Name: 分离，鉴定和牙龈免疫细胞网络的功能性考试 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-16T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: 学习从小鼠牙龈中分离免疫细胞的方法，用于口腔免疫学和牙周炎研究。该技术可获取足够数量的活细胞，支持下游体外功能分析，帮助揭示牙周病发病机制中的细胞因子网络。

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作者的部分经费来自NIDCR的院内研究项目（N.M.M），并获得了威康信托基金会阶梯奖学金（Wellcome Trust Stepping Stones Fellowship，项目编号097820/Z/11/B，授予J.E.K）以及曼彻斯特炎症研究协作中心资助（授予J.E.K）的支持。作者感谢Teresa Wild对稿件的审阅。

本方案中描述的所有实验程序均遵循必要的指导原则，并已获得美国国立牙科与颅面研究所/美国国立卫生研究院机构动物照护与使用委员会的批准。
1. 提前准备
<ol>
	<li>配制完全培养基：RPMI 培养基中添加 2 mM L-谷氨酰胺、100 单位/毫升青霉素、100 µg/mL 链霉素和 10% 胎牛血清（FBS）。</li>
	<li>配制 DNase 培养基：50 mL RPMI 培养基中加入 7.5 µg DNase（现配现用，全程置于冰上）。</li>
	<li>配制胶原酶-DNase 培养基：在 5 mL DNase 培养基中加入 3.2 mg/mL IV 型胶原酶（Collagenase Type IV）（现配现用，全程置于冰上）。</li>
	<li>预冷 FACS 缓冲液：将 0.5% FBS 溶于 PBS 中。</li>
	<li>将离心机预冷至 4 °C。</li>
	<li>将摇床培养箱预热至 37 °C。</li>
</ol>
2. 牙龈组织块的分离、解剖及细胞分离
<ol>
	<li>根据ARAC指南，将小鼠置于适当的密闭容器中，通过暴露于CO2进行安乐死。</li>
	<li>打开胸腔和腹腔以暴露心脏和内脏器官。进行灌注时，在下腔静脉处做一切口，并使用带有27 G针头的3 ml注射器经左心室灌注3 ml PBS。</li>
	<li>将小鼠身体和头部固定在垫子上，腹部朝上。</li>
	<li>用剪刀从口角向颈部方向剪开每一侧口唇联合处，分离覆盖下颌和颈部区域的皮肤，暴露皮下组织和肌肉。解剖下唇以暴露下颌骨。</li>
	<li>在下门齿之间剪开，分离下颌骨两侧，并将每侧固定，以便进入口腔。</li>
	<li>观察并解剖腭部，使其与鼻腔分离。</li>
	<li>使用10号刀片进行解剖，取上颌和下颌磨牙区域及其周围牙龈组织（图1）。在第一磨牙前方和第三磨牙后方做垂直切口，并在牙龈边缘（牙齿周围白色组织环）做水平切口。</li>
	<li>将上颌和下颌骨组织块放入含有5 ml胶原酶/脱氧核糖核酸酶（Collagenase/DNase）的50 ml锥形管中（置于冰上保存）。</li>
	<li>在37 °C摇床培养箱中孵育1小时，在孵育最后5分钟时加入50 µl 0.5 M EDTA。</li>
	<li>向含有组织的50 ml管中加入5 ml冷的DNase培养基，轻轻旋转混匀。</li>
	<li>将4块组织转移至培养皿中，加入500 µl DNase培养基覆盖。使用手术刀片，刀刃朝向牙龈和牙间区域，去除每块组织上的牙龈组织。</li>
	<li>将培养皿中的组织和培养基，以及解剖过程中使用的先前DNase培养基，通过70 µm细胞筛网过滤至新的50 ml离心管中。用DNase培养基（3–5 ml）冲洗所有使用过的器械并过滤。</li>
	<li>使用无菌3 ml注射器的推杆，在筛网上研磨组织，同时用冷的DNase培养基（30至35 ml）过滤。</li>
	<li>用冷的DNase培养基冲洗细胞筛网。</li>
	<li>在4 °C下以314 × g离心6分钟。</li>
	<li>弃去上清液，用1 ml完全培养基重悬细胞沉淀。</li>
	<li>使用自动细胞计数仪计数细胞（预期细胞数量应在8 × 105至1.2 × 106之间，细胞活力&#62;80%）。</li>
</ol>
3. 牙龈细胞的刺激与FACS染色
<ol>
	<li>在含有1 µl/ml布雷菲德菌素A（Brefeldin A）的条件下，用PMA（50 ng/ml）和离子霉素（Ionomycin，2.5 µg/ml）刺激单细胞悬液。</li>
	<li>于37 °C、5% CO2条件下孵育3.5小时。</li>
	<li>离心后用PBS洗涤，并在4 °C下以314 × g离心6分钟。</li>
	<li>根据制造商说明书，使用活率染料对细胞进行染色。</li>
	<li>根据制造商说明书，对细胞表面标记物（CD45、TCRγδ、TCRβ、CD4、CD8、TCRγδ或自选抗体）进行染色。</li>
	<li>用冷FACS缓冲液洗涤细胞，并在4 °C下以314 × g离心5分钟。</li>
	<li>轻轻涡旋震荡以重悬细胞沉淀。</li>
	<li>用2%多聚甲醛在室温下固定细胞20分钟。</li>
	<li>用冷FACS缓冲液洗涤细胞，在4 °C下以314 × g离心5分钟，然后对细胞内细胞因子进行染色。
	<ol>
		<li>用冷的含0.5%皂苷（saponin）的FACS缓冲液填充FACS管，并在4 °C下以314 × g离心5分钟。</li>
		<li>向FACS管中加入300 µl 0.5%皂苷溶液，在4 °C避光孵育15分钟，然后在4 °C下以314 × g离心5分钟。</li>
		<li>根据制造商说明书，对细胞内标记物（IL-17A和IFNγ或自选细胞因子）进行染色。用0.5%皂苷溶液洗涤细胞，并在4 °C下以314 × g离心5分钟。</li>
		<li>再次用FACS缓冲液洗涤，并在4 °C下以314 × g离心5分钟。</li>
		<li>将细胞重悬于300 µl FACS缓冲液中。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>在流式细胞仪上分析结果。</li>
</ol>
4. 流式细胞术分析
<ol>
	<li>在前向散射（FSC）和侧向散射（SCC）图上观察待分析细胞，并设门以排除碎片。</li>
	<li>利用前向散射面积（FSC-A）与高度（FSC-H）参数选择单个细胞。</li>
	<li>设门筛选活细胞（由活力染色指示）以及表达造血细胞标志物 CD45+ 的细胞进行后续分析（图 2A 和 图 2C）。</li>
	<li>继续对特定标志物进行分析，如 图 2 和 图 3 所示。</li>
</ol>

