Name: Marginating肺白细胞的选择性收获 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: 学习选择性收获边缘肺白细胞的方法，用于研究大鼠和小鼠肺部毛细血管内皮黏附的免疫细胞。该技术可分离具有独特免疫功能的特定白细胞群体，有助于深入理解肺部疾病易感性机制。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

作者及本研究工作由美国国立卫生研究院/国家癌症研究所资助项目 # R01CA172138（资助给 SBE）支持。

涉及动物受试者的实验程序已获得特拉维夫大学机构动物护理与使用委员会（IACUC）的批准。
1. 大鼠实验方案
<ol>
	<li>准备工作
	<ol>
		<li>准备2个21G蝶形针。可选步骤：通过锉平针头的锋利边缘，制备2个钝头蝶形21G针。</li>
		<li>灭菌手术器械：两把剪刀、钝头镊子、止血钳、齿状组织镊，于121 °C高压灭菌器中重力（干燥）模式下灭菌至少30分钟。</li>
		<li>配制含肝素的 PBS（30 单位/毫升）：每毫升磷酸盐缓冲液（1× PBS）中加入 30 单位肝素。室温使用。每只动物至少需要 35 毫升。</li>
		<li>将肝素化 PBS 缓慢注入蠕动泵管路和蝶形针头中，以避免产生气泡。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>肺灌注及MP-白细胞的收集
	<ol>
		<li>使用8%异氟烷过量麻醉处死动物，通过监测呼吸停止确认动物死亡。</li>
		<li>呼吸停止后，立即使用无菌剪刀和齿镊打开腹腔和胸腔。沿腹部正中线切开腹腔，直至剑突。</li>
		<li>用镊子抬起胸骨，小心地在两侧剪开肋骨，避免刺破任何内部器官或大血管。在胸骨上夹住一个止血钳，并将肋骨向前折叠，以暴露心肺复合体。</li>
		<li>将蝶形针插入心脏右心室，并在约一分钟内用注射器收集最大体积的血液（来自250 g动物的约6 ml）。</li>
		<li>用止血钳夹闭下腔静脉，以防止肝脏反向灌注（参见 讨论).</li>
		<li>将含有血液的注射器更换为蠕动泵的出流管路时，保持蝴蝶针位于右心室内。</li>
		<li>将连接有5 ml 收集注射器的第二根蝶形针插入左心室，避免穿刺室间隔。</li>
		<li>打开蠕动泵，调节流速至约5 ml/min，用注射器轻轻收集最初含有血液污染的灌注液数毫升。持续灌注直至灌注液颜色由深红色变为淡红色。&#160;（弃去被血液污染的灌注液）。</li>
		<li>在不停止蠕动泵的情况下，迅速将5 ml收集注射器更换为20 ml收集注射器，并以较高的灌注速度（最高达7 ml/min）收集20 ml肺灌注液。持续监测灌注液流入收集注射器的流量，避免产生负压。</li>
		<li>停止蠕动泵的流动。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>白细胞提取
	<ol>
		<li>将灌注液在400 × g条件下离心10分钟。</li>
		<li>吸出液体。</li>
		<li>加入10 ml PBS或培养基，以400 × g离心10分钟，吸去上清液。重复此步骤两次。PBS或培养基的使用取决于样本的后续用途。</li>
		<li>加入20 ml PBS或培养基，以400 × g离心10分钟，吸去上清液。</li>
		<li>根据样本用途（FACS、PCR）将细胞重悬至所需浓度。 等等。).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 小鼠实验方案
<ol>
	<li>准备工作
	<ol>
		<li>准备2个25 G蝶形针。可选步骤：通过锉去针头的锋利边缘，制备2个钝头蝶形25 G针。</li>
		<li>灭菌手术器械：两把剪刀、钝头镊子、止血钳、齿状组织镊，于121 °C高压灭菌至少30分钟，采用重力（干燥）模式。</li>
		<li>通过向每毫升1×PBS溶液中加入30单位肝素，制备含肝素的PBS（30单位/毫升）。室温使用。每只动物至少需要25毫升。</li>
		<li>将肝素化 PBS 缓慢注入蠕动泵管路和蝶形针头，以避免产生气泡。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>肺灌注及MP-白细胞的收集
	<ol>
		<li>使用8%异氟烷过量麻醉处死动物，通过监测呼吸停止确认动物死亡。</li>
		<li>呼吸停止后，立即使用无菌剪刀和齿镊打开腹腔和胸腔。沿腹部正中线做切口，直至剑突。</li>
		<li>用镊子抬起胸骨，小心地在两侧剪开肋骨，避免刺破任何内部器官或大血管。在胸骨上夹住一个止血钳，并将肋骨向前折叠，以暴露心肺复合体。</li>
		<li>用止血钳夹闭下腔静脉，以防止肝脏反向灌注（参见讨论部分）。</li>
		<li>将连接至蠕动泵出流管的蝶形针插入心脏右心室，同时将另一支连接至2 ml 收集注射器的蝶形针插入心脏左心室，避免穿刺室间隔。</li>
		<li>打开泵，调节流速至约2 ml/min，用收集注射器收集最初含有血液污染的灌注液，直至灌注液颜色由深红色变为淡红色（弃去含血液的灌注液）。</li>
		<li>在不停止蠕动泵的情况下，迅速将2 ml收集注射器更换为10 ml收集注射器，并以较高的灌注速度（最高达4 ml/min）收集10 ml肺灌注液。持续监测灌注液流入收集注射器的流动情况，避免产生负压。</li>
		<li>停止蠕动泵的流动。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>白细胞提取
	<ol>
		<li>将灌注液在400 × g离心10分钟。</li>
		<li>吸出液体。</li>
		<li>加入10 ml PBS或培养基，以400 × g离心10分钟，吸去上清液。重复此步骤三次。PBS或培养基的使用取决于样本的后续用途。</li>
		<li>加入10 ml PBS或培养基，以400 × g离心10分钟，吸去上清液。</li>
		<li>根据样本用途（FACS、PCR）将细胞重悬至所需浓度， 等等。).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Kuebler, W. M., Goetz, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+marginated+pool%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">The marginated pool.</a> Eur Surg Res. 34, 92-100 (2002).</li>
<li>Benish, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+marginating-pulmonary+immune+compartment+in+mice+exhibits+increased+NK+cytotoxicity+and+unique+cellular+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Res%22%5BJournal%5D)">The marginating-pulmonary immune compartment in mice exhibits increased NK cytotoxicity and unique cellular characteristics.</a> Immunol Res. 58, 28-39 (2014).</li>
