Name: 在小型动物模型的动静脉（AV）循环研究血管生成和血管组织工程 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: 学习显微外科技术构建动静脉环路，用于研究血管生成与组织工程。该方法利用活体生物反应器生成带血管蒂的可移植组织，为个性化治疗提供新途径。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

我们感谢以下机构对我们的动静脉环路研究提供的支持：Staedtler基金会、Dr. Fritz Erler基金会、Else Kröner Fesenius基金会、Baxter Healthcare GmbH、德国研究基金会（DFG）、IZKF/ELAN/EFI/性别与多样性办公室、医学研究基金会、埃尔朗根-纽伦堡弗里德里希-亚历山大大学（FAU）、AO基金会、Manfred Roth基金会、Xue Hong、Hans Georg Geis基金会、德国学术交流中心（DAAD）以及伊拉克高等教育与科研部。我们感谢Stefan Fleischer、Marina Milde、Katrin Köhn和Ilse Arnold-Herberth提供的出色技术支持。

所有实验均经德国埃尔兰根-纽伦堡弗里德里希-亚历山大大学（FAU）动物护理委员会及德国中弗兰肯区政府批准。实验所用为雄性Lewis大鼠，体重为300 - 350 g。
1. 大鼠动静脉环模型
<ol>
	<li>植入手术步骤（图2）
	<ol>
		<li>用于麻醉时，使用一个连接好的特殊塑料箱 通过 将导管连接至异氟烷蒸发器，并用盖子封闭。打开供气，调节流量计至0.8–1.5 L/min。</li>
		<li>将大鼠放入诱导用塑料盒中并密封顶部。打开异氟烷挥发罐至5%。</li>
		<li>在麻醉诱导期间密切观察大鼠。3 - 4 分钟后，大鼠将进入麻醉状态。</li>
		<li>确认麻醉效果：翻正反射消失、眼睑反射消失、回缩反射消失、角膜反射阳性。</li>
		<li>将大鼠从盒子中取出，称重以计算药物剂量。在麻醉期间涂抹眼膏以防止角膜干燥。</li>
		<li>给予止痛药和抗生素（例如，皮下注射7.5 mg/kg恩诺沙星（enrofloxacin），静脉注射12.5 mg/kg曲马多（tramadol）和100 mg/kg美他咪唑（metamizole）。术中给予按体重调整剂量的晶体液例如，30 ml/kg，皮下注射。</li>
		<li>将大鼠置于37 °C的加热板上，仰卧位，在1 - 2%异氟烷吸入麻醉下进行操作 通过 口罩</li>
		<li>正确监测麻醉状态，若麻醉过浅（大鼠出现移动、对疼痛有反应、下颌肌张力存在、反射未消失（见1.1.4））、心率上升），应增加异氟烷浓度。注意避免异氟烷过量（角膜反射消失、心率过高、血氧饱和度下降）。使用专用于小动物的脉搏血氧仪监测大鼠的血氧饱和度（95 - 100%）和心率（250 - 450次/分钟）。术中持续监测大鼠体温（36 - 40 °C），必要时调节加热板温度。</li>
		<li>用电动剃须刀剃除后肢内侧的毛发，并用消毒剂对区域进行消毒。分开后肢，用胶带固定。</li>
		<li>将大鼠置于手术显微镜下，并用无菌巾覆盖大鼠。确保整个手术过程在无菌条件下进行。</li>
		<li>使用手术刀（10号）从左侧大腿上部膝关节至腹股沟处沿纵轴切开皮肤。</li>
		<li>使用解剖剪和显微镊逐层切开皮下组织和筋膜，每段长约3 cm，直至暴露股血管束，从腹股沟处的髂动脉至膝部股动脉分叉处。</li>
		<li>分离血管并使用外膜剪和显微镊去除外膜。</li>
		<li>使用电凝固法凝固侧支血管。用湿敷料覆盖手术区域。</li>
		<li>按照左侧所述方法（1.1.11 - 1.1.14）打开右侧皮肤。</li>
		<li>收获静脉移植物时，使用电凝法在距离远端和近端1 - 1.5 cm处结扎右侧股静脉。</li>
		<li>用显微镊子取出静脉移植物，使用灌注套管以肝素溶液（50 IU/ml，溶于0.9%氯化钠溶液）冲洗静脉移植物，随后将其转移至左侧大腿。用湿纱布覆盖右侧手术区域。</li>
		<li>在左侧腹股沟区域近端用微血管夹夹闭股静脉。在距离约2 cm、分支前的膝关节上方远端位置，通过电凝法凝固股静脉。</li>
