一个行为分析对机械感觉MARCM为基础的克隆果蝇

为了识别影响机械感觉的新突变，我们设计了一种测定法，用于测量 MARCM 方法产生的突变克隆中对苍蝇刚毛触觉刺激的行为反应。技术的组合可以识别原本致命的机械敏感突变。

该程序的总体目标是测试影响成年果蝇的 Meno 感觉的突变。这种方法可以帮助识别美诺感觉领域的关键问题，例如识别美诺敏感通道。这项技术的主要优点是，通过使用马赛克动物，我们能够筛选出对生物体致命的突变。

通过使用马赛克筛选，我们能够识别更传统的行为筛选可能遗漏的突变。这种方法的视觉演示至关重要。行为测试步骤很难学习。

需要稳定的手和练习来识别相关的刷毛。要开始实验，请将果蝇保持在玉米面糖蜜培养基上并将它们储存在培养箱中。从含有必要遗传元件的 markum ready 库存中获得处女雌性。

将 markum ready 处女雌性杂交到包含感兴趣突变及其相应 FRT 位点的雄性。接下来，使用包含相同 FRT 位点但没有突变的雄性果蝇设置第二个对照杂交。以 5 只雌性对 1 只雄性的比例，在让果蝇交配至少一晚后，将成虫转移到装有新鲜培养基的新小瓶中。

让苍蝇在室温下在黑暗的橱柜中产卵。果蝇产卵后，将杂交转移到新的小瓶中。记录产蛋期的开始和结束时间。

保留产生 20 个以上鸡蛋的小瓶进行热休克，并将其放回培养箱。产蛋后 85 到 100 小时，将小瓶放入水浴中，确保水位高于培养基的高度，但不要完全浸没小瓶。一小时后，从水浴中取出样品瓶，并为果蝇提供恢复期。

回收后，将样品瓶放回水浴中 1 小时。麻醉后，将小瓶从水浴中取出并存放回培养箱中。冰上的苍蝇。

一旦果蝇静止不动，选择包含所有所需特征的个体。接下来，用虹膜切除术剪刀小心地将选定的苍蝇斩首，小心地将剪刀放在头部和胸部之间。在不划伤胸部的情况下切断连接。

将无头苍蝇放在封闭、潮湿的环境中，让它们在恢复后恢复 10 到 20 小时。取回苍蝇进行检查。只使用会自己写的苍蝇。

当受到干扰时，在荧光解剖显微镜下观察被斩首的果蝇，以识别用 GFP 标记的纯合子克隆。在刷毛处有外部感觉器官。记录鬃毛名称，无论它是在苍蝇的左侧还是右侧，通过用坚硬的毛发或细镊子将 GFP 标记的鬃毛偏向苍蝇身体来引发梳理反射，并观察腿部反应。

刷毛刺激而抬起腿的苍蝇的窦性评分为 1，对不移动腿的苍蝇的窦性评分为 0。如果可能的话。我们测试了在 AOR 后刷毛上具有马赛克组织的果蝇，使用 AOR 后刷毛的行为测定对刺激反应良好，而类型果蝇与已知的机械敏感突变体进行了比较，没有机械受体电位 C 或 NMSI 破坏了梳理反应 控制果蝇对 34% 的刷毛刺激有反应。

相比之下，具有 NMSI 纯合子刷毛的动物表现出 2% 的反应。遵循此程序并鉴定新的行为反应基因，可以使用其他实验，例如电生理学和蛋白质定位。例如，为了进一步描述该基因的作用，我们可以回答该基因是否参与 meno 感觉转导或 menos 感觉神经元的发育的问题。