Name: 制备及分析体外三维乳腺癌代理项 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: 学习利用灌注生物反应器系统制备三维乳腺癌体外代理模型，并通过组织学切片分析细胞密度与增殖指标。该方法为肿瘤生物学研究及候选药物疗效评估提供了可靠的实验平台。

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阿拉巴马大学伯明翰分校代谢性骨病研究中心负责替代样本的组织学处理与切片工作。南方研究所（美国阿拉巴马州伯明翰市）为生物反应器系统的制造提供了支持。本研究由美国国防部乳腺癌研究计划（BC121367）提供经费资助。

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</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

在此，描述了一种三维（3D）培养方法，该方法结合了组织微环境的组分，包括细胞外基质（ECM）和人源间质成纤维细胞，在更接近模拟人类乳腺癌的三维空间中，促进形成可重现的3D形态结构。所描述的3D培养方法相较于传统的二维（2D）细胞培养更能代表人类疾病状态，因其将多种细胞类型整合于三维的ECM空间中。已有研究指出，这些参数（即， 多种细胞类型、细胞外基质和三维结构为研究生物过程提供了更为恰当的环境，因为组织结构、微环境信号以及三维空间特性均被纳入考虑。 1,8其他3D培养方法此前已有描述，包括将细胞培养于3D基质上方的方法29，类球体的生成30悬滴培养31，以及微流控装置的使用32尽管这些系统各自具有独特的优势，但总体上均未能包含基质成分、间质细胞群体或具有代表性的三维结构。本文所述的三维培养方法包含了上述所有参数，并可利用生物反应器系统进行构建，从而实现较长时间的培养，而这是使用固体三维培养难以达到的。此外，灌注式支架相比固体支架可提供更佳的生长效果。
该方...

