Examination of Proteins Bound to Nascent DNA in Mammalian Cells Using  BrdU-ChIP-Slot-Western Technique

Srividya Bhaskara

doi:10.3791/53647

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Biology

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Examination of Proteins Bound to Nascent DNA in Mammalian Cells Using BrdU-ChIP-Slot-Western Technique

考试蛋白在哺乳动物细胞中绑定到新生的DNA使用的BrdU芯片插槽西方技术

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09:14 min

January 14, 2016

DOI: 10.3791/53647-v

Srividya Bhaskara¹

¹Department of Radiation Oncology, Department of Oncological Sciences, Huntsman Cancer Institute,University of Utah School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

在该协议中，我们描述了一种新颖的 BrdU-ChIP-Slot-Western 技术，用于检查与新合成或新生 DNA 相关的蛋白质和组蛋白修饰。

该程序的总体目标是使用 BrdU 标记和染色质沉淀快速准确地检查与新生 DNA 结合的蛋白质。这种方法可以回答染色质领域复制、修复中的关键问题，例如，在 DNA 复制过程中哪些蛋白质与新生 DNA 结合，以及在复制应激期间哪些修复蛋白与新生 DNA 结合。该技术的主要优点是它是一种相对快速的方法，可以以高度定量的方式检测与新生 DNA 结合的蛋白质。

首先，在 10 毫升含有 DMSO 或抑制剂的培养基中建立 200 万个 NIH 3T3 细胞的培养物。此外，添加 BrdU 至终浓度为 20 微摩尔。铺板后，将细胞孵育 60 分钟。

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