Name: 通过流式细胞仪大鼠肾脏巨噬细胞的表型特征 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: 学习使用流式细胞仪对大鼠肾脏驻留巨噬细胞进行表型分析和定量检测的详细实验方案。该方法可精确表征不同巨噬细胞亚群的蛋白标志物，为肾脏疾病研究提供可靠的细胞分析技术。

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本研究获得了来自FIS/FEDER（Miguel Servet项目：CP10/00479、PI13/00802和PI14/00883）、西班牙动脉粥样硬化学会、西班牙肾脏病学会以及Fundaciòn Renal Iñigo Alvarez de Toledo（FRIAT）对Juan Antonio Moreno的资助。Jesús Egido获得了FIS/FEDER基金PI14/00386和Instituto Reina Sofìa de Investigaciòn Nefrològica的资助。Melania Guerrero Hue获得了Fundaciòn Conchita Rabago的资助。Alfonso Rubio Navarro获得了Fundaciòn Renal Iñigo Alvarez de Toledo（FRIAT）的资助。

本方案已获得当地机构动物护理和使用委员会批准，符合欧洲议会指令2010/63/EU及国家指南53/2013的规定。
1. 试剂与溶液的配制
<ol>
	<li>在无菌条件下配制所有试剂和溶液，并在超净工作台内使用。将溶液保存在 4 °C。</li>
	<li>配制染色缓冲液（含 2% 胎牛血清（FBS）的 1×杜氏磷酸盐缓冲液）。</li>
	<li>通过将 0.5 mg 胶原酶加入每毫升生理盐水中来配制胶原酶溶液。</li>
	<li>配制氯胺酮/赛拉嗪麻醉溶液（2:1 v/v）。</li>
</ol>
2. 肾脏灌注与提取
<ol>
	<li>通过腹腔注射氯胺酮/赛拉嗪（75 mg/12 mg/kg 体重）对大鼠进行麻醉。轻轻夹捏一小褶皮肤，以检查动物是否已充分麻醉。随后，用兽用眼膏覆盖眼睛，防止麻醉期间眼睛干燥。注意：本实验使用4月龄的Wistar大鼠。</li>
	<li>待大鼠完全麻醉后，将其仰卧位放置于手术台上。</li>
	<li>用70%乙醇擦拭腹部。</li>
	<li>从耻骨至肋缘沿中线切开腹壁皮肤和腹膜，暴露胸膜腔和腹腔。</li>
	<li>通过腹主动脉注入生理盐水（0.9%），利用灌注系统灌注肾脏，直至肾脏内血液完全清除。在腹部水平剪断主动脉，以帮助血液排出。</li>
	<li>从肾门处（肾静脉、肾动脉和输尿管）切断，将双侧肾脏完整取出。去囊时，用手指轻压肾脏边缘，小心分离肾包膜11。</li>
	<li>将肾脏放入Hanks平衡盐溶液中。</li>
</ol>
3. 肾脏消化与细胞悬液制备
<ol>
	<li>用剪刀将半个肾脏剪成小块，并放入1.5 ml离心管中。 
	注意：以下所有浓度均按1个样本（半只大鼠肾脏）计算。</li>
	<li>加入1 ml胶原酶溶液，在37 °C孵育30分钟。每5分钟轻轻颠倒混匀一次，确保胶原酶溶液充分接触全部组织。</li>
	<li>收集溶液，借助推杆将液体通过40 µm滤网过滤，并用10 ml染色缓冲液重悬。</li>
	<li>以400 × g离心15分钟。</li>
	<li>将沉淀重悬于1 ml ACK（氯化铵-氯化钾）裂解缓冲液中。室温孵育1分30秒后，加入10 ml染色缓冲液终止反应。</li>
	<li>以400 × g离心10分钟。</li>
	<li>将沉淀重悬于适量染色缓冲液（1 ml）中，并使用30 µm滤网过滤细胞悬液。</li>
	<li>用台盼蓝染色法在血细胞计数板上计数细胞，取200万个细胞加入1.5 ml离心管中用于染色。</li>
</ol>
4. 细胞染色与流式细胞术分析
<ol>
	<li>将细胞在 100 × g 条件下离心 5 分钟。</li>
	<li>用 100 µl 大鼠血清（1:100 稀释）重悬沉淀，在 4 °C 下孵育 10 分钟以阻断 Fc 受体。</li>
	<li>加入 1 ml 染色缓冲液洗涤，然后在 100 × g 条件下离心 5 分钟。</li>
	<li>将用于细胞表面染色的抗体按每种条件加入 100 µl 染色缓冲液中混匀：CD45 APC-Cy7（1:100）、CD163 A647（4:100）以及用于检测活细胞的溶液（3:1,000）。</li>
	<li>用抗体混合液重悬细胞沉淀，在 4 °C 避光孵育 20 分钟。</li>
	<li>加入 1 ml 染色缓冲液洗涤，在 100 × g 条件下离心 5 分钟。重复此步骤一次。</li>
	<li>加入 600 µl 固定/破膜溶液，在 4 °C 避光孵育 20 分钟。</li>
	<li>用 1 ml 破膜/洗涤缓冲液洗涤两次，在 170 × g 条件下每次离心 5 分钟。</li>
	<li>将用于胞内染色的 CD68 FITC 抗体（35:1,000）加入每种条件的 100 µl 破膜/洗涤缓冲液中。</li>
	<li>用 CD68 抗体溶液重悬沉淀，在 4 °C 避光孵育 50 分钟。</li>
	<li>用 1 ml 破膜/洗涤缓冲液洗涤，在 170 × g 条件下离心 5 分钟。</li>
	<li>用 100 µl 破膜/洗涤缓冲液重悬沉淀，加入 CD86 PE 抗体（35:1,000），在 4 °C 避光孵育 20 分钟。</li>
	<li>加入 1 ml 破膜/洗涤缓冲液洗涤，在 100 × g 条件下离心 5 分钟。</li>
	<li>用 100 µl 破膜/洗涤缓冲液重悬沉淀，并转移至流式管中。</li>
	<li>通过流式细胞术分析样品。在侧向散射光/前向散射光（SSC/FSC）门控的活细胞中确定 CD45 染色情况。第二步，在 CD68+ 细胞中分析 CD86 和 CD163 的表达水平。</li>
</ol>

