有助于确定光谱仪的校准是否处于最佳状态。一台校准良好的光谱仪,在样品上的光照功率为五毫瓦、积分时间为100毫秒的条件下,其标准偏差约为10兆赫。在执行此操作时,需注意在使用激光光或散射光时,应及时调整相机设置。
否则,E-M-C-C-D 相机将因饱和而随时间推移性能下降。请务必注意,使用激光器可能具有极高危险性,操作时必须采取预防措施,例如切勿直视激光束,始终佩戴护目镜,并在低于眼睛水平的位置进行光路准直。
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本文介绍了一种利用级联虚拟成像相位阵列(VIPA)法布里-珀罗标准具构建快速布里渊光谱仪的实验方案。该创新方法显著提高了测量速度,能够在低功率条件下实现对组织和生物材料的活体布里渊分析。
高速亚GHz布里渊光谱技术可实现对生物组织和生物材料黏弹性特性的非接触式定量测量。该技术满足了早期发现和转化研究中对快速、安全且可重复的生物力学表征的关键需求。该方法有助于提升对组织力学行为的预测可靠性,从而支持在整个生物制药研发流程中进行基于风险评估的决策。
该光谱分析方法贯穿早期发现到临床前研究的全过程,连接了假设验证、检测方法开发和转化验证。