三刺鱼鳃弓骨骼的解剖与平铺制备

本实验的总体目标是解剖并平铺固定刺鱼的鳃弓骨骼。该方法有助于回答发育、遗传和进化领域的关键科学问题，例如动物如何适应新环境，以及在发育过程中成体形态差异是如何产生的。

该技术的主要优势在于，通过解剖并平铺鳃部骨骼，可以观察到多种无法在整体骨骼标本中研究的摄食相关性状。在准备阶段，需先复习三刺棘背鱼头部骨骼的相关形态学知识。在完成鱼类解剖前的准备工作后，首先将尖头5号镊子以45度角从眼睛侧面插入，刺穿覆盖眼睛的膜结构。

然后，像打开酸奶盖一样剥离眼球的膜。接着，将张开的镊子插入眼球后方，夹住视神经并摘除眼球。注意避免刺破眼球，否则会导致黑色素泄漏。

用另一侧眼睛重复此操作。然后，将小型剪刀的刀片置于鳃盖瓣后侧下方，沿鳃盖背侧上方的软组织向眼眶方向剪开。接下来，剪开位于眼眶背侧的额骨。

然后，沿眼眶中心位置的中线副蝶骨进行切割。在对侧重复进行鳃盖骨的切割。在接下来的步骤中，可用骨盆棘作为操作手柄。

轻轻将它们从身体直接向外拉开，使其展开。然后将镊子插入鳃盖下方，缓慢将面部从身体上剥离，并在过程中修剪掉任何仍附着的软组织。

操作时请注意鳃耙，避免对其造成扰动。在移除面部骨骼时，容易意外夹住 Percoll 以及第一角鳃骨。剥离 Percoll 向前翻起时，应检查其下方，确保未夹住其他多余组织。

现在，用镊子将两侧中线处的角鳃骨与基鳃骨分离，同时剥离并移除前颅面骨骼。对另一侧重复此操作。前颅面骨骼包括整个下颌、整个舌骨骨骼、其下方的背侧和软骨内元素以及颅骨的前部。

接着，将闭合的镊子插入食管下方，并向前方拖动，同时分离附着在鳃骨上残留的肌肉和韧带。然后，用闭合镊子的尖端刮除将背侧鳃骨与腹侧脑颅相连的肌肉。

以从后向前的方向进行刮取。在刺鱼的另一侧重复肌肉去除操作。接下来，抓住肠管基部，向前牵拉，以去除鳃部骨骼。

在第五角鳃骨后方，以垂直方向切断，分离肠管。常见的错误是夹取肠管位置过于靠前，导致腹侧额管被远远留下。务必在胸腔后部深处夹取，之后如有需要，可随时去除多余的肠管部分。

在从鳃部骨骼背侧的脑颅中去除所有残留的骨碎片后，将剪刀插入鳃篮内，在左右两侧的背侧齿板之间进行背侧剪切。保持切口居中，以避免损伤背侧齿板。

接下来，在鳃骨后端的软质肠腔上做两个浅的侧向切口。在肠管的前端，以协助打开鳃骨结构。

现在，将骨骼转移到已装有50%甘油和0.25%氢氧化钾的微量离心管中，以进行温和透明处理。如果无需进一步透明，则可直接将其转移至纯甘油中。如需重新染色，具体步骤详见文本方案。

为准备封片，将溶液更换为纯甘油，并将试管振荡至少五分钟。随后，取出鳃弓骨骼，将其背侧朝上放置于一块 22 × 60 毫米的玻璃盖玻片底部附近。接着，向骨骼上转移数滴甘油。

接下来，揉出两小团塑性粘土，分别置于盖玻片的两端，作为间隔物。然后将另一块盖玻片轻轻覆盖在标本上，施加适当压力以压平鳃弓前部骨骼。接着，剥开左侧背侧瓣膜（包括背侧齿板），并将该瓣膜滑入两块盖玻片之间。

然后对右侧背瓣进行相同操作，并将整个鳃部骨骼推离盖玻片边缘。为完成该步骤，轻轻按压上方的盖玻片，使黏土小球压平。

加入的量只需足以使鳃弓骨骼保持平展固定即可，但不能过多，以免压碎样本。如果在操作过程中某排鳃耙被遮挡，可用镊子插入盖玻片之间，调整角鳃骨或整个样本的方向。

当在纯甘油中压片时，该标本可在室温下平放保存至少十年。本方案可获得解剖并压片的鳃弓骨骼，其中多种重要的摄食相关性状均可被长期保存。

从背侧视角观察，所有鳃耙列、咽齿板以及几乎所有的鳃弓骨均可被清晰地观察和记录。茜素红S在罗丹明或类似的红色滤光片下也会产生荧光，因此可实现与其他标记物的双重标记及多种可视化方法。在本图像中，鳃耙以尖号标记。

牙齿用箭头标示，骨骼用星号标示。掌握该技术后，解剖可在数分钟内完成，可相对快速地对数百只动物进行操作。尽管我们以刺鱼的鳃部骨骼解剖为例进行了演示，但我们希望本操作流程可作为多种鱼类物种解剖的参考指南。

通过分离鳃部骨骼，我们可以快速、直观地观察到多种重要的摄食特征，而这些特征在整体封片标本中是无法看到的，从而有助于更好地理解颅面骨骼的发育与演化。