<ol><li>Gansevoort, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+kidney+disease+and+cardiovascular+risk%3A+epidemiology%2C+mechanisms%2C+and+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Chronic kidney disease and cardiovascular risk: epidemiology, mechanisms, and prevention.</a> Lancet. 382, 339-352 (2013).</li>
<li>Kon, V., Linton, M. F., Fazio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atherosclerosis+in+chronic+kidney+disease%3A+the+role+of+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Atherosclerosis in chronic kidney disease: the role of macrophages.</a> Nat. Rev. Nephrol. 7, 45-54 (2011).</li>
<li>Kim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+depletion+ameliorates+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron+Exp.+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Macrophage depletion ameliorates glycerol-induced acute kidney injury in mice.</a> Nephron Exp. Nephrol. 128, 21-29 (2014).</li>
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<li>Ortiz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translational+value+of+animal+models+of+kidney+failure%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Translational value of animal models of kidney failure.</a> Eur. J. Pharmacol. 759, 205-220 (2015).</li>
<li>Martina, M. N., Bandapalle, S., Rabb, H., Hamad, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+double+negative+alphabeta+T+cells+from+the%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of double negative alphabeta T cells from the.</a> J. Vis. Exp. , (2014).</li>
<li>Martin-Fernandez, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aldosterone+Induces+Renal+Fibrosis+and+Inflammatory+M1-Macrophage+Subtype+via+Mineralocorticoid+Receptor+in+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS.+One%22%5BJournal%5D)">Aldosterone Induces Renal Fibrosis and Inflammatory M1-Macrophage Subtype via Mineralocorticoid Receptor in Rats.</a> PLoS. One. 11, e0145946(2016).</li>
<li>Layoun, A., Samba, M., Santos, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+murine+peritoneal+macrophages+to+carry+out+gene+expression+analysis+upon+Toll-like+receptors+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of murine peritoneal macrophages to carry out gene expression analysis upon Toll-like receptors stimulation.</a> J. Vis. Exp. (e52749), (2015).</li>
<li>Komohara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+infiltration+and+its+prognostic+relevance+in+clear+cell+renal+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Macrophage infiltration and its prognostic relevance in clear cell renal cell carcinoma.</a> Cancer Sci. 102, 1424-1431 (2011).</li>
<li>Han, Y., Ma, F. Y., Tesch, G. H., Manthey, C. L., Nikolic-Paterson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+macrophages+in+the+fibrotic+phase+of+rat+crescentic+glomerulonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Role of macrophages in the fibrotic phase of rat crescentic glomerulonephritis.</a> Am. J. Physiol Renal Physiol. 304, F1043-F1053 (2013).</li>
<li>Ndisang, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+heme+oxygenase-adiponectin-atrial+natriuretic+peptide+axis+in+renal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Pharm.+Des%22%5BJournal%5D)">Role of the heme oxygenase-adiponectin-atrial natriuretic peptide axis in renal function.</a> Curr. Pharm. Des. 21, 4380-4391 (2015).</li>
<li>Blackbeard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+the+rat+spinal+microglial+response+to+peripheral+nerve+injury+as+revealed+by+immunohistochemical+image+analysis+and+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantification of the rat spinal microglial response to peripheral nerve injury as revealed by immunohistochemical image analysis and flow cytometry.</a> J. Neurosci. Methods. 164, 207-217 (2007).</li>
<li>Strobl, H., Scheinecker, C., Csmarits, B., Majdic, O., Knapp, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+analysis+of+intracellular+CD68+molecule+expression+in+normal+and+malignant+haemopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Haematol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric analysis of intracellular CD68 molecule expression in normal and malignant haemopoiesis.</a> Br. J. Haematol. 90, 774-782 (1995).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