更准确模拟肿瘤结构和微环境的三维（3D）培养模型 在体 对于旨在解析细胞与其微环境之间复杂相互作用以及评估候选疗法有效性的研究具有重要意义。肿瘤的三维性影响氧气和营养梯度、药物暴露的均匀性、间质压力/血流以及三维结构1-4适当的间质微环境的存在有助于肿瘤的三维结构形成，并影响细胞与细胞外基质（ECM）之间的信号传导以及间质细胞与恶性上皮细胞之间的旁分泌信号交流。肿瘤三维结构及其微环境对细胞功能的影响已有充分研究，这两个因素均可改变细胞对药物的反应。1,3,5-8此外，二维（2D）培养与三维（3D）培养在细胞生长动力学、代谢速率和细胞信号传导方面存在差异，这些因素会影响细胞反应1,3,8-10.
体外实验中，可通过添加具有代表性的细胞外基质（ECM）组分和间质细胞群体来调控肿瘤替代微环境。恶性上皮细胞会受到细胞外基质以及肿瘤相关间质细胞的影响，这种影响可能是协同/保护性的，从而促进肿瘤进展；也可能是抑制性的，从而阻止肿瘤进一步扩散5,6,10。在这两种情况下，间质均可能通过旁分泌信号传导和/或通过增加肿瘤内的间质压力，影响治疗反应和药物递送效率，进而导致药物递送减少1,6。因此，在临床前模型中加入细胞外基质和间质细胞，将有助于重现那些在二维培养中难以有效模拟的肿瘤特征。
本文描述了一种建立包含模拟微环境（包括细胞外基质组分和基质细胞）的三维乳腺癌替代模型的方法。在乳腺癌中，基质细胞群体主要由癌症相关成纤维细胞（CAF）构成，而基质细胞外基质主要由Ⅰ型胶原组成，另含少量存在于基底膜中的基质成分，如层粘连蛋白和Ⅳ型胶原。1,4,11-13. 因此，乳腺癌微环境的这些组分（即， CAF、胶原蛋白I型和基底膜）已整合到替代物中。该方法可用于生成实体、无灌注的3D替代物（图1A）或可进行调整，通过生物反应器系统使培养基灌注流经替代物（图1B）这里描述了这两种方法。也可根据需要对本方法进行修改，以包含其他间质成分（如肿瘤相关巨噬细胞），或通过调整细胞和细胞外基质成分来模拟其他实体瘤。
对于本文所述的乳腺癌替代模型，我们采用了 MDA-MB-231 (231) 乳腺癌细胞系以及先前从人乳腺癌组织中分离得到的癌相关成纤维细胞（CAF）14，以及由90% I型胶原（6 mg/ml）和10%生长因子减少的基底膜物质（BM）组成的细胞外基质（ECM）。该替代模型可在8孔腔室载玻片中培养（固体替代模型），或使用生物反应器系统以实现持续营养灌注（灌注式替代模型）。任何能够容纳含细胞ECM体积的灌注式生物反应器系统均可使用15以我们的生物反应器系统为例，介绍组织替代物的制备过程。该系统为自主研发，尚未商业化。由于本文重点在于三维组织替代物的制备与分析，因此未对生物反应器系统的制造与组装细节进行详述。然而，该系统及其开发过程的详细描述已有文献发表。16在此生物反应器系统中，采用聚二甲基硅氧烷（PDMS）流道来容纳替代物，该替代物由PDMS泡沫支撑（泡沫制备方法类似于Calcagnile所描述的方法）。 等17）。该体积内贯穿有4条微通道（每条 400 µm 直径）通过微生理泵持续灌注培养基，以为类器官提供氧气和营养物质。
对替代物进行恰当分析，对于获取有关细胞在应对处理或其他操作时功能的相关信息至关重要。替代物可通过多种方法进行分析，包括使用共聚焦显微镜或其他无创成像手段对完整替代物进行直接成像，通过检测条件培养基或灌流液中的分泌产物进行间接细胞分析，或在固定和石蜡包埋处理后对组织切片进行分析。其中一项可在组织切片上评估的参数是细胞密度。本文介绍一种利用半自动图像处理技术，对经苏木精-伊红（H&amp;E）染色的替代物组织切片显微照片进行分析，以测定细胞密度（即 每单位截面积内的有核细胞数量）的方法。细胞密度可作为反映细胞数量随时间变化，或因不同生长条件和处理而产生变化的相对指标。
<img alt="细胞培养中的实体与灌注装置；流动通道、实验示意图；组织分析。" src="/files/ftp_upload/54004/54004fig1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图1"> 
图1. 三维结构与生物反应器系统。A） 生成实体三维替代物的流程示意图。上图：包含细胞外基质（粉红色）、上皮癌细胞（黄色）和癌相关成纤维细胞（CAF，橙色）的实体三维结构示意图；下图：含有替代物的8孔板的俯视图。B） 生成灌注式三维替代物的流程示意图。上图：具有通道结构的三维结构示意图，允许培养基灌注，其中包含细胞外基质（粉红色）、上皮癌细胞（黄色）和CAF（橙色）；中图：含PDMS泡沫（黑色箭头）的PDMS流动通道图像，用于注入细胞+ECM混合物，并插入直径为400 µm的聚合物涂层不锈钢丝（粉色箭头）；下图：PDMS流动通道中包含一个替代物，并连接至生物反应器系统以实现连续培养基灌注（未显示蠕动泵和培养基储液罐）。C） 培养后对实体和灌注式替代物进行处理的各步骤图像。左图：含有样本处理凝胶和替代物的冷冻模具图像；中图：包含固定并处理后替代物的石蜡包埋块图像；右图：载玻片上替代物的苏木精-伊红（H&amp;E）染色组织切片图像。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54004/54004fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>

