Name: 从鲟鱼去除耳石替代方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 7 s
Description: 学习从鲟鱼尸体中无损提取耳石的有效替代方法，该方法可保护耳石完整性并减少对周围结构的损伤。此技术有助于研究鱼类年龄、生长及栖息地相关微化学，为濒危物种湖鲟的生态恢复提供重要数据支持。

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特别感谢圣雷吉斯莫霍克环境部、韦拉卡国家鱼类孵化场、美国鱼类及野生动物管理局研究组、南伊利诺伊大学、美国鱼类及野生动物管理局东北渔业中心、斯特林鱼子酱公司、加州大学戴维斯分校、加里森大坝国家鱼类孵化场、贝尔斯布卢夫国家鱼类孵化场以及美国鱼类及野生动物管理局巴拿马城渔业资源办公室为本项目提供鲟鱼所给予的帮助。&#160;本文为美国地质调查局五大湖科学中心第2013号贡献论文。

重要提示：由于在美国所有鲟鱼物种均受到保护，因此在进行实验室操作前已获得获取和处理鱼类的许可。所有样本均来自孵化场因自然原因死亡后的个体，并在实验后按照标准程序进行处理。
1. 标本制备
<ol>
	<li>在进行任何切口之前，将鲟鱼尸体侧放，并使用卷尺测量从吻端到尾鳍尖端的总长度，精确至1 mm。（图1A）</li>
	<li>将鲟鱼尸体置于已去皮的天平上称重，精确至1 g。检查尸体是否有任何外部标记或标签并予以记录。</li>
</ol>
2. 耳石提取
<ol>
	<li>使用大型去骨刀在头骨基部与第一背侧骨板之间沿身体做垂直切口，将头部与身体分离 (图 1B)。移除头部后，将头部翻转至口部朝上 (图 1C)。</li>
	<li>使用去骨刀沿头骨腹侧切割，去除口腔和鳃部的软组织 (图 1D)。使用电动骨锯从吻部尖端至头骨基部做切口，将头部完全纵向剖开 (图 1E)。用手将两半头部分离，暴露脑腔 (图 2A)。</li>
	<li>用镊子取出并丢弃脑组织（左侧红框），以观察脑腔内的半规管结构（右侧红框）(图 2B)。</li>
	<li>用镊子从脑腔中取出半规管软骨 (图 2C)。用镊子尖小心刺破半规管软骨，并取出耳石 (图 2D)。用镊子从半规管软骨中取出耳石（位于软骨内部的坚硬骨状结构）(图 2E)。</li>
	<li>重复步骤 2.3–2.4，从头骨的另一半中取出耳石。</li>
	<li>将耳石浸入 92% 乙醇中 5 秒，以去除残留软骨。将耳石置于敞口的 25 ml 闪烁瓶中，干燥 24 小时。</li>
</ol>