巨噬细胞是一类异质性细胞，在包括肾脏疾病在内的多种炎症性疾病中发挥重要作用。近年来，人们对肾脏疾病中巨噬细胞亚群的特征日益关注，因为不同的巨噬细胞亚群在肾损伤的发展过程中发挥着不同的作用，这一点已在肾小球肾炎、糖尿病肾病和肾癌的研究中得到报道14-16。在急性肾损伤的早期阶段，主要以M1型巨噬细胞为主，促进肾小管坏死和炎症反应；而在后期阶段，则观察到M2型巨噬细胞比例升高，有助于炎症消退并参与组织重塑。在慢性肾脏病中，M1和M2型巨噬细胞可同时存在，尽管M1型可能占主导地位，从而加剧并持续导致肾脏的炎症性损伤。因此，深入认识巨噬细胞亚型在肾脏疾病中的病理生理作用具有重要意义。免疫组织化学研究难以可靠地确定巨噬细胞亚群的比例17。因此，有必要开发新的技术手段，以定量分析不同表型的巨噬细胞，并阐明这些细胞在肾脏炎症反应中的具体作用。
本文描述了一种通过流式细胞术测定大鼠肾脏巨噬细胞亚群数量及表型的实验方案。在本研究中，通过给予醛固酮建立大鼠肾脏损伤的炎症模型。在此模型中，我们观察到CD45表达升高+ 和 C68...

