测定掠夺取食行为 Pristionchus及其他线虫

这些程序的总体目标是通过使用几种新颖的测定法可靠地分析捕食性线虫的复杂摄食行为。这些方法可以帮助回答行为神经生物学领域的关键问题，例如新复杂行为的调节，实际上还有进化。这些技术的主要优点是它们提供了一种快速、易于重复的方法，以便观察和量化线虫的捕食性取食行为，包括卫星模式生物 Pristionchus pacificus。

为了可视化线虫口变形，首先用温和的麻醉处理将蠕虫固定在新鲜制备的 2% 琼脂糖垫上。要制作垫子，请小心地将 10 微升 10% 叠氮化钠溶液加入 3 毫升熔化的琼脂糖中，并充分混合。叠氮化钠具有反应性和毒性，因此请采取适当的预防措施。

然后，将至少 300 微升混合物滴到标准玻璃显微镜载玻片的中间，并使用另一张载玻片将琼脂糖压平。将顶部玻片留在原位，直到即将使用垫子。要准备使用垫，请取下顶部载玻片并添加一滴 M9。然后挑选两到三条蠕虫，将它们放入液滴中，并小心地盖上盖玻片。

使用 63 倍 Nomarski 光学元件观察蠕虫，以对它们的形态特性进行分类。扩大的背牙、额外的腹下牙或扩大的宽口开口都是 eurystomatous 动物的特征。而单颗背齿和较窄的嘴巴张开表明狭窄口动物。

在五分钟内，从麻醉垫上去除线虫。轻轻滑下盖玻片，然后将它们转移到新的 MGM 板上。等到它们表现出运动行为后，再进行任何进一步的分析。

随着经验的增加，可以在没有麻醉处理的情况下对形态进行检测。将 10 至 20 个线虫从标准培养板转移到接种有 OP50 细菌草坪的新鲜板上，以便使用高放大倍率的立体显微镜进行快速口型表型分析。然后检测嘴巴大小和宽度的差异。

在此放大倍率下，无法观察到类似牙齿的结构，因此请根据它们的宽度来识别嘴形。从而区分宽口和窄口。通过培养大量选定的猎物线虫幼虫（如幼虫阶段秀丽隐杆线虫或适当的生态相关猎物）来制作检测板。

饿死四个或更多板的猎物物种以收集 L1 幼虫。然后，用 M9 清洗板，并将收集物通过两个 20 微米过滤器。只有小幼虫应留在溶液中。

以 377 g 的浓度使幼虫沉淀一分钟。将 M9 上清液取出到废烧杯中，取 3 微升等分试样的纯蠕虫沉淀。将蠕虫放在不含大肠杆菌的 6 厘米 MGM 板的中心，让它们散开约半小时。

稍后，使用幼虫进行咬合测定。将捕食者转移到检测板上，用尽可能少的 OP50 细菌。对于 P.pacificus，在盘子中加入五个捕食者。

等待 15 分钟，让转移的动物从压力中恢复过来。15 分钟后，蠕虫应该可以正常移动，或者它们可能已经损坏。现在观察并记录其中一只捕食者的不同事件 10 分钟。

咬人的特点是捕食者限制猎物的运动。当猎物的角质层是开放的时，就会发生杀戮。摄食的特点是可观察到的猎物内脏消耗。

观察至少 10 个单独的捕食性线虫以确保准确性。可以在 Nomarski 光学器件下以 40 至 63 倍的放大倍率观察到咽部泵送和牙齿移动，并使用 50 赫兹的高速相机进行记录。在录制至少 20 只动物的 15 秒剪辑后，可以可靠地分析视频。

在位于咽部中间的体中观察到抽动。牙齿移动可以在张口时检测到，并且只能从背牙观察到。捕食两个小时后，筛选盘子里的空尸体。

通过尸体没有运动和明显的形态缺陷（包括内脏渗漏或蠕虫碎片缺失）来识别尸体。在成功鉴定出 P.pacificus 中适当的口腔形态后，观察到 eurystomatous 和 stenostomatous 动物之间的明显差异。只有 eurystomatous 动物从事杀戮行为。

此外，神经动物的牙齿活动和咽部泵送对细菌和猎物的差异也很明显。在捕食性喂养期间，泵送速率降低到低于细菌喂养期间观察到的水平，并且与咽部泵送时牙齿移动相同。观看此视频后，您应该对如何结合这些不同的分析方法有一个很好的了解，以便表征线虫中复杂的捕食性取食行为，包括在卫星模式生物 Pristionchus pacificus 中。