<ol><li>Aas, J. A., Paster, B. J., Stokes, L. N., Olsen, I., Dewhirst, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+The+Normal+Bacterial+Flora+Of+The+Oral+Cavity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Defining The Normal Bacterial Flora Of The Oral Cavity.</a> J Clin Microbiol. 43, 5721-5732 (2005).</li>
<li>Belkaid, Y., Naik, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compartmentalized+And+Systemic+Control+Of+Tissue+Immunity+By+Commensals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Compartmentalized And Systemic Control Of Tissue Immunity By Commensals.</a> Nat Immunol. 14, 646-653 (2013).</li>
<li>Darveau, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periodontitis%3A+A+Polymicrobial+Disruption+Of+Host+Homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Periodontitis: A Polymicrobial Disruption Of Host Homeostasis.</a> Nat Rev Microbiol. 8, 481-490 (2010).</li>
<li>Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomicrobial+Pathogenesis+Of+Periodontitis%3A+Keystones%2C+Pathobionts%2C+And+Host+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunomicrobial Pathogenesis Of Periodontitis: Keystones, Pathobionts, And Host Response.</a> Trends Immunol. 35, 3-11 (2014).</li>
<li>Eke, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+Of+Periodontitis+In+Adults+In+The+United+States%3A+2009+And+2010%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Prevalence Of Periodontitis In Adults In The United States: 2009 And 2010.</a> J Dent Res. 91, 914-920 (2012).</li>
<li>Moutsopoulos, N. M., Lionakis, M. S., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inborn+Errors+In+Immunity%3A+Unique+Natural+Models+To+Dissect+Oral+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Inborn Errors In Immunity: Unique Natural Models To Dissect Oral Immunity.</a> J Dent Res. , (2015).</li>
<li>Hajishengallis, G., Lamont, R. J., Graves, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Enduring+Importance+Of+Animal+Modelsin+Understanding+Periodontal+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">The Enduring Importance Of Animal Modelsin Understanding Periodontal Disease.</a> Virulence. 6, 229-235 (2015).</li>
<li>Sharrow, S. O. Analysis Of Flow Cytometry Data. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSharrow%2C+SO+%22Current+Protocols+In+Immunology%22">Current Protocols In Immunology</a>. Coligan, J. E., et al. , Chapter 5, Unit 5 2 (2001).</li>
<li>Arizon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Langerhans+Cells+Down-Regulate+Inflammation-Driven+Alveolar+Bone+Loss%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Langerhans Cells Down-Regulate Inflammation-Driven Alveolar Bone Loss.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 7043-7048 (2012).</li>
<li>Moutsopoulos, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+Neutrophil+Recruitment+In+Leukocyte+Adhesion+Deficiency+Type+I+Disease+Causes+Local+IL-17-Driven+Inflammatory+Bone+Loss%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Defective Neutrophil Recruitment In Leukocyte Adhesion Deficiency Type I Disease Causes Local IL-17-Driven Inflammatory Bone Loss.</a> Sci Transl Med. 6, 229-240 (2014).</li>
<li>Gaffen, S. L., Jain, R., Garg, A. V., Cua, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+IL-23-IL-17+Immune+Axis%3A+From+Mechanisms+To+Therapeutic+Testing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The IL-23-IL-17 Immune Axis: From Mechanisms To Therapeutic Testing.</a> Nat Rev Immunol. 14, 585-600 (2014).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露

