腓神经损伤方法:可靠检测，以确定和测试因素修复神经肌肉接头

这种周围神经损伤方法的总体目标是可靠地检查小鼠的再生神经肌肉接头。这种方法将帮助我们识别与再生神经肌肉接头相关的分子、细胞和功能变化。该程序的主要优点是，在很大程度上在没有肌源性变化的情况下，可以在实验组之间可靠地比较神经肌肉接头再生的速度。

演示该程序的是我实验室的一名医学生 William Dalkin。在开始手术之前，使用 80% 乙醇清洁手术部位、板和器械，然后用聚维酮碘消毒。接下来，将鼠标放在手术板上并确认对脚趾捏没有反应。

约束装置内的肢体与处于解剖学自然位置的目标后肢对齐，膝关节略微伸展，无需内旋或外旋。然后，将动物转移到手术显微镜下并调整板，直到通过物镜可以看到骨膝关节和胫骨前肌与腓肠肌之间的嵴。使用手术刀和镊子，在皮肤上做一个大约 3 厘米的切口，垂直于腓总神经的下层走行。

继续通过浅筋膜切开，露出股二头肌和股外侧肌，然后通过连接的深筋膜切开 1 到 2 厘米的切口以分离肌肉。接下来，使用机械牵开器将股二头肌向尾部后退，露出腓总神经。向近端追踪神经，直到找到它与腓肠肌外侧头肌腱的交点。

然后，使用细镊子抓住神经，使尖端平行于腓肠肌腱的外侧缘对齐，并稳定、集中地按压 5 秒钟，以压碎腓总神经。垂直于纤维握住镊子，抓住镊子尖端后面的区域的组织，然后用力但轻柔的压力，沿着肌腱边界干净、线性地挤压神经。通过手术显微镜目视检查神经，以确认组织完全压碎。

神经在受伤部位呈半透明状。如果使用在外周轴突中表达荧光蛋白的小鼠，荧光将从受伤部位消失。如果神经已严重受损，请移除牵开器并重新调整解剖位置的肌肉。

然后，使用 6-0 丝缝合线用一到三条简单的间断缝合线闭合切口部位，并将鼠标放在干净笼子中的加热垫上，并进行监测，直到完全恢复。使用细镊子压迫神经 5 秒钟会导致 YFP 从受伤部位消失。神经外膜保持连续，作为轴突精确再生到其原始目标的管道。

在 70 日龄雌性小鼠中，神经损伤足以在粉碎后 4 天导致神经元体远端所有轴突节段变性。到 挤压后 7 天，神经末梢正在积极地重新占据空出的突触后部位。第 12 天，神经末梢继续分化为突触前部位，神经肌肉接头完全再放牧。

神经支配相同时间长度的小鼠之间几乎没有变异性，表明腓神经粉碎可用作比较相同年龄和性别动物之间肌肉再能的测定方法。正如预期的那样，α 运动轴突在对肌肉纤维进行再神经化时会发生许多变化。轴突生长锥在接触突触后位点时扩展和分支，生长在突触后位点的特定区域，并最终导致轴突末端与突触后位点几乎完全并列。

定量 PCR 显示，神经肌肉接头相关基因在去神经支配后增加，随着神经肌肉接头再放能而减少。一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在 15 分钟内完成。在尝试此过程时，重要的是要记住花点时间，可视化所有结构，并仔细检查是否已获得完全压碎。

按照此程序，可以执行 QPCR 等其他方法来回答有关哪些基因上调或下调的其他问题。开发后，这项技术为神经生物学领域的研究人员探索小鼠突触再生铺平了道路。看完这个视频后，你应该对如何进行腓神经挤压以检查小鼠神经肌肉接头再惰的速率有一个很好的了解。