<li>Melamed, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+marginating-pulmonary+immune+compartment+in+rats%3A+characteristics+of+continuous+inflammation+and+activated+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunother%22%5BJournal%5D)">The marginating-pulmonary immune compartment in rats: characteristics of continuous inflammation and activated NK cells.</a> J Immunother. 33, 16-29 (2010).</li>
<li>Shakhar, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amelioration+of+operation-induced+suppression+of+marginating+pulmonary+NK+activity+using+poly+IC%3A+a+potential+approach+to+reduce+postoperative+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Amelioration of operation-induced suppression of marginating pulmonary NK activity using poly IC: a potential approach to reduce postoperative metastasis.</a> Ann Surg Oncol. 14, 841-852 (2007).</li>
<li>Smyth, M. J., Godfrey, D. I., Trapani, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fresh+look+at+tumor+immunosurveillance+and+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">A fresh look at tumor immunosurveillance and immunotherapy.</a> Nat Immunol. 2, 293-299 (2001).</li>
<li>Talmadge, J. E., Meyers, K. M., Prieur, D. J., Starkey, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+NK+cells+in+tumour+growth+and+metastasis+in+beige+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Role of NK cells in tumour growth and metastasis in beige mice.</a> Nature. 284, 622-624 (1980).</li>
<li>Grimm, E. A., Mazumder, A., Zhang, H. Z., Rosenberg, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphokine-activated+killer+cell+phenomenon.+Lysis+of+natural+killer-resistant+fresh+solid+tumor+cells+by+interleukin+2-activated+autologous+human+peripheral+blood+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Lymphokine-activated killer cell phenomenon. Lysis of natural killer-resistant fresh solid tumor cells by interleukin 2-activated autologous human peripheral blood lymphocytes.</a> J Exp Med. 155, 1823-1841 (1982).</li>
<li>Melamed, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marginating+pulmonary-NK+activity+and+resistance+to+experimental+tumor+metastasis%3A+suppression+by+surgery+and+the+prophylactic+use+of+a+beta-adrenergic+antagonist+and+a+prostaglandin+synthesis+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Marginating pulmonary-NK activity and resistance to experimental tumor metastasis: suppression by surgery and the prophylactic use of a beta-adrenergic antagonist and a prostaglandin synthesis inhibitor.</a> Brain Behav Immun. 19, 114-126 (2005).</li>
<li>O'Dea, K. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung-marginated+monocytes+modulate+pulmonary+microvascular+injury+during+early+endotoxemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Lung-marginated monocytes modulate pulmonary microvascular injury during early endotoxemia.</a> Am J Respir Crit Care Med. 172, 1119-1127 (2005).</li>
<li>Sorski, L., Melamed, R., Ben-Eliyahu, A unique role for marginating-pulmonary and marginating-hepatic NK cells in cancer anti-metastatic surveillance and in immunotherapy. Annual Meeting of the Psychoneuroimmunology Research Society, Philadelphia, USA.(2014, , (2014).</li>
<li>Levi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous+stress+disrupts+immunostimulatory+effects+of+IL-12%29%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Immun%22%5BJournal%5D)">Continuous stress disrupts immunostimulatory effects of IL-12).</a> Brain Behav Immun. 25, 727-735 (2011).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