本技术能够从单只小鼠成功获得大量免疫细胞，不仅适用于表型鉴定，也适用于离体功能研究。ex vivo。此前已有研究团队发表了一种分离和表征小鼠牙龈免疫细胞的方案，并提出了在动物模型中研究牙周炎时应用多色流式细胞术的价值 9。经过大量问题排查，本方案的关键改进在于对整块组织进行解剖，以同时包含牙龈领圈区域和牙间牙龈（图1）。若仅进行牙龈解剖，往往无法获得全层瓣，尤其在牙间区域容易遗漏部分牙龈组织。采用本方法后，所收获的免疫细胞数量显著增加。该技术还可实现对上颌和下颌牙龈组织的最佳分离。
该方案的关键步骤包括对牙龈区域进行保守性分离以及保持高效的分离速度。具体而言，应分离包含牙齿周围最小量组织（牙龈）的组织块，避免包含颊侧组织。组织块应快速分离，且组织和细胞需始终保持在冰上，以确保细胞活性最佳。
在 troubleshooting 时需要注意，细胞产量低可能与胶原酶孵育时间不足、胶原酶浓度不当和/或从组织块中分离牙龈组织不充分有关。在此方面，使用放大镜（2X-...

牙龈组织包绕着人类和小鼠的牙齿，并持续暴露于复杂的牙菌斑生物膜中1。监视牙龈屏障的免疫细胞网络对于维持组织完整性至关重要，它既能确保与局部共生微生物的稳态平衡，同时又能有效抵御病原体的侵袭2。为了实现稳态，免疫系统会精细地适应牙龈微环境，形成高度特化的免疫细胞网络；然而，目前对牙龈免疫细胞群体的具体组成及其在维持组织免疫中的作用仍知之甚少2。
当牙龈部位的免疫稳态因宿主易感性增加和/或失调的微生物群落存在而遭到破坏时，便会引发一种炎症性疾病——牙周炎34。牙周炎是一种常见的炎症性疾病，可导致牙齿支持结构的丧失，在严重情况下约影响总体人群的10%5。然而，解析牙周炎易感性和进展过程中的关键因素已被证明十分困难6。动物模型在阐明牙周炎发生与进展机制方面发挥了极为重要的作用7。这些模型可用于界定对维持免疫稳态至关重要的关键细胞群体和分子介质，并揭示驱动牙周炎发展的机制。此类研究将彻底改变我们对牙龈局部免疫稳态调控机制的理解，并深化当前对疾病发病机制的认识。