<ol><li>Auer, N. A. Conservation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAuer%2C+NA+%22Sturgeons+and+Paddlefish+of+North+America%22">Sturgeons and Paddlefish of North America</a>. LeBreton, G. T. O., Beamish, F. W. H., McKinley, R. S. 27, Kluwer Academic Publishers. 252-276 (2004).</li>
<li>Sturgeon Specialists Group, sturgeon conservation. IUCN (International Union for the Conservation of Nature). , Source: 
 <a target="_blank" href="www.iucn.org">www.iucn.org</a> (2008).</li>
<li>Campana, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy%2C+precision+and+quality+control+in+age+determination%2C+including+a+review+of+the+use+and+abuse+of+age+validation+methods%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Fish+Biology%22%5BJournal%5D)">Accuracy, precision and quality control in age determination, including a review of the use and abuse of age validation methods).</a> Journal of Fish Biology. 59, 197-242 (2001).</li>
<li>Bruch, R. M., Campana, S. E., Davis-Foust, S. L., Hansen, M. J., Janssen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lake+Sturgeon+age+validation+using+bomb+radiocarbon+and+known-age+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Transactions+of+the+American+Fisheries+Society%22%5BJournal%5D)">Lake Sturgeon age validation using bomb radiocarbon and known-age fish.</a> Transactions of the American Fisheries Society. 138, 361-372 (2009).</li>
<li>Baremore, I. E., Rosati, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated%2C+minimally+deleterious+method+for+ageing+sturgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Fishery+Bulletin%22%5BJournal%5D)">A validated, minimally deleterious method for ageing sturgeon.</a> Fishery Bulletin. 112, 274-282 (2014).</li>
<li>Stevensen, J. T., Secor, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+determination+and+growth+of+Hudson+River+Atlantic+sturgeon%2C+Acipenser+oxyrhynchus%5BTitle%5D)+AND+%22Fishery+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Age determination and growth of Hudson River Atlantic sturgeon, Acipenser oxyrhynchus.</a> Fishery Bulletin. 97, 153-166 (1999).</li>
<li>Brennan, J. S., Cailliet, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+age-determination+techniques+for+white+sturgeon+in+California%5BTitle%5D)+AND+%22Transactions+of+the+American+Fishery+Society%22%5BJournal%5D)">Comparative age-determination techniques for white sturgeon in California.</a> Transactions of the American Fishery Society. 118, 296-310 (1989).</li>
<li>Rossiter, A., Noakes, D. L. G., Beamish, F. W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+age+estimation+for+the+lake+sturgeon%5BTitle%5D)+AND+%22Transactions+of+the+American+Fisheries+Society%22%5BJournal%5D)">Validation of age estimation for the lake sturgeon.</a> Transactions of the American Fisheries Society. 124, 777-781 (1995).</li>
<li>Chalupnicki, M. A., Dittman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((North+American+Sturgeon+Otolith+Morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Copeia%22%5BJournal%5D)">North American Sturgeon Otolith Morphology.</a> Copeia. , 260-266 (2016).</li>
<li>Secor, D. H., Dean, J. M., Laban, E. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSecor%2C+DH+%22Manual+for+otolith+removal+and+preparation+for+microstructural+examination%22">Manual for otolith removal and preparation for microstructural examination</a>. , Barach Press. Columbia, South Carolina. (1991).</li>
</ol>

任何贸易、产品或公司的名称使用仅用于描述性目的，并不意味着美国政府的认可。

本文详细介绍了从鲟鱼尸体中提取耳石的一种替代方法。需要注意的是，必须特别注意在头骨中线处进行侧向切口的位置，以确保均匀地将头骨一分为二，从而在解剖过程中避免对耳石造成损伤。如果切口深度不足以完全分开头骨，则将很难暴露脑腔，而耳石的位置在脑腔内清晰可见。随着操作经验的积累，该技术整体上相对简单，并能以较高比例完整地获取耳石。这种新方法为研究人员提供了另一种选择，可用于提取除鲟鱼以外其他物种的耳石，而这些物种使用传统的耳石提取方法可能较为困难。
该方法的局限性在于仅适用于实验室环境，无法用于野外。尸体准备所需的时间不利于及时处理野外采集的样本。另一个问题是，由于种群数量下降，鲟鱼物种通常受到州或联邦法律的保护，因此对该类物种的使用需加以关注。
要获得许可以牺牲维持种群生存所需个体为代价来开展此类评估极为困难。然而，当因自然原因获得死亡标本时，该技术提供了一种比其他方式获取更多信息的有效途径。
需要注意的是，该技术在成功利用这种替代方法从鲟鱼中取出耳石方面具有重要意义。现有的从...