本文所述方法能够选择性地分离并研究MP-白细胞这一独特细胞群体。与循环系统或脾脏中的白细胞相比，MP细胞群体具有不同的白细胞亚群组成、更高的活化水平、更强的多种细胞因子释放能力，以及更高的促炎性和抗炎性细胞因子mRNA水平2,3。具体而言，我们已证明MP-NK细胞对多种靶细胞的杀伤活性强于循环NK细胞3,4，且表达更高水平的干扰素-γ。总体而言，我们的研究结果表明，MP-NK白细胞比循环NK细胞具有更强的细胞毒性，因此可能在控制血源性转移和肺转移方面具有更重要的生物学意义。因此，不应将脾脏或循环白细胞视为反映免疫状态的金标准或默认细胞群体，对于通常仅依赖循环白细胞开展的人类研究应谨慎解读。此外，由于多种疾病特异性地影响肺部，应在该器官内开展免疫学研究，并将MP区室与间质、实质及支气管肺泡亚区室区分开来，而我们的灌注方法正是实现了这一区分。
为确保本实验操作的成功，必须做到以下几点：（i）在呼吸完全停止后迅速打开腹腔和胸腔，以维持足够的血压，从而最大限度地收集心脏血液；同时（ii）应避免使用尖锐边缘的蝶形针头，以防对心脏心室造成不必要的额外...

黏附于肺部毛细血管的白细胞（即，边缘池-肺部（MP）白细胞）1 显示出与其他免疫区室中白细胞不同的白细胞组成和独特活性（例如，循环，脾脏，骨髓2-4例如，与循环系统和脾脏中的自然杀伤（NK）细胞相比，MP-白细胞对多种肿瘤细胞表现出更高的NK细胞毒活性，同时具有差异化的信使RNA（mRNA）表达水平，并增加促炎和抗炎细胞因子的分泌。在细胞组成方面，MP-白细胞也不同于循环白细胞，其固有免疫与适应性免疫的比值高于循环白细胞（分别为50%与30%）。本文所介绍方法的目标是实现对MP-白细胞的选择性分离，以研究这一重要且独特的免疫区室（细胞群体），并阐明各种干预措施的影响例如，这些特定细胞上的免疫激活）
要理解这一独特细胞群的重要性，需注意到免疫系统可通过细胞介导免疫（CMI）的体内功能来控制循环肿瘤细胞、微转移灶及残留病灶。尽管免疫系统此前未能控制原发性肿瘤，但这种能力在癌症患者和动物模型中已有大量体内证据支持5。重要的是，这些发现常常与体外和离体研究结果不一致，后者报告大多数自体肿瘤细胞对人和动物血液样本中循环白细胞的细胞毒性作用具有抗性（通过细胞毒性实验测定）6,7。这种差异可能归因于体内存在特定的白细胞亚群，例如上述的腹膜腔（MP）白细胞群，尤其是其中活化的自然杀伤（NK）细胞亚群3。事实上，研究发现对循环和脾脏来源白细胞具有抗性的同基因型肿瘤细胞（MADB106），可被MP-NK细胞有效裂解3,8。因此，尽管MADB106细胞被称作“NK抗性”并可在Fischer344（F344）大鼠肺部形成转移，但其实际上受到MP-NK细胞的控制，而非由通常因易于获取而被广泛研究的循环或脾脏NK细胞所控制。
通过标准的肺部白细胞收获方法无法获得纯净且具有活性的MP-白细胞，这些标准方法基于肺组织研磨或生物降解9。与组织处理方法相比，我们的方法具有两个主要优势。首先，灌注法能够选择性地收获MP-白细胞，将其与来源于肺实质、间质及支气管肺泡腔室的其他细胞分离开来。其次，灌注技术能更好地保持MP-白细胞的完整性和生理微环境，而研磨和生物处理方法会损伤细胞，改变其形态，并诱导多种因子的产生和释放，这些因子可调节免疫活性，特别是抑制NK细胞的细胞毒性10。
肺是癌症转移和多种感染性疾病的主要靶器官。所有循环中的恶性细胞和受感染细胞都会经过肺毛细血管，在此处它们需要发生形变，并与毛细血管内皮细胞及常驻白细胞相互作用。在此条件下，循环细胞很容易被常驻的巨噬细胞样白细胞（MP-白细胞）所靶向。因此，从生物学角度来看，在这一免疫区室中存在活化的白细胞似乎具有优势，因而有必要在不同的生物学、实验和临床条件下研究这一独特的MP细胞群体。值得注意的是，多种生物反应调节剂（例如，多聚肌苷酸-多聚胞苷酸（poly I:C）或C型CpG寡脱氧核苷酸（CpG-C ODN））引起的全身性免疫激活已被证明对MP-白细胞的激活作用强于对循环白细胞的激活3,8,11。