<table><tbody><tr><td>精细剪刀</td><td>精细科学工具</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>3号手术刀柄</td><td>精细科学工具</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>10号手术刀片</td><td>精细科学工具</td><td>10010-00</td><td>无菌</td></tr><tr><td>碎屑镊</td><td>Integra Miltex</td><td>6-304</td><td></td></tr><tr><td>带普通斜面针头&amp;nbsp;</td><td>BD Medical</td><td>305109</td><td>27 G，12.7 mm 长度</td></tr><tr><td>Monoject 注射器</td><td>Covidien</td><td>8881513934</td><td>鲁尔锁扣式尖端，3 ml</td></tr><tr><td>PBS，pH 7.4</td><td>Life Technologies</td><td>10010-049</td><td>不含钙和镁</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Lonza</td><td>12-167F</td><td>不含L-谷氨酰胺</td></tr><tr><td>牛胰DNase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-1G</td><td></td></tr><tr><td>IV型胶原酶</td><td>Gibco (by Life technologies)</td><td>17104-019</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Gemini Bio-products</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>庆大霉素 50 mg/ml</td><td>Quality biological</td><td>120-098-661EA</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素溶液（Pen Strep）</td><td>Gibco (by Life technologies)</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酰胺</td><td>Gibco (by Life technologies)</td><td>25030-081</td><td></td></tr><tr><td>0.5 M EDTA，pH 8.0</td><td>Quality biological</td><td>351-027-721EA</td><td></td></tr><tr><td>50 ml 离心管</td><td>Corning</td><td>352070</td><td>聚丙烯材质，无菌</td></tr><tr><td>70 &amp;mu;M 细胞筛</td><td>Corning</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>培养皿</td><td>Corning</td><td>351029</td><td>无菌</td></tr><tr><td>5 ml FACS 管</td><td>Corning</td><td>352052</td><td>无菌</td></tr><tr><td>BD GolgiPlug</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>含布雷菲德菌素A溶液</td></tr><tr><td>佛波醇-12-十四烷酰-13-乙酸酯（PMA）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>钙离子霉素钙盐</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>13909</td><td></td></tr><tr><td>皂苷（来自皂荚树皮）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S4521</td><td></td></tr><tr><td>LIVE/DEAD 可固定Aqua死细胞染色试剂盒</td><td>Life Technologies</td><td>L34957</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠CD45 Alexa Fluor 700</td><td>eBioscience</td><td>56-0451-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠CD4 eFluor 450</td><td>eBioscience</td><td>48-0042-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠TCR β链 APC eFluor 780</td><td>eBioscience</td><td>47-5961-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠γδ TCR FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-5711-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠IL-17A APC</td><td>eBioscience</td><td>12-7311-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠IFN-&amp;gamma; PE</td><td>eBioscience</td><td>11-5931-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠NK1.1 PE-Cy7</td><td>eBioscience</td><td>25-5941-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠CD90.2 APC eFluor 780</td><td>eBioscience</td><td>47-0902-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠CD3e FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0031-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠CD19 FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0193-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠CD11b FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0112-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠CD11c FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-0114-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠TCR β链 FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-5961-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠Ly-6G FITC</td><td>eBioscience</td><td>11-5931-82</td><td></td></tr><tr><td>抗小鼠Ly-6C FITC</td><td>BD Pharmingen</td><td>553104</td><td></td></tr></tbody></table>

牙龈免疫细胞网络的分离、表征与功能检测

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

组织中的免疫细胞网络在介导局部免疫和维持组织稳态中发挥关键作用，然而目前对口腔黏膜和牙龈中定居的免疫细胞群体仍知之甚少。我们建立了一种从小鼠牙龈组织中分离和研究免疫细胞的技术，该部位持续暴露于微生物环境，且易受常见炎症性疾病——牙周炎的影响。本方案可对牙龈定居免疫细胞群体进行详细的表型特征分析，即使在稳态条件下亦可实现。此外，该方法能够获得数量充足、活力高的细胞，可用于功能研究，例如细胞因子分泌的评估。 离体 这种对牙龈免疫细胞网络的表型与功能特征的综合分析，将有助于探究口腔免疫及牙周稳态相关的机制，同时也将深化我们对局部免疫病理机制的理解。

