2016年1月22日
注意性设转移认知异常是多种精神疾病的核心特征。本文介绍了一种新型自动化系统,可用于高效研究小鼠的注意性设转移能力、执行功能及其他认知能力,该系统与人类研究具有高度的可转化性。
本实验的总体目标是创建一种自动化任务,用于评估小鼠的执行功能,并模拟最初的人类神经心理学测试。该方法有助于回答认知神经科学领域的一些关键问题。例如,选择性认知或药物治疗如何影响与精神疾病相关的高级认知功能。
该技术的主要优点在于其完全自动化,避免了任何主观性来源,具有很高的灵活性,并且我们获得的结果具有很强的选择性。
该技术对于精神疾病中执行功能障碍的诊断和治疗具有重要意义,因为它能够进行与精神疾病认知症状相关的大量药物和基因筛选。该方法的可视化演示至关重要,因为正确设置该任务对实验的成功结果十分关键。按照随附的文字方案所述,在测试前使小鼠适应单只饲养并进行轻微的食物剥夺,以完成实验前的准备工作。
测试前还需确保仪器的每个腔室均配备两个带红外光电束的鼻触孔,两孔之间设有带光电束的食物仓,食物强化物由颗粒分配器送入食物仓。接下来,准备可在三个不同感知维度上变化的可更换刺激材料。建议使用的刺激材料列表见随附文字方案中的表一。
为每个维度选择五对示例。为了将嗅觉刺激传递到鼻触孔中,使用稀释式嗅觉仪。设置一台嗅觉仪以控制两个鼻触孔,然后通过将气味瓶填充用矿物油按1比20稀释的气味溶液来加载设备。
将气泵连接到嗅觉仪的进气口,并将真空泵连接到鼻触装置上安装的出气口。然后,将气味输送出口连接至每个鼻触入口,并将流速调节至1.5升/分钟。对于视觉刺激,将发光二极管放置在每个鼻触孔的上方,并将其固定在实验舱的金属面板上。
将每个二极管连接到输出接口。对于触觉刺激,将可更换的地板纹理放置在每个鼻触孔前方一个3厘米×3厘米开口下方的滑动支架上。安装不同的纹理,使其可通过地板下方的框架进行移动。
在开始测试前,务必按照随附的文字实验方案进行训练,使小鼠适应测试环境和流程。在实际测试的每个阶段,记录小鼠在每次呈现刺激时做出选择所需的时间,以及在连续10次试验中完成8次正确选择所需的时间,以评估各阶段表现。每日测试会话在持续40分钟后停止,或当小鼠连续5分钟未做出任何反应时即终止。
结束本次实验,次日继续,使小鼠从之前停止的相同阶段开始。对于简单辨别测试,向小鼠引入一种在所有任务中均相关的气味、光线或质地,直至进行域间转换。在此示例中,呈现两种气味:香草和薰衣草,其中香草被设定为正确反应。
在进行化合物辨别时,引入一个不指示正确反应位置的第二维度,例如光刺激。使光的状态与结果无关,并始终将香草味作为正确反应。测试这种辨别能力时,在后续测试中将香草味分别与蓝光和黄光配对呈现。
为了逆转化合物的辨别,让动物学会原先正确的刺激现在变为不正确。在此示例中,选择薰衣草作为正确反应,而香草则为不正确选项。在后续测试中,再次将正确气味与蓝光和黄光同时配对。
随后,选择一种维度内转换,即设计发生整体变化。使用草莓和肉桂作为气味,并将灯光更换为橙色和白色。确保受试对象遵循相同的有关维度,以找到正确反应,即草莓。
在后续测试中,将气味与橙色和白色灯光同时配对。然后让小鼠执行维度内转换的逆转任务,并将正确的气味切换为肉桂味。再次将该气味与橙色和白色灯光同时配对。
进行维度内转换时,使用与之前相同的条件,但将示例配对更换为新的气味和灯光组合。现在通过引入纹理作为新的相关维度来进行维度间转换。将粗砂纸放置在一个鼻触孔下方的开口处,将细砂纸放置在另一个开口下方。
同时向其呈现两种新的气味,例如柠檬和杏。将带有相应粗砂纸的孔设置为正确反应。在后续测试中,将粗砂纸与柠檬和杏的气味同时配对。
最后,反转正确的反应,使细砂纸指示正确反应的孔位。在后续测试中,将细砂纸与柠檬和杏子气味配对。对于二维实验方案,重复进行僵化集内程序,直至完成跨维度转换。
不要在此时切换到纹理和气味维度,而是切换相关维度,使光线成为相关维度,而气味成为无关维度。设置新的跨维度转换,使此时的光线为红色和绿色,其中绿光作为正确反应的信号,而气味则为无关维度。
在后续阶段,测试绿光与两种气味的配对。对于反转阶段,使用相同的气味,但进行切换,使红光成为正确反应。在后续阶段,将红光与两种气味进行配对。
当一只小鼠完成实验后,使用70%乙醇擦拭实验装置,以便为下一只小鼠做好准备。始终以相同的顺序进行测试,但在不同的测试中更换刺激内容,确保所选的每种刺激在研究中出现的频率相等。此外,务必在各实验组内和组间对感知维度进行均衡交叉平衡。
在此新型装置中,视觉、触觉和气味辨别达到标准所需的时间和试验次数相似,表明动物能够执行简单的辨别任务,而与所呈现的维度无关。在使用“卡组”(stuck-in-set)协议时,对小鼠表现的分析显示,在额外维度转换阶段,小鼠需要更多的试验次数和更长的时间来完成任务,相较于复合辨别、维度内转换、维度内转换2以及额外维度转换反转阶段均表现出辨别效应。在双维度协议中也观察到相同结果。
一旦掌握,该实验包括所有准备和训练在内可在 10 至 12 天内完成。
本研究介绍了一种新型自动化系统,旨在评估小鼠的注意力转移和执行功能,对人类认知研究具有高度的可转化性。该方法旨在增进对精神疾病中认知功能障碍的理解。
这种自动化的操作性集合转移任务通过提供一种客观、高通量的平台来评估小鼠的认知灵活性,解决了临床前神经精神研究中的一个关键空白。该系统通过紧密模拟人类的辨别/辨别转移(ID/ED)范式,能够对与精神分裂症和注意缺陷多动障碍(ADHD)等疾病相关的执行功能障碍的化合物和遗传模型进行转化筛选。通过在感知维度上实现高刺激灵活性,并量化注意力集的形成、转移和反转学习,该系统可在早期药物发现阶段支持机制性风险降低并提高预测可信度。
该任务贯穿从靶点验证到先导化合物筛选的发现全过程,提供了一种标准化的行为学检测方法,架起了基础机制研究与表型筛选之间的桥梁。其自动化特性及可量化的输出结果,有助于将其整合到神经精神类药物发现的多模式评估流程中。