		<li>吻合时，使用11-0缝线将静脉移植物近端与静脉近端行端对端吻合。采用约8针间断缝合。首先在12点和6点位置各放置第一针和第二针，然后在前侧两点之间再缝2至3针，随后在后侧两点之间也缝2至3针。</li>
		<li>以与股静脉相同的方法结扎股动脉（1.1.18）。确保血管环无扭曲。将静脉移植物的远端与动脉近端吻合，操作方法同股静脉所述（步骤1.1.19）。</li>
		<li>静脉注射25 IU肝素。再次确认循环管路无扭曲，移除夹子，观察循环管路约5分钟，检查有无渗漏及是否通畅。</li>
		<li>滴加罂粟碱（papaverine）例如， 4 mg/ml）以防止血管痉挛。若血管通畅，环状结构会扩张，并可观察到动脉搏动。</li>
		<li>用基质的第一半部分（约 500 µl）预填充植入室 （例如，含或不含细胞的水凝胶或骨基质）。将环植入植入室中。</li>
		<li>将基质的第二部分加入植入室，使总体积达到 1,000 µl。用腔室盖密封腔室。</li>
		<li>用不可吸收的6-0缝线将植入 chamber 固定在大腿上。用不可吸收的6-0缝线固定 chamber 盖。使用电凝止血以控制可能的出血。</li>
		<li>使用可吸收的4-0缝线缝合皮肤。用铝喷雾覆盖伤口。</li>
		<li>给予抗生素和镇痛药（例如， 7.5 mg/kg 皮下注射恩诺沙星，12.5 mg/kg 口服曲马多（p.o.）（通过饮水给药）持续 3–5 天，之后根据大鼠行为表现决定是否继续用药。</li>
		<li>关闭蒸发器，让大鼠吸入供气直至开始苏醒。</li>
		<li>将大鼠放入带有热支持的盒子中，并密切观察直至其完全恢复。</li>
		<li>在大鼠恢复足够的意识以维持胸卧位之前，不得使其无人看管。</li>
		<li>在完全恢复之前，不要将大鼠放回与其他动物同处的环境中。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>组织块培养法操作步骤
	<ol>
		<li>根据研究设计，在短期或长期植入后进行取出手术（示例请参见参考文献27-32）。按照步骤1.1.1–1.1.9对大鼠进行麻醉。</li>
		<li>使用手术刀（10号）切开腹部皮肤，用纱布将肠管移至一侧。用棉签暴露腹主动脉和后腔静脉。</li>
		<li>插管腹主动脉（例如，24号塑料导管）并用解剖剪剪断尾腔静脉。</li>
		<li>用含有 100 IU/ml 肝素的 0.9% 氯化钠溶液冲洗腹主动脉，直至流出液澄清。用 30 ml 灌注液对主动脉进行灌注（例如，对比剂或印度墨水）。</li>
		<li>在深度麻醉下，通过注射致死剂量的戊巴比妥钠、甲苄唑铵碘化物、盐酸四卡因注射液（0.1–0.2 ml/kg）处死大鼠。</li>
		<li>用不可吸收的4-0缝线结扎腹主动脉和尾腔静脉。</li>
		<li>用1-2个夹子闭合开放性伤口区域。将大鼠在4 °C下保存24小时（灌注液固化）。</li>
		<li>将大鼠仰卧放置，展开后肢并用胶带固定。</li>
		<li>用手术刀（10号）沿纵轴方向切开囊袋上方的皮肤。</li>
		<li>使用解剖剪和显微镊去除腔体及环状蒂上的结缔组织。用解剖剪在距离腔体开口1 cm处剪断环状蒂，并移除腔体。</li>
		<li>打开腔室盖子，用镊子小心将构建物从腔室内取出，并在室温下置于4%缓冲甲醛溶液中固定24小时。随后，将构建物用于3D显微计算机断层扫描，或进行石蜡包埋以供组织学分析30.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

十余年来，我们已成功将动静脉（AV）环路用于组织工程及血管生成研究。 体内 在小型动物模型中，我们证实该显微外科模型非常适用于不同组织的工程化构建，也可用于血管生成或抗血管生成研究。
该技术相对于现有/替代方法的重要性 
工程化组织或器官需要具备功能性的血管网络，以在移植到缺损部位后为其存活和成功整合提供所需的营养物质和氧气41几十年来，人们已开发出多种不同的预血管化策略，这些策略可根据以下方面进行区分： 体外 与 体内 和外在的 与 内在方法
支架可被制备成管状结构，并接种血管内皮细胞或祖细胞等血管细胞 体外42另一方面，对于 体内 预血管化，将支架植入高血管化区域，如皮下或肌肉组织21随后，这些外部血管化的构建物可被移植到缺损部位。然而，这些方法的缺点在于移植后无法与受体的血管进行显微外科连接。特别是对于大规...