<table><tbody><tr><td>Dulbecco改良Eagle培养基1x（DMEM）</td><td>Corning CellGro</td><td>10-014-CV</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清（FBS）</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>0.25% 胰蛋白酶 + 2.21&amp;nbsp;mM EDTA 1×</td><td>康宁</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>组织培养板，100&amp;nbsp;毫米</td><td>CellTreat 科学产品</td><td>229620</td><td>无菌的</td></tr><tr><td>组织培养板，35&amp;nbsp;毫米</td><td>CellTreat 科学产品</td><td>229638</td><td>用于PDMS泡沫的形成&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>9&quot; 玻璃移液管</td><td>Fisher&amp;nbsp;</td><td>13-678-20D</td><td>无菌的</td></tr><tr><td>10 ml 移液管</td><td>CellTreat 科学产品</td><td>229210B</td><td>无菌的</td></tr><tr><td>1,000 &amp;micro;移液器吸头</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-166</td><td>无菌过滤</td></tr><tr><td>200 &amp;micro;移液器吸头</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-141</td><td>无菌过滤</td></tr><tr><td>10 &amp;micro;l 移液器吸头</td><td>FisherBrand</td><td>02-717-158</td><td>无菌过滤</td></tr><tr><td>15 ml 离心管</td><td>CellTreat 科学产品</td><td>229410</td><td>无菌的</td></tr><tr><td>50 ml 离心管</td><td>CellTreat 科学产品</td><td>229422</td><td>无菌的</td></tr><tr><td>1.5 ml 微量离心管</td><td>FisherBrand</td><td>05-408-129</td><td>无菌的</td></tr><tr><td>台盼蓝</td><td>Corning Cellgro</td><td>25-900-CI</td><td>无菌的</td></tr><tr><td>Sylgard 184</td><td>电子显微镜科学公司</td><td>24236-10</td><td>PDMS 弹性体和固化剂。用于我们实验室自制的生物反应器。</td></tr><tr><td>PDMS泡沫</td><td></td><td></td><td>由本实验室自制，用于本实验室的生物反应器。</td></tr><tr><td>高浓度牛I型胶原蛋白</td><td>Advanced Biomatrix</td><td>5133-A</td><td>FibriCol ~10 mg/ml</td></tr><tr><td>生长因子减少型基质胶（基底膜）</td><td>康宁</td><td>354230</td><td>基底膜材料</td></tr><tr><td>碳酸氢钠</td><td>Sigma</td><td>S8761</td><td></td></tr><tr><td>分子生物学级水</td><td>Fisher</td><td>BP2819-1</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 10x&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2429</td><td></td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek 培养皿腔室系统&amp;nbsp;</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>177402</td><td>8孔</td></tr><tr><td>生物反应器</td><td></td><td></td><td>自制</td></tr><tr><td>弹簧回弹304不锈钢&amp;mdash;涂覆聚四氟乙烯聚合物</td><td>McMaster-Carr</td><td>1749T19</td><td>用于在我们自制设备中生成微通道的不锈钢丝&amp;nbsp; 生物反应器系统。0.016&quot; 直径</td></tr><tr><td>BioPharm Plus 铂金固化硅胶泵管，L/S 14</td><td>Masterflex</td><td>EW-96440-14</td><td>用于我们内部生物反应器系统。管道内径：1.6 mm，软管接头尺寸：1/16 in。</td></tr><tr><td>2-停位导管套装，非扩口型PVC，1.52&amp;nbsp;毫米内径</td><td>Cole-Parmer&amp;nbsp;</td><td>EW-74906-36</td><td>用于我们内部的生物反应器系统（配备微型蠕动泵）。&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>六通道精密微型蠕动泵</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-74906-04</td><td>用于我们自主研发的生物反应器系统</td></tr><tr><td>结核菌素注射器</td><td>BD医疗</td><td>309625</td><td>26 号 3/8 英寸针头；无菌</td></tr><tr><td>解剖组织镊</td><td>FisherBrand</td><td>13-812-36</td><td>5.5 英寸</td></tr><tr><td>迷你管旋转混匀仪</td><td>Boekel Scientific</td><td>260750</td><td>替代旋转设备选项。与适用于50 ml离心管的转盘（货号 260753）配合使用</td></tr><tr><td>50 ml 离心管转盘</td><td>博克尔科学公司</td><td>260753</td><td>与微型管旋转混合器配合使用</td></tr><tr><td>Bambino&amp;nbsp; 杂交炉</td><td>Boekel Scientific</td><td>230301</td><td>替代物旋转设备选项</td></tr><tr><td>组织学凝胶样本处理胶</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>HG-4000-012</td><td>步骤 5.2 中所述的标本处理凝胶</td></tr><tr><td>冷冻模具</td><td>安温科学</td><td>4566</td><td>15 mm × 15 mm × 5 mm</td></tr><tr><td>组织标记染料</td><td>癌症诊断公司&amp;nbsp;</td><td>03000P</td><td>可用于标记替代物，&amp;nbsp; 可将多个样本放入同一个组织包埋盒中&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>铰链式组织包埋盒&amp;nbsp;</td><td>FisherBrand</td><td>22-272-416</td><td></td></tr><tr><td>甲醛</td><td>Fisher</td><td>23-245-685</td><td></td></tr><tr><td>GoldSeal 普通载玻片</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>3048-002</td><td></td></tr><tr><td>二甲苯</td><td>Fisher</td><td>X3P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>乙醇，200度（100%），USP</td><td>Decon Laboratories, Inc.</td><td>2805M</td><td></td></tr><tr><td>苏木精</td><td>赛默飞世尔科技 Richard-Allan 科学</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>澄清器</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7401</td><td></td></tr><tr><td>蓝染液</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>7301</td><td></td></tr><tr><td>伊红Y</td><td>赛默飞世尔科技 Richard-Allan 科学</td><td>7111</td><td></td></tr><tr><td>Cytoseal XYL 封片介质</td><td>Thermo Scientific Richard-Allan Scientific</td><td>83124</td><td></td></tr><tr><td>盖玻片</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-548-5G</td><td></td></tr></tbody></table>