由于栖息地丧失、种群片段化和过度捕捞等因素的影响，全球范围内的鲟鱼（Acipenseridae）种群数量已持续下降超过一个世纪，许多种群现受到州和联邦法律的保护1,2。美国及世界各地的管理机构已将鲟鱼列为重点恢复和保护的目标物种1。大多数鲟鱼种群的种群特征（如生长、补充量、食性）已被研究，以更深入地了解其基本生物学和生活史特征1。由于大多数鲟鱼种群处于受保护状态，在那些无需牺牲或伤害个体的小型濒危种群中，年龄评估变得尤为困难。
为了进行年龄估算和生长分析而提取骨骼结构是一种常用的技术3。利用鳍条切片来确定鲟鱼年龄已成为一种实用的非致死性方法，但该技术的验证仍有限，且在较老个体（&#62; 15年）中年龄的判读可能极为困难4。研究人员评估了多种骨骼结构在鲟鱼中的应用，以验证海湾鲟（Acipenser oxyrinchus desoti）5、大西洋鲟（A. o. oxyrinchus）6、白鲟（A. transmontanus）7和湖鲟（A. fluvescens）8的年龄，结论指出第一根边缘胸鳍鳍条可提供最准确的年龄信息，但认为这种侵入性操作对较大个体具有不利影响。&#160;目前，正发展利用耳石形态测量学来区分北美鲟鱼物种，其成功率非常高9。关于通过颅骨基部背侧横切口移除耳石的操作过程，在文献中是一种常见的耳石提取方法，并由Secor等人（1991）进行了清晰详述10。然而，该方法在头骨非常厚、耳石小而脆弱且易碎的鲟鱼中难以实施。进一步查阅文献发现，尚无其他针对鲟鱼耳石移除过程的详细方法描述。本文的目的是详细阐述一种从腹侧进入脑腔以提取鲟鱼耳石的替代方法。

<table><tbody><tr><td>测量板</td><td></td><td></td><td>推荐使用公制米尺</td></tr><tr><td>称重秤</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>去鳞刀</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>手术刀</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>镊子</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>样品瓶</td><td></td><td></td><td>25 ml 闪烁瓶效果良好</td></tr></tbody></table>

鲟鱼耳石去除的替代方法

Alternative Method of Removing Otoliths from Sturgeon

从头骨非常厚的鱼类中提取耳石（耳骨）可能十分困难且耗时。通常采用手动或电动锯在头骨顶部做横向垂直切口的方法，若操作不当，可能会损伤耳石。鲟科（Acipenseridae）鱼类的头骨尤其大而厚。一种新的实验室方法通过从鱼体腹侧进入颅腔以暴露耳石，相比文献中记载的其他耳石提取方法更为简便。文献中已有的方法主要针对野外操作设计，适用于快速处理大量样本。然而，这种新技术则更适用于实验室环境，在时间不紧迫且要求每个样本均成功提取耳石的情况下尤为适用。采用该技术寻找并取出耳石的成功率极高，且不会对耳石结构造成任何破坏。这种替代性技术同样适用于其他具有类似特征的鱼类物种的耳石提取。

全球范围内鲟鱼的成体大小差异显著，但耳石的位置具有一致性。使用锋利的剔骨刀可轻松去除口部软组织，如图1D所示。电动骨锯是进行侧向切口以暴露脑腔的首选工具，如图1E所示。然而，操作时需注意沿颅骨中线对称切割，否则耳石可能在此过程中被压碎。若操作正确，则脑腔将被均匀暴露，且耳石未受损伤，如图2A所示。使用镊子可轻松移除脑组织，如图2B所示；位于脑腔底部的半规管软骨（内含耳石）也易于识别，如图2C所示。如图2D所示，使用一对镊子可轻松将半规管内的软骨与耳石分离。
该操作成功展示了鲟鱼耳石的取出过程，是鱼类生活史更深入定量分析的初步步骤。操作成功与否可通过耳石是否完整取出而未发生结构破损来判断。利用取出的耳石可评估年龄鉴定和生长速率两项指标。此外，还可基于耳石...

本实验方案的目的是展示一种从鲟鱼尸体中有效提取耳石的方法。

从头骨非常厚的鱼类中提取耳石（耳骨）可能十分困难且耗时。通常采用的...