人体内的大多数组织和器官都依赖于功能性的血管网络，以供应营养物质、进行气体交换并清除代谢废物。由于局部或全身性血管问题导致该系统功能障碍，可能引发多种严重疾病。此外，在组织工程或再生医学等研究领域，人工构建的组织或移植器官中若缺乏功能性血管网络，将无法实现成功的临床应用。
几十年来，研究人员一直在探究血管系统生长的确切机制，以更深入地理解病理状态，从而寻找新的治疗干预手段，并为血管疾病提供更有效的预防措施。第一步通常是通过研究细胞间相互作用，或分子对血管系统细胞的影响等基本过程 体外 二维或三维实验。传统的二维模型易于操作，已得到广泛应用，并极大地促进了对这些过程的深入理解。1980年，Folkman首次 等. 报道 体外 在明胶包被的培养板上接种毛细血管内皮细胞以诱导血管生成1这立即引发了大量关于内皮细胞管形成实验的二维血管生成研究相继发表。2，迁移实验3 不同类型细胞的共培养4以及其他方法。这些检测方法至今仍被使用，并被公认为标准方法 体外 方法
然而，这种实验设置并不总是适用于对……的研究 体内 细胞行为，因为大多数细胞类型需要三维环境才能形成相关的生理组织结构5可以证明，三维基质的结构对毛细血管形态发生具有决定性作用6 以及细胞-细胞外基质（ECM）相互作用和三维培养条件可调控肿瘤血管生成中关键因子的表达73D基质可提供复杂的力学信号，能够结合效应蛋白并建立组织尺度的溶质浓度梯度。此外，它被认为是模拟 体内 复杂组织中的形态发生与重塑步骤5在这些系统中，可以同时研究血管生成和血管发生。其中，血管生成是指从已有的血管中萌发出毛细血管的过程8，血管发生指的是 从头合成 通过内皮细胞或其前体细胞形成血管9,10血管成熟过程被称为“动脉生成”（arteriogenesis） 通过 平滑肌细胞的募集11典型的血管生成 体外 模型包括内皮细胞从已接种于凝胶表面的单层细胞中出芽，或从嵌入凝胶中的微球表面的单层细胞中出芽，或通过构建内皮细胞球体实现出芽12在血管生成模型中，单个内皮细胞被包埋于三维凝胶中。它们与邻近的内皮细胞相互作用，形成血管样结构和网络。 从头合成 通常与支持细胞联合使用12.
然而，即使是复杂的3D 体外 模型无法模拟 体内 鉴于存在大量的细胞间及细胞与细胞外基质间的相互作用，无法完全设定所有参数13. 高度的物质 体外 活性并不自动表现出相同的效果 体内 和 反之亦然14为了对血管化过程进行全面分析，迫切需要开发 体内 更佳模拟体内情况的模型。多种多样的 体内 文献中描述了多种血管生成检测方法，包括鸡胚尿囊绒毛膜检测（CAM）、斑马鱼模型、角膜血管生成检测、背部气囊模型、背部皮肤折叠室以及皮下肿瘤模型14然而，这些检测方法通常存在一些局限性，例如在CAM检测中细胞形态快速变化、难以区分新生毛细血管与已存在的毛细血管，或在角膜血管生成检测中可用空间有限等问题。15此外，还使用了非哺乳动物系统（例如斑马鱼模型16），这会导致异种移植中的问题17在皮下肿瘤模型中，由于邻近组织对血管化过程有显著贡献，因此无法单独分析仅源自肿瘤本身的血管生成。此外，周围组织可能在塑造肿瘤微环境方面发挥决定性作用。18.
不仅在研究血管生成或血管发生时，迫切需要一种标准化且特征明确的 体内 模型，也为组织工程和再生医学中不同的血管化策略研究提供了平台。如今，复杂人工器官或组织的构建已成为可能 体外 和 体内3D生物打印提供了一种按需制造复杂三维功能性活体组织的 fabrication 技术19此外，生物反应器还可用于组织的构建20 或者甚至可以将生物体自身用作生物反应器21然而，人工生成组织成功应用的主要障碍在于工程化构建物内部缺乏血管化。移植后与宿主血管系统的即时连接是其存活的关键前提，尤其对于大规模的人工组织或器官而言更是如此。
不同 体外 或 体内 预先血管化策略被开发用于在植入前于构建物中建立功能性微血管网络22支架的植入 体外 将预先构建的工程化毛细血管移植到小鼠背部皮肤后，可在一天内实现小鼠血管系统的快速吻合23相比之下，由人骨髓间充质干细胞和人脐静脉内皮细胞组成的球状共培养体在形成三维前血管网络后进一步发育 体内 植入。然而，与宿主血管系统的吻合有限24最重要的是，在血管化较差的缺损区域（如坏死区或经放射治疗的区域），这种所谓的外源性血管化——即血管从周围组织长入支架的过程——常常失败。而内源性血管化则是以血管轴作为新生毛细血管向支架内出芽的来源25采用轴向血管化方法，可将工程化组织以其血管轴进行移植，并在受体部位与局部血管相连。移植后立即由氧气和营养物质充分供给，为组织的最佳整合创造了有利条件。
由于可用于研究的模型有限 体内 血管生成以及鉴于构建轴向血管化组织日益重要的意义，我们进一步改进了Erol和Spira的显微外科技术，以在动物模型中构建动静脉（AV）循环回路26使用完全封闭的植入室使得该方法非常适合研究血管形成 &#34;受控的&#34;，特征明确 体内 条件（图1该模型不仅适用于血管生成的研究，也非常适合用于组织工程中支架的轴向血管化。