为说明本方案的应用，我们展示了在患有和不患有牙周炎的小鼠牙龈中（WT 与 LFA-/-，图 2A–C）免疫细胞网络的代表性结果。代表性流式细胞术图显示了牙龈中活的 CD45+ 造血细胞（图 2A、2C）。使用本方案分离和处理免疫细胞可获得足够数量的细胞，用于进行离体（ex vivo）刺激并分析细胞因子分泌模式。此处展示了稳态下（WT）以及因 LFA 缺陷而出现牙周炎的小鼠中总 CD45+ 细胞内 IL-17 和 IFN-γ 的染色情况（图 2B–D）。这些数据揭示了该技术在捕获组织稳态（WT）及局部牙周炎（LFA-/-）背景下细胞因子谱方面的潜力。在易感牙周炎的小鼠中，我们进一步表征了牙龈免疫细胞组成，特别是 T 细胞和固有淋巴细胞（ILC）亚群的组成情况（<stro...

我们建立了一种从小鼠牙龈中分离、表型鉴定及功能分析免疫细胞的技术。

组织中的免疫细胞网络在介导局部免疫和维持组织稳态中发挥关键作用，但目前对驻留……

本方法的总体目标是分离牙龈免疫细胞，以深入表征与口腔免疫和牙周炎相关的免疫应答。该方法有助于解答口腔免疫领域的一些关键问题，例如哪些细胞因子参与了牙周炎的发病机制。该技术的主要优势在于，它能够评估口腔免疫细胞网络，并分离出足够数量的活细胞，用于后续的体外研究。本方案的第一步是，先用大头针固定小鼠身体，打开胸腔和腹腔以暴露心脏和内脏器官。接着，在下腔静脉处做一切口，使用装有27号针头的3毫升注射器经左心室灌注3毫升PBS。待血液完全冲洗干净后，将小鼠头部用大头针固定在解剖蜡盘上，使腹部朝上。然后使用剪刀从唇部每侧口角向颈部方向剪开，分离覆盖下颌和颈部区域的皮肤，暴露其下方的组织和肌肉。在下门牙之间剪开，以分离下颌骨的两侧。用25号针头将分离后的下颌骨每侧固定，以便进入口腔腔隙。确定腭部后，使用10号手术刀在第一磨牙前方和第三磨牙后方做垂直切口。随后将组织从鼻腔分离，并将上颌和下颌骨块从下颌骨分离。然后清除牙龈边缘的多余组织，将上颌和下颌骨块转移至含有5毫升胶原酶和DNase并置于冰上的50毫升锥形管中。将组织置于37摄氏度的摇床培养箱中消化1小时，在最后5分钟加入50微升0.5摩尔EDTA。然后向组织中加入5毫升冷DNase培养基，轻轻旋转混匀管内物质。接着，将四块组织转移至培养皿中。加入 500 µL 新鲜的 DNase 培养基覆盖组织。使用解剖刀从每块组织上剥离牙龈组织。将培养皿中的全部内容物转移至置于 50 mL 离心管上方的 70 µm 细胞滤筛中。用 3 至 5 毫升新鲜 DNase 培养基冲洗培养皿和滤筛。然后用无菌的 3 毫升注射器的推杆将牙龈组织在滤筛网面上研磨。用 30 至 35 毫升冷 DNase 培养基冲洗滤筛，并将滤液离心。然后将腭组织重悬于1毫升完全培养基中，并测定活细胞数量。如上所述的免疫细胞分离与处理方法，能够获得足够数量的细胞，用于对野生型及易患牙周炎动物的牙龈细胞进行离体刺激，并表征其细胞因子分泌模式。事实上，可通过如图所示的密度图分析小鼠牙龈免疫细胞组成，评估易患牙周炎的LFA基因敲除小鼠中T细胞与自然杀伤细胞区室的情况。通过采用适当的设门策略，还可检测 TCR beta CD4 阳性、TCR beta CD8 阳性以及 TCR gamma delta 阳性 T 细胞，以及 NK 细胞和天然淋巴细胞的细胞内细胞因子产生情况。一旦掌握该技术，若操作得当，可在三小时内完成细胞分离并进行免疫染色。在进行该操作时，需注意高效且迅速地完成所有步骤，并在不操作细胞时始终将其置于冰上。完成此操作后，还可进行其他方法，如细胞分选，以回答与特定细胞亚群功能相关的其他问题。