制备与分析 体外 三维乳腺癌替代模型

Preparation and Analysis of In Vitro Three Dimensional Breast Carcinoma Surrogates

三维（3D）培养是模拟细胞行为的一种更接近生理条件的方法 体外 优于二维培养。癌组织（包括乳腺癌组织）是由癌变的上皮细胞和基质成分（包括成纤维细胞和细胞外基质（ECM））构成的复杂三维组织。然而，大多数 体外 乳腺癌模型仅包含癌变的上皮细胞，忽略了间质成分，因此也缺乏肿瘤的三维结构 体内. 准确构建癌的三维模型对于深入理解肿瘤生物学特性、行为及其对治疗的反应至关重要。然而，由于培养环境中氧气和营养物质的供应受限，三维模型的培养时间及体积往往受到限制。本文介绍一种方法，将乳腺癌上皮细胞与间质成纤维细胞共同嵌入细胞外基质（ECM）中，构建包含间质成分的三维乳腺癌替代模型，该模型既可作为实体三维结构进行静态培养，也可利用灌注式生物反应器系统以持续供给氧气和营养物质。在完成初始构建和生长阶段后，该替代模型可用于临床前药物测试。此外，亦可通过调整模型中的细胞和基质组分，以研究多种生物学问题。培养结束后，模型样品经固定并按类似于临床乳腺癌标本的处理方式加工成石蜡包埋切片，用于后续目标参数的评估。文中以细胞密度这一参数为例，说明如何利用ImageJ和CellProfiler图像分析软件系统，对替代模型组织切片的显微照片进行分析，定量单位面积内有核细胞的数量。该指标可用于反映细胞数量随时间的变化，或不同培养条件及处理干预下细胞数量的改变情况。

按照上述方法制备了实体和灌注的3D乳腺癌模型，并培养7天。随后，按照前述方法将模型固定、脱水并包埋于石蜡中，切片后进行苏木精-伊红（H&amp;E）染色。测定每个模型单位面积内的有核细胞数量（包括231细胞和CAF）。如图12所示，H&amp;E染色切片的代表性显微照片显示，尽管在初始构建时两种模型中的细胞密度相同，但灌注模型（图12A）中的细胞浓度明显高于实体模型（图12B）。这一细胞生长的视觉表现得到了CellProfiler分析结果的支持：灌注模型（n=3）单位面积内的平均细胞数量（密度）高于实体模型（n=3）（图12C）。为获得图12C中的数据，对每个模型的完整组织横截面进行成像，每个模型需采集多张图像，并按前述方法进行分析。然后，将每个模型的总核数除以其总面积（表示为每1×106像素2的核数），从而计算出每个模型的细胞密度。为验证CellProfile...

我们展示了一种生成三维乳腺癌替代模型的方法，该模型可通过灌注生物反应器系统进行培养，以提供氧气和营养物质。在培养完成后，将替代模型固定并经处理制成石蜡包埋样本，用于评估相关参数。本文详细说明了其中一项参数——细胞密度的评估方法。