<table><tbody><tr><td>0.9% 氯化钠</td><td>Berlin-Chemie AG</td><td>34592508</td><td></td></tr><tr><td>11-0 Ethilon / 聚酰胺 6/6</td><td>Ethicon</td><td>EH7438G</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Vicryl / 聚乙醇酸交酯共聚物 910</td><td>Ethicon</td><td>V392H</td><td></td></tr><tr><td>6-0 Prolene / 聚丙烯</td><td>Ethicon</td><td>8695H</td><td></td></tr><tr><td>铝喷雾</td><td>Pharma Partner Vertriebs-GmbH</td><td>1020</td><td></td></tr><tr><td>消毒剂&amp;nbsp;</td><td>BODE Chemie GmbH&amp;nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>导管&amp;nbsp;</td><td>B Braun Meslungen AG</td><td>4251612-02</td><td></td></tr><tr><td>造影剂</td><td>Flowtech</td><td>&amp;nbsp;MV-122</td><td></td></tr><tr><td>戊巴比妥、甲苯磺酸甲苯磺隆、盐酸四卡因注射液&amp;nbsp;</td><td>Intervet International GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>浓墨（印度墨水）</td><td>Lefranc &amp;amp; Bourgeois</td><td></td><td></td></tr><tr><td>恩诺沙星</td><td>Bayer AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>眼膏</td><td>Bayer AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4% 甲醛</td><td>Carl Roth GmbH &amp;amp; Co. KG</td><td>P087.4</td><td></td></tr><tr><td>肝素</td><td>Ratiopharm GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>异氟烷&amp;nbsp;</td><td>Abbott Laboratories</td><td>6055482</td><td></td></tr><tr><td>Lewis 大鼠，雄性</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>安乃近钠&amp;nbsp;</td><td>Ratiopharm GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>罂粟碱 / Paveron N</td><td>Linden Arzneimittel-Vertrieb-GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>曲马多 / Tramal</td><td>Gr&amp;uuml;nenthal GmbH</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

小型动物模型中的动静脉环（av环）用于研究血管生成与带血管组织工程

The Arteriovenous (AV) Loop in a Small Animal Model to Study Angiogenesis and Vascularized Tissue Engineering

功能性血管网络是人体几乎所有组织和器官存活与生长的前提条件。此外，在癌症等病理情况下，血管化在疾病进展中起着主导作用。因此，迫切需要一种标准化且特征明确的体内模型，以阐明新生血管形成的机制，并为组织工程和再生医学开发不同的血管化策略。
我们描述了一种用于小型动物模型的显微外科方法，该模型可诱导形成由静脉和动脉构成的血管轴，二者通过动静脉（AV）吻合形成AV环路。随后将该AV环路转移至封闭式植入腔室中，以构建一个独立的微环境。 体内 仅通过血管轴与活体生物相连。利用三维成像技术（MRI、micro-CT）和免疫组织化学方法，可随时间推移对新生血管进行可视化观察。通过植入不同细胞、生长因子和基质，可在高度可控的环境中分析其在血管网络形成中的功能，且不受周围环境干扰。 
除了血管生成和抗血管生成研究外，动静脉（AV）袢模型也非常适用于构建带血管化的组织。经过一定的预血管化时间后，所生成的组织可被移植至缺损部位，并通过显微外科技术与局部血管相连，从而确保工程化组织获得即时的血液供应和有效整合。通过改变支架材料、细胞类型、生长因子以及腔室结构，可以生成多种不同类型的组织，进而根据每位患者的具体需求进行个性化定制。

