快速分子检测和流感病毒A和B的分化
2017年1月30日
我们描述了一个快速，分子为基础的甲型和乙型流感检测。流感检测采用等温扩增与流感特异性引物，其次是目标检测与分子信标探针检测15分钟内每一个目标。的甲型和乙型流感检测是用户友好的，并要求最少的动手时间来执行。
该检测的总体目标是诊断或排除呼吸系统患者的流感病毒感染。这种方法可以帮助回答临床诊断领域的关键问题，例如诊断呼吸道感染的关键原因。该技术的主要优点是它是一种快速方法，可用于指定护理环境。
演示该程序的是我们实验室的技术人员 Sam Kaplan。要采集鼻拭子样本，请将拭子插入引流最明显或最充血的鼻孔中。轻轻旋转，将棉签推入鼻孔，直到遇到阻力，然后靠着鼻壁旋转数次，然后慢慢从鼻孔中取出。
随后，储存拭子并将其运输在含有 3 毫升病毒运输培养基的小瓶中。接下来，在测试前将样品和蓝色样品接收器置于室温下。橙色测试底座无需加热至室温即可进行测试。
将所有试件留在铝箔中，直到使用前。然后打开仪器，输入用户 ID 并按 OK.To 开始测试过程，点击仪器屏幕上的运行测试。接下来，使用屏幕键盘或条形码扫描仪输入患者 ID，然后按 OK（确定）。之后，打开盖子，将橙色测试基座管插入橙色测试基座支架。
确认屏幕上显示了正确的测试，然后按 OK。然后将蓝色样品接收器插入蓝色样品接收器支架，并等待样品接收器预热。然后，将两根手指放在样品接收器的边缘，以确保其保持在原位，以去除箔封。然后将患者待测的拭子放入样本接收器中。
将拭子和液体剧烈混合 10 秒钟，然后将拭子头压在样品接收器的侧面，以帮助将样本从拭子中取出。如果检测拭子储存在病毒运输介质中，请将病毒运输介质涡旋 10 秒，然后向样品接收器中加入 200 微升。然后按 OK 继续。
然后将白色转移柱压入蓝色样品接收器。继续按压样品接收器，直到橙色指示灯亮起。然后提起转移柱并将其连接到测试底座。
正确连接磁带传输后，橙色指示灯应下降。合上盖子，在出现 Results （结果） 屏幕之前不要打开。现在触摸主屏幕上的 Run QC test（运行 QC 测试）。
选择要运行的 QC 测试。然后单击 OK（确定）并按照屏幕上的提示完成测试，以确认测试类型与要测试的 QC 样品匹配。测试运行完成后，观察屏幕上显示的测试结果以及是否存在甲型、乙型流感或未知亚型的解释，并重复测试以获得无效结果。
之后，用 70% 乙醇或 10% 漂白剂溶液清洁仪器和周围的工作台区域。该图显示了 RP 分析确定的每种流感亚型的阳性和阴性样本的平均 CT 值。结果表明，甲型和乙型流感测定确定的假阴性样本是由于病毒载量样本低所致。
一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在 15 分钟内完成。在尝试此程序时，请务必记住，在最初设置检测时，转移卡夹必须连接到检测基座，直到它们卡入到位。如果这两个部分没有正确固定，运行将失败，需要从头开始重复。
观看此视频后，您应该对如何进行流感诊断检测有很好的了解。不要忘记，处理可能感染流感的患者样本可能非常危险，因此在执行此程序时应始终采取预防措施，例如佩戴适当的个人防护装备。
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概述
本文描述了一种用于检测甲型和乙型流感病毒的快速、分子基础的检测方法。该检测方法利用等温扩增和分子信标探针，仅需15分钟即可得出结果。
关键研究组成部分
科学领域
- 临床诊断
- 分子生物学
- 传染病学
背景
- 流感病毒是导致呼吸道感染的主要原因。
- 快速诊断对有效的患者管理至关重要。
- 当前的方法可能需要更长的处理时间。
- 该检测方法旨在以用户友好的格式提供快速结果。
研究目的
- 开发用于诊断流感病毒感染的快速检测方法。
- 提高呼吸道疾病临床诊断的效率。
- 在医疗环境中促进及时的治疗决策。
使用的方法
- 使用流感特异性引物进行等温扩增。
- 使用分子信标探针检测目标。
- 通过鼻腔拭子收集样本。
- 该检测方法所需的人工操作时间最少。
主要结果
- 检测方法在15分钟内提供结果。
- 适合临床环境的用户友好流程。
- 有效检测甲型和乙型流感病毒。
- 由实验室技术员演示。
结论
- 该检测方法是快速和高效的流感诊断工具。
- 它可以显著提高呼吸道感染患者的护理质量。
- 进一步的研究可能扩大其在临床诊断中的应用。
常见问题
Executive Industry Relevance
Rapid molecular detection of influenza viruses supports early diagnostic decision-making in respiratory illness management. The assay’s 15-minute turnaround enables timely triage in point-of-care settings, reducing diagnostic latency. This capability aids in de-risking early-stage antiviral development by providing reliable infection status data.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables confirmation of influenza infection status in preclinical models, supporting target validation studies.
- Operational Value: Provides a rapid, closed-system readout that reduces hands-on time and contamination risk.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates quantitative detection signals via molecular beacon probes for assay optimization.
- Operational Value: Delivers reproducible results across frozen, archived nasopharyngeal specimens, supporting assay robustness.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Facilitates longitudinal monitoring of viral load in disease-relevant systems, aiding mechanistic de-risking.
- Operational Value: Enables cross-functional alignment between virology and toxicology teams through standardized output.
Pipeline & Workflow Integration
The assay fits within early discovery workflows where rapid infection status confirmation is required before proceeding to lead optimization.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by distinguishing influenza A and B infection in experimental cohorts.
- Screening: Enables preparation of standardized biological samples for downstream antiviral screening.
- Analytics: Provides qualitative and semi-quantitative outputs that help compare antiviral efficacy across conditions.
- Translational Research: Connects early infection detection to preclinical continuity through consistent viral detection.
- Enterprise Reuse: Represents a reusable diagnostic module for respiratory virus studies across multiple projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Reduces mechanistic ambiguity in infection models by providing clear influenza subtype differentiation.
- Operational Value: Ensures standardization and reproducibility through pipette-free, closed-system operation.
- Strategic Value: Improves go/no-go decisions in antiviral programs by enabling rapid infection confirmation.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of compounds based on timely target engagement data.
Implementation Considerations
- Requires training in nasopharyngeal swab collection and sample handling in viral transport medium.
- Depends on instrument maintenance and reagent stability for consistent performance.
- Necessitates cross-team protocol alignment for sample tracking and result interpretation.
- Must account for reduced sensitivity in low viral load samples, as observed in frozen specimen comparisons.
- Benefits from environmental controls to prevent amplicon contamination in high-throughput settings.