<table><tbody><tr><td>Autoclud 蠕动泵</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>蝶形针</td><td>OMG</td><td></td><td>26G</td></tr><tr><td>蝶形针</td><td>OMG</td><td></td><td>21G*3/4&quot;</td></tr><tr><td>注射器</td><td>Pic 溶液</td><td></td><td>1 ml</td></tr><tr><td>注射器</td><td>Pic 溶液</td><td></td><td>2.5 ml</td></tr><tr><td>注射器</td><td>Pic 溶液</td><td></td><td>5 ml</td></tr><tr><td>注射器</td><td>Pic 溶液</td><td></td><td>10 ml</td></tr><tr><td>注射器</td><td>Pic 溶液</td><td></td><td>25 ml</td></tr><tr><td>钝头镊</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>剪刀</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>止血钳</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>组织镊</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>肝素钠（猪黏膜来源，无防腐剂）</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

选择性收获边缘化肺部白细胞

Selective Harvesting of Marginating-pulmonary Leukocytes

边缘化-肺部（MP）白细胞是指黏附于肺毛细血管内皮内侧的白细胞。研究表明，与机体其他免疫区室中的白细胞相比，MP-白细胞具有独特的组成和特性。有证据表明，自然杀伤细胞在MP-白细胞群体中表现出更高的细胞毒性，且该群体相较于循环系统或脾脏中的免疫细胞，具有特异性的促炎和抗炎特征。本文所述方法通过在小鼠或大鼠中对肺组织进行强制灌注，实现对MP-白细胞的选择性分离。与其他用于提取肺白细胞的方法（如组织研磨和生物降解）相比，该方法仅获取肺毛细血管来源的白细胞，不会混杂肺实质、间质或支气管肺泡细胞。此外，灌注技术能更好地保持MP-白细胞的完整性和生理微环境，避免因组织处理而诱发的生理反应。这一独特的MP-白细胞群体处于关键解剖位置，可识别并响应异常的循环细胞，因为所有循环中的恶性细胞和感染细胞在通过肺毛细血管时均会被滞留，并与内皮细胞及常驻白细胞发生物理相互作用。因此，在不同条件下选择性分离并研究MP-白细胞，有助于深入理解其生物学意义和临床价值，特别是在控制循环异常细胞及肺部相关疾病方面。

与循环白细胞相比，腹膜腔白细胞亚群的组成存在差异。通过流式细胞术分析，鉴定并定量了循环白细胞和腹膜腔白细胞的亚群，以表征其组成。根据前向散射和侧向散射信号鉴定粒细胞和淋巴细胞。在淋巴细胞中，NKRP-1bright细胞被鉴定为自然杀伤细胞（NK细胞），CD3+为T细胞，RM1+为单核细胞，CD4+/CD8+/CD25+用于T细胞亚群的鉴定。固有免疫细胞（包括粒细胞、单核细胞和NK细胞）占腹膜腔白细胞总数的52%（±1.52%），而循环白细胞中该比例为27.9%（±0.66%）（p &lt;0.05）。相反，T细胞亚群（包括CD4+、CD4+CD8+ T细胞和调节性T细胞（CD4+CD25+））以及树突状细胞在腹膜腔中的比例显著低于循环系统（p &lt;0.005；n = 8）。该品系小鼠腹膜腔的细胞得率约为300万白细胞（<stron...