肾脏疾病是一个全球性的健康问题，其发病率不断上升，并与较高的发病率和死亡率相关1。参与肾脏损伤进展和发展的重要机制之一是炎症，主要由巨噬细胞引发。巨噬细胞在包括肾脏疾病在内的多种炎症性疾病中发挥关键作用2。因此，在急性肾损伤（AKI）或慢性肾脏病（CKD）患者肾组织活检中，已发现有大量浸润性巨噬细胞的存在3,4。近期研究表明，肾脏疾病的长期预后可能受巨噬细胞调控5,6。巨噬细胞可响应局部微环境而分化为不同表型，执行多样的生物学功能7。目前已有两种明确区分的巨噬细胞表型：经典活化的巨噬细胞（M1型巨噬细胞）和替代性活化的巨噬细胞（M2型）8。M1型巨噬细胞促进炎症反应，而M2型巨噬细胞具有抗炎作用，并参与组织修复9。因此，更深入地了解巨噬细胞的异质性，对于阐明其在肾脏病理过程中的调控机制和作用至关重要，并有助于开发新的治疗策略。
小鼠和大鼠模型已被广泛用于研究肾脏损伤中涉及的分子和细胞机制10。然而，在这些啮齿类动物中用于鉴定巨噬细胞表型的多种标志物之间存在显著差异。因此，一些在小鼠中使用的标志物（如 F4/80 或 Ly6C）并不适用于大鼠，这限制了研究结果在不同物种间的外推。此外，目前可用于描述大鼠巨噬细胞表型的标志物数量有限，这也解释了与小鼠相比，针对大鼠巨噬细胞异质性开展的研究较少。因此，有必要开发新的巨噬细胞亚群表征策略，以深入理解巨噬细胞在大鼠肾脏疾病模型中的作用。
本文描述了一种通过流式细胞术对大鼠肾脏巨噬细胞进行表型和定量分析的实验方案。该技术可进一步用于多种检测，包括细胞分选以及mRNA或蛋白质表达研究，从而深入表征巨噬细胞在肾脏疾病中的作用。

<table><tbody><tr><td>层流罩</td><td>更快</td><td></td><td>或同等设备</td></tr><tr><td>离心机</td><td>Hettich</td><td></td><td>或同等设备</td></tr><tr><td>流式细胞仪（FACSAria）</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>BioWest</td><td>S1820-500</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>LONZA</td><td>BE17-515Q</td><td></td></tr><tr><td>胶原酶</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>12/1/9001</td><td></td></tr><tr><td>ACK裂解缓冲液</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A10492-01</td><td></td></tr><tr><td>流式细胞术滤网</td><td>BD Biosciences</td><td>340626</td><td></td></tr><tr><td>Falcon细胞滤网</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>流式细胞术管</td><td>Falcon</td><td>352052</td><td>5 ml 聚苯乙烯圆底管</td></tr><tr><td>离心管</td><td>Corning centristar</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>水浴锅</td><td>Memmert GmbH + Co. KG</td><td>WNE 7</td><td>37 &amp;#176;C</td></tr><tr><td>固定/透化溶液或透化/洗涤缓冲液</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td></td></tr><tr><td>Rompum（赛拉嗪）</td><td>Bayer</td><td></td><td>或同等产品</td></tr><tr><td>Ketalar（氯胺酮）</td><td>Pfizer</td><td></td><td>或同等产品</td></tr><tr><td>Hanks&amp;rsquo;平衡盐溶液</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H8264-500ML</td><td></td></tr><tr><td>生理盐水溶液</td><td>Braun</td><td>622415</td><td></td></tr><tr><td>抗CD45抗体（克隆：OX-1）APC-Cy7</td><td>Biolegend</td><td>202216</td><td>稀释比例1:100</td></tr><tr><td>抗CD68抗体（克隆：ED1）FITC</td><td>Bio-RAD</td><td>MCA341F</td><td>稀释比例35:1,000</td></tr><tr><td>抗CD86抗体（克隆：24F）PE</td><td>Biolegend</td><td>200307</td><td>稀释比例35:1,000</td></tr><tr><td>抗CD163抗体（克隆：ED2）Alexa Fluor 647</td><td>Bio-RAD</td><td>MCA342R</td><td>稀释比例4:100</td></tr><tr><td>活/死细胞染料&amp;nbsp;</td><td>Molecular Probes</td><td>L34955</td><td>稀释比例3:1,000</td></tr></tbody></table>