三维（3D）培养相较于二维培养，是一种在体外更接近生理条件的细胞行为研究模型。癌瘤……

本套实验方案的总体目标是建立三维细胞培养模型，作为体外乳腺癌的替代模型，并介绍一种在该替代模型的组织学切片中测量细胞生长的方法。与二维细胞培养相比，三维细胞培养是一种在体外更符合生理条件的细胞行为研究模型。通过改变实验条件中的细胞组成，本套方法可被灵活应用于回答多种生物学问题，并可用于评估候选治疗药物的有效性。为将细胞掺入细胞外基质（ECM），请在冰上操作，将细胞以及随附文稿中表一列出的前四种相关组分加入一个2毫米的微量离心管中。接下来，用移液器轻柔混匀，避免产生气泡。使用10XD MEM中的酚红监测pH值，确保混合物呈现橙粉色，表明pH为7。如果混合液呈黄色且 pH 值过低，应逐滴缓慢加入 7.5% 碳酸氢钠，直至达到合适颜色。注意将混合液保持在冰上，并迅速操作，以防止 ECM 过早聚合。对于固体 3D 培养，应将培养 Chamber Slide 置于冰上，以防止 ECM 过早聚合。将100微升细胞外基质（ECM）混合物缓慢移液至八孔腔室载玻片的每个孔中，并将细胞ECM混合物移液至孔的边缘，以帮助更均匀地分布混合物。接着，将类器官在37摄氏度、5% CO2条件下孵育45分钟，以促进ECM聚合。45分钟后，向每个孔中加入100微升培养基，并在37摄氏度和5% CO2条件下继续孵育，直至实验结束。每隔两天更换一次培养基。三维培养的一个局限性在于，氧气和营养物质向培养物内部的扩散可能不足以维持细胞活力。添加生物反应器系统有助于克服这一限制，并促进细胞生长。在生物反应器系统中进行三维培养时，需无菌准备并组装用于容纳替代物的生物反应器部分。在细胞培养罩内，使用带有26号针头的注射器，将细胞外基质混合物注入灌注式生物反应器中设计用于容纳细胞的区域，并立即进入下一步操作。为确保细胞在替代物内分布更加均匀，将容纳替代物的生物反应器组件放入50毫升锥形管中。以18 rpm持续旋转替代物，在原位杂交炉或培养箱中37摄氏度孵育45分钟，以促进细胞外基质（ECM）聚合。聚合完成后加入培养基，将生物反应器组件连接至泵。在37摄氏度、5% CO2的培养箱中开始培养基灌注。在整个实验过程中持续进行培养基灌注，并根据具体实验设计的需要更换培养基。实验结束时，将类器官包埋于标本处理凝胶中，以确保在后续处理过程中类器官保持完整，并便于进行组织学切片。操作时，将标本处理凝胶置于60°C水浴中加热至完全融化，待用。然后，用移液器将约 300 微升的样本处理凝胶加入已标记的冷冻模具底部。使用手术刀片和镊子，小心地从生物反应器或八孔载片的孔中取出一个替代样本，并将其放入含有样本处理凝胶的冷冻模具中。再用移液器加入约 300 微升的样本处理凝胶，以完全覆盖冷冻模具中的替代样本。然后在4°C下孵育30分钟。待标本处理凝胶凝固后，将含有替代物的标本处理凝胶从冷冻模具中取出，并放入组织包埋盒中。若需将多个替代物置于同一组织包埋
盒中，可在固定和处理后使用组织标记染料以区分不同样本。随后，将含有替代组织的组织盒置于10%中性缓冲福尔马林溶液中，在室温下固定10至12小时，以确保完全固定。固定完成后，将含有替代组织的组织盒转移至70%乙醇中。固定好的替代组织现可进行石蜡包埋及后续组织学切片处理。为测量替代物的细胞密度及苏木精和伊红染色切片的显微图像，打开替代物的图像文件。在 ImageJ 中使用多边形工具，并以细胞外基质（ECM）的边缘为参考，通过拖动鼠标并单击设置锚点来勾勒替代物的区域。勾勒完成后，在“分析”选项卡下选择“测量”。接下来，通过将用于测量替代区域的图像文件拖拽到文件列表中，将其上传至Cell Profiler。然后，在“名称和类型导入”模块中为每个导入的图像分配名称，并选择图像类型。分析流程生成后，启动测试模式，并在Cell Profiler中点击运行。评估经筛选的对象，以确保测试图像中的大部分细胞核被准确识别，并选择最佳参数来鉴定细胞。被纳入的细胞核将以绿色圈出。然后，保存项目，退出测试模式，并点击“分析图像”。此处显示的是灌注型替代物培养七天后 H 和 E 染色切片的代表性图像。这是固体替代物在培养七天、每两天更换一次培养基后的 H 和 E 染色切片的代表性图像。固体替代物中的细胞密度明显较低。该图显示了培养七天后每单位面积平均有核细胞数的比较结果。分别为灌注型和实体型替代物。这些数值数据支持了苏木精-伊红染色切片显微照片中的细胞密度。此图显示了灌注组和实心组替代物在培养七天后细胞增殖指标 Ki-67 标记指数的比较结果。这些数据再次支持灌注组替代物具有更强的生长能力。在此步骤之后，可对替代物的组织切片进行原位杂交和氨基酸组织化学等其他方法，以研究 RNA 和蛋白质表达等问题。观看本视频后，您应能够充分掌握三维体外组织替代物的制备与处理方法，并能对经苏木精和伊红（H&E）染色的组织学切片进行替代物分析。