本方法的总体目标是为从濒危鱼类（如湖鲟）中提取完好的耳石提供一种有效的替代技术。该耳石提取方法有助于解答有关鱼类年龄与生长、耳石相对于脑形态的位置以及与栖息地相关的微化学特征等关键科学问题。该技术的优势在于，对于头骨较厚而耳石脆弱的鱼类，打开脑腔不会损伤耳石，也不会破坏其他重要结构。该方法的构思源于对濒危鲟鱼恢复生态学的研究。在残存种群中，很少能获得用于尸检和实验室分析的样本。因此，成功获取个体动物的年龄及其他信息，对于填补物种数据空白至关重要。Mark 将进行从湖鲟中取出耳石的操作。要提取耳石，首先将鲟鱼腹面朝下放置，使用卷尺测量从吻端到尾鳍尖端的总长度，精确至最接近的1毫米。接下来，将鱼体放在已去皮的秤上称重，精确至最接近的1克，并检查鱼体是否有任何外部标记或记号。记录这些数据后，使用一把较大的去骨刀，在头骨基部与第一背盾之间沿身体垂直切开，以分离头部。移除头部后，将头骨翻转，使口部朝上。然后使用去骨刀沿头骨腹侧切割，以去除软组织。随后用电铸切割器从吻部尖端向颅底进行切口，完全将头部纵向切开。用手分开两半以暴露脑腔。然后用镊子取出并丢弃脑组织，以暴露脑腔内的半规管。从脑腔中取出半规管软骨。然后用镊子尖端小心刺破半规管软骨。在软骨内识别出坚硬的骨性结构后，取出耳石并将耳骨浸入92%乙醇中四秒钟，以去除残留的软骨组织。最后，将耳石置于敞口的25毫升闪烁瓶中干燥24小时。全球范围内成年鲟鱼的体型差异很大，但耳石的位置始终一致。如图所示，使用锋利的解剖刀可轻松去除口腔内的软组织。使用电动骨锯进行侧向切口以暴露脑腔是首选方法。需仔细注意沿颅骨中线对称切割，否则在操作过程中可能压碎耳石。镊子可方便地移除脑组织，从而暴露位于脑腔底部的半规管软骨，该软骨中含有耳石。随后可用镊子轻松地将半规管内的软骨与耳石分离，以便进一步对耳骨进行分析。一旦掌握该技术，若操作得当，整个过程可在五分钟内完成。进行该操作时，重要的是要注意在做切口时应保持耐心，动作要缓慢细致。切勿忘记，使用解剖器械和处理死鱼可能存在危险且伴有异味。因此，在进行该操作时，应始终采取适当的预防措施，例如正确使用手术器械并穿戴合适的个人防护装备（PPE）。观看本视频后，您应能够充分掌握如何从腹侧打开鲟鱼的头骨，并在不损伤耳石的情况下将其完整取出。该技术开发后，为渔业科学领域的研究人员探索传统方法难以成功取耳石的鱼类提供了新的可行途径。

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科研

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Environment

环境

从鲟鱼去除耳石替代方法

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斑马鱼内耳毛细胞的膜片钳记录

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一种结合全双侧鳃去神经术的时间差异染色技术用于研究鱼类离子细胞

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利用计算机辅助视频和数字图像分析量化鱼类对急性水体铜暴露的游泳行为反应

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模拟溪流生态系统中大型无脊椎动物和鱼类的个体大小谱

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从鲟鱼鳍和颌骨基质中提取皮质醇

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对嗅神经进行细胞外多单位记录是评估海洋鱼类嗅觉敏感性的敏感、可靠且可重复的方法。该方法记录初级感觉输入，且不受外界盐度的影响。...

硬骨鱼类嗅神经的细胞外多单位记录

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在小型硬骨鱼类模式生物日本青鳉（Oryzias latipes）中进行性腺切除与采血操作的实验方法

学习从鲟鱼尸体中无损提取耳石的有效替代方法，该方法可保护耳石完整性并减少对周围结构的损伤。此技术有助于研究鱼类年龄、生长及栖息地相关微化学，为濒危物种湖鲟的生态恢复提供重要数据支持。

鲟鱼耳石去除的替代方法

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