通过流式细胞术对大鼠肾脏巨噬细胞进行表型表征

Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

越来越多的证据表明，炎症以及随之而来的巨噬细胞在肾脏疾病的发生和发展中发挥着重要作用。巨噬细胞是一类异质性细胞，已被证实参与肾脏损伤过程。巨噬细胞可分为两种不同表型：经典活化的巨噬细胞（M1型巨噬细胞），其可释放促炎性细胞因子并促进纤维化；以及替代性活化的巨噬细胞（M2型巨噬细胞），其与免疫调节和组织重塑功能相关。为了明确这些巨噬细胞表型在肾损伤中的作用，必须对它们进行区分和分析。然而，目前关于炎症性肾病模型中巨噬细胞亚型的表型和功能特征的研究尚少，尤其是在大鼠模型中。这一现状可能与大鼠中可用的巨噬细胞标志物有限有关，而小鼠则有更丰富的标志物资源。因此，亟需建立新的策略，以可靠地定量和表征浸润性巨噬细胞在肾脏中的含量。本文详细描述了一种用于大鼠肾脏组织消化及后续通过流式细胞术对肾脏巨噬细胞进行表型鉴定与定量分析的实验方案。简言之，将肾脏组织用胶原酶孵育消化后，通过在活细胞中同时检测CD45（白细胞共同抗原）和CD68（泛巨噬细胞标志物）来鉴定总巨噬细胞群体。随后进行表面标志物染色，包括CD86（M1标志物）和CD163（M2标志物）。实验中采用大鼠腹腔巨噬细胞作为流式细胞术检测巨噬细胞标志物的阳性对照。本方案具有较低的细胞死亡率，并可实现对多种胞内和细胞表面蛋白标志物的检测，从而避免了其他方法中常见的细胞完整性损失问题。此外，该方法所获得的细胞还可用于后续多种技术操作，包括细胞分选、mRNA或蛋白质表达研究等。

我们分析了与肾脏中浸润性巨噬细胞增多相关的肾损伤炎症实验模型中的巨噬细胞异质性。在该模型中，通过向Wistar大鼠饮用水中添加醛固酮（1 mg-1kg-1day）和盐（NaCl 1%）连续给药3周以诱导肾损伤，该方法此前已有报道12。
实验时间安排如图1所示。首先，采用机械法分离肾细胞，随后用胶原酶进行进一步的酶消化处理（图1A）。接着，裂解红细胞，并通过流式细胞术检测肾脏巨噬细胞。细胞与用于膜染色的CD45、CD86和CD163抗体以及用于胞内染色的CD68抗体共同孵育（图1B）。最后，根据图1C所示方案分析巨噬细胞群体的表型。
通...

本文描述了一种通过流式细胞术对大鼠肾脏中常驻巨噬细胞进行表型和定量分析的详细实验方案。所获得的染色细胞还可用于其他应用，包括细胞分选、基因表达分析或功能研究，从而增加实验模型中获取的信息量。

越来越多的证据表明，炎症以及随之而来的巨噬细胞在肾脏疾病的发生和发展过程中发挥着重要作用……

本实验的总体目标是通过流式细胞术对大鼠肾脏中固有的巨噬细胞进行定量和表征。该方法可回答流体动力学中的关键问题，例如不同类型的巨噬细胞在肾脏损伤中各自所起的作用。该技术的主要优势在于，它能够对表达不同蛋白标志物的肾脏细胞进行分析。本实验操作将由来自康普顿斯大学的 A.P.A.S.D. 学生 Elena Olivares 和来自的 A.P.A.S.D. 学生 Melania Guerrero 演示。进行肾脏灌注和取出时，首先捏住一小块皮肤，以确认大鼠已达到适当的镇静水平。用兽用眼膏覆盖眼睛。将动物仰卧位固定于手术台上。用70%乙醇浸湿腹部。接着，从耻骨至肋骨沿中线切开腹壁皮肤和腹膜，暴露胸腔和腹腔。使用灌注系统将0.9%生理盐水注入腹主动脉，以冲洗肾脏。在腹部切断主动脉，以帮助血液排出。当肾脏中的血液完全清除后，切断肾门结构。然后轻压每个肾脏边缘，小心地剥离肾包膜。将取出的肾脏转移至新鲜的 H.B.S.S. 溶液中。为制备单个肾脏细胞悬液，使用剪刀将一侧肾脏的一半组织剪成小碎片。将组织碎片转移至1.5 mL离心管中，并加入1 mL新配制的胶原酶溶液，在37°C下孵育30分钟。