边缘化肺部白细胞与其他白细胞群体相比具有独特的特征和不同的免疫功能。本文介绍了通过强制灌注大鼠和小鼠肺脏，选择性分离该肺部白细胞亚群的方法。边缘化肺部白细胞在决定机体对血源性和肺部相关疾病易感性方面似乎起着关键作用。

边缘化肺部（MP）白细胞是指黏附于肺毛细血管内皮内侧的白细胞。研究表明，MP白细胞具有……

本实验的总体目标是通过强制灌注小鼠或大鼠肺脏，选择性地收获附着于肺毛细血管内皮内的边缘池白细胞。该方法可用于研究这一具有独特特征和特异性血液学功能的特定白细胞群体。该技术的主要优势在于，所获得的白细胞完全来源于肺毛细血管，排除了来自肺实质、间质及支气管肺泡腔室的细胞。演示该操作的是来自我实验室的两名研究生 Liat Sorski 和 Lee Shaashua。开始操作前，先用肝素化 PBS 通过蠕动泵管路和蝶形针头进行冲洗，以排除所有气泡。然后在大鼠呼吸停止后立即使用无菌剪刀和齿状组织镊，从腹部正中切口至剑突处，切开腹腔和胸腔。接下来，使用镊子抬起胸骨，并小心地在两侧剪开肋骨。在胸骨上夹一个止血钳，将肋骨向前上方翻折，以暴露心肺复合体。然后将蝶形针插入心脏的右心室，尽可能收集最大量的血液。当所有血液收集完毕后，用止血钳夹闭下腔静脉，以防止肝脏反向灌注。然后，保持蝴蝶针位于右心室，将装有血液的注射器更换为蠕动泵的流出管路，并将另一支蝴蝶针（连接一个5毫升收集注射器）插入左心室。接着启动蠕动泵，调节流速至约5毫升/分钟，用收集注射器轻轻收集最初被血液污染的灌注液，直至灌注液颜色由深红色变为淡红色为止。随后，在不关闭泵的情况下，迅速将5毫升收集用注射器更换为20毫升收集用注射器，并以每分钟7毫升的速度收集20毫升肺灌注液，以获取大鼠边缘池肺白细胞。注意观察肺组织颜色逐渐由淡红色变为透明白色，表明灌注成功。当全部灌注液体收集完毕后，停止蠕动泵的流动，并将收集的灌注液转移至离心管中。然后离心灌注液并吸除上清液。通过蠕动泵管路和蝶形针头灌注肝素化PBS，以去除所有气泡。为收集小鼠边缘化肺白细胞，应在呼吸停止后立即使用无菌剪刀和齿状组织镊沿腹中线切口至剑突，打开腹腔和胸腔。接下来，使用镊子抬起胸骨，并在两侧剪开肋骨。用止血钳夹住胸骨，将肋骨向前翻折，以暴露心肺复合体。用止血钳夹闭下腔静脉，防止肝脏发生逆向灌注，并将蝴蝶针插入心脏的右心室。然后，将蝴蝶针头保持在右心室中，将蝴蝶针头连接至蠕动泵的流出管，并将另一支蝴蝶针头插入左心室，该针头连接一个2毫升的采样注射器。启动泵，调节流速至约2毫升/分钟。当灌注液颜色由深红色变为淡红色时，用采样注射器轻轻收集最初1毫升被血液污染的灌注液。随后，在不关闭蠕动泵的情况下，迅速将2毫升的收集注射器更换为10毫升的收集注射器，并以每分钟4毫升的灌注速率收集10毫升肺灌注液。注意观察肺组织颜色逐渐由淡红色变为透明白色，表明灌注成功。当所有肺灌注液收集完毕后，停止蠕动泵的流动，并将收集的灌注液转移至离心管中。然后离心灌注液并吸除上清液。边缘化肺部区室的白细胞亚群组成与循环白细胞的组成不同。实际上，固有免疫细胞（包括粒细胞、单核细胞和自然杀伤细胞）占边缘化肺部白细胞群体的50%以上。与循环细胞组分相比，循环细胞组分中少于30%。相反，T细胞和树突状细胞在边缘-肺部组分中的比例低于循环细胞组分。尽管自然杀伤细胞的总数总体相似，但大颗粒自然杀伤细胞在边缘-肺部组分中的比例比循环细胞组分中高出三倍。此外，通过标准的铬释放实验检测至少两种不同肿瘤细胞系发现，边缘池-肺部区室的自然杀伤细胞溶解肿瘤细胞的能力强于循环中的自然杀伤细胞。另外，当使用MADB106靶细胞时，通过体内给予Poly I:C进行免疫刺激，对边缘池-肺部自然杀伤细胞的细胞毒性作用的影响比对循环自然杀伤细胞更为显著。一旦掌握，若操作得当，该技术可在数分钟内完成。这些技术能够实现对单核吞噬细胞（MP）白细胞的选择性分离。对这些白细胞的研究将有助于加深我们对其生物学和临床意义的理解，特别是在控制循环中的异常细胞以及肺部相关疾病方面。完成该操作步骤后，可利用流式细胞术、PCR 或任何其他感兴趣的检测方法对细胞进行表征与分析。观看本视频后，您应能充分掌握如何收集边缘池肺部白细胞。