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Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

制备及分析<em&gt;体外</em&gt;三维乳腺癌代理项

利用定量PCR，我们展示了如何使用成熟的鸡胚尿囊膜模型对人肿瘤细胞向远端器官的转移进行定量分析。...

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人乳腺癌标本的长期培养及其通过光学投影断层成像技术的分析

在本视频中，我们介绍了将背根神经节与癌细胞共同培养于鸡胚尿囊绒毛膜（CAM）上以研究神经周围浸润的方法。...

鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）肿瘤模型：一种模拟肿瘤细胞神经周围浸润的鸡胚内实验方法

本文详细介绍了利用三维（3D）实验方法定量分析乳腺癌细胞侵袭的技术。具体而言，我们讨论了建立此类实验所需的步骤、定量方法与数据分析，以及检测细胞侵袭过程中细胞膜完整性丧失的相关方法。...

三维模型定量分析乳腺癌细胞侵袭性

侵袭周围正常组织是恶性肿瘤的一个显著特征。本文提供了一种简单且半自动化的微孔板检测方法，用于检测细胞对天然三维生物基质的侵袭能力，该方法已成功应用于多种人类晚期癌症模型。...

三维（3D）肿瘤球体侵袭实验

本文介绍了一种三维培养方法，用于分析原代乳腺癌细胞的形态，以及研究它们与单核细胞的直接/间接相互作用及其结果，例如胶原降解、免疫细胞募集、细胞侵袭和促进癌症相关炎症。...

基于细胞外基质提取物（ECME）的三维系统中单核细胞与原发性乳腺癌细胞间通讯的分析

本研究提出了一种先进的方案，通过检测绿色荧光蛋白和生物发光信号，并结合定量分子检测技术，精确评估肿瘤负荷。...

利用原位乳腺癌模型研究三阴性乳腺癌

患者骨髓来源的前列腺癌骨转移样本及其异种移植瘤的三维培养物可维持原始肿瘤的功能异质性，从而形成囊状结构、球状体以及复杂的类肿瘤类器官。本文提供了一种针对异质性患者来源样本进行三维培养的优化策略及实验方案，并介绍了利用成像流式细胞术（IFC）对其进行分析的方法。...

建立与分析源自前列腺癌骨转移患者样本及其异种移植瘤的三维（3D）类器官

本文列出了在先前描述的三维胶原基支架上接种神经母细胞瘤细胞系所需的步骤，包括在预定时间内维持细胞生长，并回收支架以进行多种细胞生长和细胞行为分析及后续应用，可根据不同的实验目的进行调整。...

三维 体外 基于胶原支架的神经母细胞瘤仿生模型

乳腺上皮细胞与内皮细胞之间的串扰在乳腺癌进展、肿瘤生长及转移中起着重要作用。本研究利用乳腺癌细胞与血管和/或淋巴管内皮细胞共同构建球状体，并验证其作为研究模型的适用性 体外...

乳腺上皮和内皮细胞球体作为乳腺癌研究潜在的功能性体外模型

本方案概述了培养、操作和分析小鼠CAFs的方法，包括 体外/体内...

小鼠乳腺肿瘤来源的癌症相关成纤维细胞作为分子与计算研究的工具

学习利用灌注生物反应器系统制备三维乳腺癌体外代理模型，并通过组织学切片分析细胞密度与增殖指标。该方法为肿瘤生物学研究及候选药物疗效评估提供了可靠的实验平台。

制备与分析体外三维乳腺癌替代模型

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