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DOI: 10.3791/53767-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
肾小球滤过率 (GFR) 的测定是评估整体肾功能的金标准。然而,测量此参数的传统程序很繁琐,并且需要投入大量时间。在这里,我们描述了一种更快的微创方法,用于经皮测定 GFR。
该程序的总体目标是经皮测量肾功能,而无需血样或进一步的实验分析。这种方法可以帮助回答肾脏病学领域的关键问题,例如,给予肾脏损伤或特定治疗干预对肾功能有什么影响。该技术的主要优点是它是微创的,并且结果在测量后可以立即进行分析,而无需后续的实验作。
该技术可用于研究几个不同物种的几乎任何肾脏状况。此外,它对于在一只动物内进行连续测量也很有用。在开始手术之前,通过捏住脚趾来确认适当的麻醉水平。
并使用电动剃须刀从动物的后下腹部去除 3 x 6 厘米的皮毛。用脱毛膏去除剩余的皮毛。两到三分钟后,彻底清洗裸露的皮肤,因为乳霜可能会发出一些背景荧光。
接下来,将用于测量肾功能的光学装置放在双面粘合贴片的一侧。将光学部分放置在透明窗口上方,并将另一侧覆盖在保护膜中。然后,将一块尺寸匹配的双面胶贴贴到电池上。
在固定设备之前,请给动物称重。然后,剪下一块比双面胶贴宽度长约一厘米的管状弹性纱布绷带。并将绷带拉到动物的头上。
接下来,将动物置于仰卧位,不遮盖剃光区域。并将电池连接器插入设备上的相应端口。如果电池已正确连接,设备将开始闪烁。
从连接到电池的贴片的另一侧取下保护膜。并将电池安装在设备的上表面。现在,从作设备贴片上取下保护罩并握住边缘,直到正确固定,然后将贴片放在动物背部的剃光区域。
用管状弹性纱布绷带覆盖装置,注意将绷带完全伸展到腹部,同时确保肢体可以自由移动。良好的固定对于避免测量过程中的移动伪影至关重要,因此请注意在测量开始前正确安装设备。绷带就位后,在设备上贴上一条尺寸匹配的胶带,使其覆盖电池的电线。
并在不对设备施加压力的情况下测量背景读数一到三分钟。为了施用 FITC-sinistrin,在加热动物的尾巴以扩张尾静脉后,IV 注入适当体积的 FITC-sinistrin 原液。接下来,小心地将动物单独放在没有水或铁丝盖的家笼中。
注意不要引入移动伪影。然后用光学装置记录 FITC-sinistrin 在适当的实验时间内发出的荧光。在录制期结束时,小心地撕下胶带,然后撕下管状绷带。
然后轻轻地从皮肤上取下双面胶贴。并将动物放回正常的家笼中。要读取数据,请断开电池与设备的连接并取下粘性贴片。
然后使用微型 USB 电缆将光学记录仪连接到计算机,并使用适当的软件下载数据。最后,使用适当的软件根据软件方案生成消除动力学曲线。并打开包含数据的点 CSV 文件。
当肾功能受到影响时,FITC-sinistrin 半衰期增加。由于物质的排泄减少,曲线的外观发生变化。通常,测得的曲线不会回到背景水平,并且观察到曲线下面积增加。
在同一只动物中,受伤前后的测量表明,由于排泄减少导致标志物积累,最大荧光强度增加。例如,在肾功能衰竭的情况下,由于肾组织功能严重受损,经皮测量的 FITC-sinistrin 曲线表现出稳定状态。此外,这种小型化设备已被用于成功测量具有各种不同健康状况的几种啮齿动物品系的肾功能。
强调该设备检测肾脏疾病和衰老引起的变化的适用性和灵敏度。一旦掌握,实验可以在 50 分钟内完全设置,每小时至少可以由一名实验员评估四只动物。在尝试此过程时,请务必记住在测量期间通过移除供水和任何突出的结构来保护电子设备。
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