该离体文化与模式识别小鼠肠道组织体受体刺激

该程序的总体目标是测量致病性攻击对小肠类器官的影响，重点是针对总细胞数的正常化技术。这种方法可以通过提供一种在体外研究细菌与肠上皮细胞的宿主病原体相互作用的方法，帮助回答先天免疫学和粘膜免疫学领域的关键问题。该程序必不可少的是针对总细胞数进行标准化的方法，当通过诸如 ELISA.To 收集小鼠小肠隐窝用于类器官培养等技术测量类器官分泌蛋白时，这是必需的，首先使用无菌载玻片轻轻地从小肠的管腔表面刮掉绒毛。接下来，用解剖剪刀将组织剪成 1-2 厘米长的条状。并将试纸条放入含有 10 毫升冰冷 PBS 的 50 毫升锥形管中。通过轻轻倒置混合内容物，让组织内容物沉降到管底。然后，吸出 PBS 并在 10 毫升新鲜 PBS 中再洗涤试纸 3 次，每次都以相同的方式。在最后一次洗涤结束时，将试管放在冰上 10 分钟。然后，将 PBS 替换为 25 mL PBS 并添加 2 毫摩尔 EDTA，放入摇床平台上的冰桶中放置 45 分钟。孵育结束时，让组织条沉降到试管底部，并用 10 毫升补充有 10% FBS 的 PBS 替换 PBS-EDTA。用手用力摇动试管 10 次。然后，让组织沉降到试管底部，并将上清液转移到标有"馏分 1."的 15 毫升锥形管中，再搅拌 PBS FBS 中的组织五次。每次将上清液转移到新的馏分管中。最后一次搅拌后，离心所有样品，并将沉淀重悬于 5 毫升预热的 DMEM/F12 中，不添加生长因子。现在，再次离心样品并从每个试管中吸出 4 毫升上清液。将沉淀重悬于最后一毫升剩余培养基中，并使用每个级分的 20 微升等分试样来观察载玻片上的隐窝和碎片。在汇集适当的级分以达到最大百分比的隐窝与碎片比率后，离心合并的级分并吸出除最后 50-100 微升上清液之外的所有上清液。将试管保持在冰上，向混合组分中加入 1 毫升蛋白质基质，缓慢上下吹打以防止添加气泡。然后，将 50 微升蛋白质基质/隐窝悬浮液添加到每个 37 孔的中间