isolation-characterization-functional-examination-gingival-immune

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

分离，鉴定和牙龈免疫细胞网络的功能性考试

这种从心脏中分离功能性免疫细胞的方法为传统的胶原酶消化法提供了一种替代方案，后者会引起非预期的免疫细胞活化，导致这些细胞的反应性降低。我们的分离方法避免了酶消化相关的问题，从而获得具有功能的心脏免疫细胞。...

功能性心脏免疫细胞的分离

本视频展示了从小鼠模型中分离牙龈免疫细胞网络的操作步骤。通过酶消化法将牙龈组织从附着的牙齿和骨组织上解离，再进行机械性消化，从而释放出牙龈中的免疫细胞。所获得的细胞可用于免疫学实验。...

从小鼠牙齿组织块中分离牙龈免疫细胞网络

本研究描述了一种高效分离和处理小鼠口腔牙龈组织以制备单细胞培养物的技术。所获得的细胞可进一步用于流式细胞术分析和分子生物学研究。...

小鼠牙龈细胞的分离、处理与分析

本文介绍了两种实验方案：一种用于检测能够成功侵入宿主并在其中存活的厌氧菌，另一种用于观察厌氧菌与宿主细胞之间的相互作用。该研究可应用于任何可培养的厌氧菌以及任何真核细胞类型。...

Porphyromonas gingivalis 作为评估厌氧细菌与宿主细胞相互作用的模式生物

暴露的正常眼表由角膜和结膜组成。结膜中含有上皮细胞、杯状细胞和免疫细胞。本文介绍了一种非侵入性的印迹细胞学技术，利用印迹细胞学装置和流式细胞术分析结膜中的免疫细胞。...

一种非侵入性方法从结膜分离并进行细胞表型分析

本实验方案的目标是构建一种炎症性人类牙龈模型 体外该组织模型在三维条件下共培养三种人类细胞：HaCaT 角质形成细胞、牙龈成纤维细胞和 THP-1...

三维牙龈炎症类人组织等效物

在本实验方案中，我们介绍如何简便地处理和培养接受部分手术切除扁桃体的健康人来源的扁桃体单个核细胞，以研究其在激活后模拟黏膜组织中病毒感染时的固有免疫应答。...

分离扁桃体单个核细胞以研究人体黏膜淋巴组织中外植体的先天免疫应答

本文介绍了一种改良的人牙龈上皮细胞分离与培养方法，即在传统方法的基础上添加了ROCK抑制剂Y-27632。该方法操作更简便、耗时更短，可增强干细胞特性，并能获得更多具有高增殖潜能的上皮细胞，适用于实验室研究及临床应用。...

使用 Y-27632 分离与培养原代人牙龈上皮细胞

本方案介绍了一种快速、高效且温和的方法，适用于从持续生长的小鼠门齿、小鼠磨牙以及人类牙齿中分离单细胞，以进行单细胞RNA测序分析。...

从小鼠和人类牙齿中快速分离单个细胞

2型固有淋巴细胞（ILC2s）参与2型炎症反应，主要在应对蠕虫感染、过敏性疾病、代谢稳态以及组织修复中发挥作用。本研究展示了一种从小鼠鼻黏膜中分离ILC2s并检测其CD226表达水平的方法。...

从小鼠鼻黏膜中分离2型固有淋巴细胞以检测CD226的表达

本实验方案旨在通过在牙龈表面局部应用不同分子量的荧光标记葡聚糖，对小鼠牙龈上皮屏障的完整性进行定量评估，提供一种标准化的方法。 体内，随后 离体 使用单光子显微成像系统进行成像。...

利用荧光示踪剂评估小鼠牙龈上皮屏障功能

学习从小鼠牙龈中分离免疫细胞的方法，用于口腔免疫学和牙周炎研究。该技术可获取足够数量的活细胞，支持下游体外功能分析，帮助揭示牙周病发病机制中的细胞因子网络。

牙龈免疫细胞网络的分离、表征与功能检测

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