selective-harvesting-of-marginating-pulmonary-leukocytes

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

Marginating肺白细胞的选择性收获

本文介绍了一种高度纯化的小鼠肺树突状细胞的制备方法。重点在于分离传统的树突状细胞亚群。...

小鼠肺树突状细胞的分离

本文描述了分离小鼠肺泡巨噬细胞（肺部固有先天免疫细胞）并检测其在与聚酐纳米颗粒共培养后活化反应的实验方案。...

收获小鼠肺泡巨噬细胞及评估聚酸酐纳米颗粒诱导的细胞活化

在本视频中，我们演示了通过强制灌流法从小鼠肝脏中分离边缘池肝白细胞。...

从小鼠肝脏中分离边缘池白细胞

本方案描述了一种通过酶消化、密度梯度分离、贴壁筛选以及CD146+磁珠分选技术，从大鼠中分离获取原代肺组织驻留型间充质基质细胞的方法。...

从大鼠肺组织中分离CD146+ 驻留型肺间充质基质细胞

边缘化肝白细胞与其他白细胞群体相比具有独特的特征和不同的免疫学功能。本文介绍了一种通过强制灌注大鼠或小鼠肝脏来选择性分离这一特定肝细胞群体的方法。边缘化肝白细胞在决定对肝脏相关疾病及转移性病变的易感性方面似乎起着关键作用。...

选择性收获边缘池肝内白细胞

经右心导管术回收Swan-Ganz导管球囊顶端的内皮细胞

我们描述了一种处理接受抗逆转录病毒治疗的慢性HIV感染者支气管肺泡灌洗液及其配对的外周血的方法，以评估肺部HIV储存库。这些方法可获得高纯度的CD4 T细胞和肺泡巨噬细胞，随后可用于通过超敏聚合酶链式反应进行免疫表型分析以及HIV...

支气管肺泡灌洗液及配对血液样本中肺泡巨噬细胞和CD4+ T细胞免疫表型分析与HIV储存库评估的处理方法

脑膜淋巴管内皮细胞（LLECs）是一种近期发现的颅内细胞类型，其功能尚不明确。本研究提供了一种可重复的小鼠LLEC分离与培养方案 体外...

软脑膜淋巴管内皮细胞的获取与原代培养

本方案详细描述了从小鼠肺组织中分离稳态及流感病毒感染后活体免疫细胞和非免疫细胞群体的方法。同时提供了用于鉴定上皮细胞和髓系细胞亚群的设门策略。...

从小鼠肺组织中分离活体髓系细胞和上皮细胞群体

介绍了一种从小鼠脑组织中快速获取浸润性白细胞的方法。该方法利用连续Percoll梯度和不连续Ficoll梯度，选择并纯化富含白细胞的组分层。分离得到的白细胞随后可通过流式细胞术进行表征分析。...

脑浸润性白细胞的分离

学习选择性收获边缘肺白细胞的方法，用于研究大鼠和小鼠肺部毛细血管内皮黏附的免疫细胞。该技术可分离具有独特免疫功能的特定白细胞群体，有助于深入理解肺部疾病易感性机制。

选择性收获边缘化肺部白细胞

探索更多视频