phenotypic-characterization-macrophages-from-rat-kidney-flow

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

通过流式细胞仪大鼠肾脏巨噬细胞的表型特征

本文介绍了一种从大鼠肝细胞原代培养中获取巨噬细胞的新方法。该方法利用巨噬细胞在培养过程中的增殖特性，随后通过振荡培养瓶并利用巨噬细胞对塑料培养皿的特异性贴附能力进行纯化。该技术无需复杂设备和操作技能，即可高效地获得肝脏巨噬细胞。...

一种从成年肝细胞混合原代培养物中分离巨噬细胞的简单高效方法

本文描述了分离小鼠肺泡巨噬细胞（肺部固有先天免疫细胞）并检测其在与聚酐纳米颗粒共培养后活化反应的实验方案。...

收获小鼠肺泡巨噬细胞及评估聚酸酐纳米颗粒诱导的细胞活化

巨噬细胞是造血系统中具有可塑性的细胞，在保护性免疫和内环境稳态中发挥关键作用。在本报告中，我们描述了优化的 体外...

功能鉴定抑制移植物反应性免疫的调节性巨噬细胞

为了进行后续应用，需要可靠且高效的肾脏免疫细胞分离技术。该技术要求对少量肾脏免疫细胞进行表面抗体标记。本文介绍了一种简明的肾脏免疫细胞分离方法，该方法似乎能够实现这一目标。...

可靠且高效的肾脏免疫细胞提取方法

本方案通过流式细胞术分析成年小鼠中枢神经系统中的巨噬细胞亚群，有助于研究这些细胞表达的多种标志物。...

通过流式细胞术分析中枢神经系统中的小胶质细胞和单核细胞来源的巨噬细胞

本文介绍了一种通过从脂肪组织中分离免疫细胞，并随后使用流式细胞术进行分析，以检测脂肪组织中免疫细胞成分的方法。...

利用流式细胞术对人体脂肪组织中的免疫细胞进行表征

本研究展示了如何使用流式细胞术检测由 FcγR 激活引发的活性氧（ROS）产生。该方法可用于评估吞噬细胞在免疫复合物、调理微生物或直接 FcγR...

流式细胞术检测FcγR交联诱导的巨噬细胞ROS产生

本方案提供了一种将完整眼球消化为单细胞悬液的方法，用于多参数流式细胞术分析，以鉴定特定的眼部单核吞噬细胞群体，包括单核细胞、小胶质细胞、巨噬细胞和树突状细胞。...

小鼠全眼球消化用于单核吞噬细胞的多参数流式细胞术分析

本方案提供了一种高效的胶原酶消化方法，可在单次操作中从人内脏脂肪中分离出有活力的脂肪细胞和基质血管组分（SVF）细胞，包括从脂肪细胞中提取高质量RNA的方法，以及通过多种膜结合标志物染色，利用流式细胞术对SVF来源的巨噬细胞进行表型鉴定。...

从适合RNA分析和巨噬细胞表型鉴定的人类内脏脂肪组织中分离活的脂肪细胞和基质血管组分

本文报道了一种利用人CD59/中介溶血素细胞清除工具选择性清除肾巨噬细胞以研究其再生的实验方案。该方法也可用于研究肾脏、肝脏和脂肪组织中其他细胞群体的功能与再生。...

利用人CD59/中介溶血素细胞清除工具快速耗竭肾巨噬细胞

本研究描述了一种标准化的 体外...

大鼠巨噬细胞体外吞噬同种异体与异种红细胞的定量评估 In Vitro

学习使用流式细胞仪对大鼠肾脏驻留巨噬细胞进行表型分析和定量检测的详细实验方案。该方法可精确表征不同巨噬细胞亚群的蛋白标志物，为肾脏疾病研究提供可靠的细胞分析技术。

通过流式细胞术对大鼠肾脏巨噬细胞进行表型表征

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