定量应用同质MALDI样品的制备

MALDI MS 的这种样品制备方法的总体目标是减少 MALDI MS 过程中离子信号的空间异质性。通过在干燥过程中纵样品液滴内部的流体动力学流动，构建了一个控制良好的干燥环境，以优化传统的干燥液滴法。该技术的主要优点是可以有效降低通过优化的干滴法制备的样品的离子信号的空间异质性。尽管这种方法可以为 THAP 公制提供同质样本。

它也可以应用于其他公制系统，例如 α-氰基-4-羟基肉桂酸。一般来说，刚接触这种方法的人会很挣扎，因为控制干燥条件并不容易。要开始此过程，请打开干燥室的门，并立即将先前清洁的样品板放在铜基块上。

然后，关上门。手动调节气体流量计，将氮气流速设置为每小时 10 标准立方英尺。然后，微调气体流量计，以确保干燥室内的相对湿度始终低于 25%，由湿度计测量。

使用 K 型热电偶监测温度，手动调节水循环器温度，直到样品板达到 5 摄氏度进行实验。确保在样品沉积前达到所需的温度和相对湿度。在微量离心管中混合 0.25 μL 的 0.1 Molar THAP 溶液和 0.25 μL 所需的分析物。

涡旋样品 3 秒钟。然后，将样品离心 2 秒钟，以收集微量离心管底部的溶液。离心后，打开干燥室的门，用移液管小心地将 0.1 μL 溶液倒在样品板上。

立即关上门，等待样品液滴变干。当保持样品板温度低于周围环境时，液滴内再循环流的平均速度会显著增加，从而重新分配分子。样品沉积是决定数据质量和重现性的最关键步骤。

预混的样品溶液需要立即沉积在样品板上，以确保样品在受控条件下结晶。晾干后，打开门。干燥室。

然后，将水循环器温度设置为 25 摄氏度。一旦样品板温度恢复到 25 摄氏度，从干燥室中取出样品板。在放大五倍的立体显微镜下检查样品形态，并拍摄快照明场图像。

此时，将样品板插入 MALDI 质谱仪中。然后，进行成像质谱分析。从结果窗口显示的质量列表中选择一个特征质量峰，然后单击 2D 以绘制二维离子图像。

接下来，点击弹出窗口中的调整按钮，确定信号强度的上限和下限，提高图像分辨率，点击保存图片。观察离子图像并将其与先前采集的明场图像进行比较，以获得必要的样品区域。现在，单击结果窗口中显示的离子图像中的零点和裂纹区域，以微调要分析的区域。

单击 find edge（查找边缘）按钮以查找离子图像的最外层。在此之后，单击 deduct 将最外层的离子丰度信息保存在数据库中，并同时从离子图像中删除该层。重复上述步骤直到定义离子图像的中心后，单击并选中输出数据列表中的所有复选框，然后单击 export 以导出数据。

最后，使用电子表格软件打开导出的数据，计算每层的平均离子丰度，得到离子的空间分布信息。在麦芽三糖的明场和 MALDI 图像中，当以 25 摄氏度的样品板温度制备时，钠化形式的离子信号主要填充在样品区域的外围。通过将温度降低到 5 摄氏度，信号均匀地填充在整个样品区域，这表明在较低的样品板温度下制备样品可以显著重新分布分子并减少异质性。

质子化缓激肽片段离子图像显示出与钠化麦芽三糖相似的趋势。统计分析表明，与 25 摄氏度以下相比，在 5 摄氏度的样品板温度下获得的离子信号的异质性降低了 60% 到 80%。在钠化麦芽三糖的情况下，样品板温度为 25 摄氏度，中心的信号强度远低于温度为 5 摄氏度的信号强度。

当将样品板温度从 25 摄氏度降低到 5 摄氏度时，质子化缓激肽片段的变化较小。在尝试这种干燥方法时，需要仔细控制和监测干燥室中的温度和相对湿度。一旦掌握，如果作得当，用这种技术制备的样品可以在 30 分钟内完成。

经过开发，这项技术为 MALDI MS 领域的研究人员探索干燥液滴样品的定量分析铺平了道路。观看此视频后，您应该对如何制备用于 MALDI MS 分析的均相干燥液滴样品有很好的了解。