组织工程 
为实现骨组织工程目的，多种不同的骨替代材料被植入小型动物大鼠的动静脉袢（AV loop）模型中27,28,33,34。通过三维显微计算机断层扫描（micro-CT）可清晰显示血管化情况（图3A）。在植入加工后的牛松质骨（PBCB）支架材料时，动静脉袢组的血管化程度显著高于无血管化组。在植入腔内，血管网络持续生长并逐渐成熟，历时8周。在第4至第8周期间，观察到血管化组织持续向构建物中心生长，而在非血管化组中则未见此类增长33。将PBCB支架在动静脉袢模型中预先血管化6周后，所接种的成骨细胞存活率显著优于对照组的成骨细胞。与对照组相比，在植入成骨细胞的动静脉袢组中可检测到骨特异性基因的表达28。此外，另一种支架材料——烧结生物活性玻璃联合纤维蛋白凝胶——也被植入大鼠的动静脉袢中。3周后，micro-CT与组织学分析均证实已形成致密的新生血管网络27。
<p class="jove_content...

我们描述了一种显微外科手术方法，用于构建动静脉（AV）回路，作为血管化研究的模型 体内 在隔离且特征明确的环境中进行研究。该模型不仅适用于血管生成的研究，还特别适合用于构建具有轴向血管化且可移植的组织。

小型动物模型中的动静脉环（AV环）用于研究血管生成与带血管组织工程

功能性血管网络是人体几乎所有组织和器官存活与生长的先决条件。此外，在……

该显微外科技术的总体目标是构建动静脉环路，用于工程化轴向血管化且可移植的组织，并在体内外隔离且特征明确的环境中分析血管化过程。通过该方法，我们可以利用患者自身机体作为活体生物反应器，生成各类具有轴向血管化的组织，以满足个体化患者的特定需求。该技术的主要优势在于，所生成的组织可携带其自身的血管通路进行移植，并在受体部位与局部血管相连，从而立即获得氧气和营养物质的供应。除了组织工程学研究外，该方法还可用于深入了解活体生物中的血管狭窄过程。它也可应用于病理状况，例如癌症血管生成。通常，初次接触该方法的研究者会因手术的高度复杂性而面临困难，例如亚毫米级血管的显微吻合操作。当我们面对具有大面积组织缺损的临床病例时，首次提出了该方法的想法，这些病例需要移植非同源性血管化组织，从而造成显著的供区移动力。确认麻醉适当后，称量大鼠体重以计算药物剂量。随后涂抹眼膏，防止麻醉期间眼睛干燥。给予镇痛药和抗生素后，将大鼠置于加热垫上，并持续给予异氟烷。随后通过脚趾夹捏试验重新确认麻醉深度。如果条件允许，还可使用脉搏血氧仪检测大鼠的麻醉水平。接下来，剃除后肢内侧的毛发，然后使用聚维酮碘和酒精交替擦拭手术区域进行消毒。随后，将后肢展开，并用胶带固定。最后，将大鼠置于手术显微镜下并进行铺巾。采用无菌操作进行手术。使用手术刀在左侧大腿中部从膝上至腹股沟做一纵向切口，切开皮肤。接下来，使用解剖剪和显微镊子，逐层剪开长约三厘米的皮下组织和筋膜。操作至暴露从腹股沟区骨盆动脉到膝部的股血管束时停止。随后，使用去脂组织剪和显微镊子分离血管，并去除周围的去脂组织。根据需要，使用电凝法凝固侧支血管。完成后，用湿敷料覆盖手术区域，并在大鼠右侧重复相同操作。待双侧操作对称完成后，开始采集静脉移植物。首先，使用电凝法结扎右侧股静脉的近端和远端，以获取一段长约1至1.5厘米的静脉移植物。接着，用显微镊子取下静脉移植物。为扩张静脉移植物的开口，使用血管扩张器。然后，使用灌注套管以肝素溶液冲洗人工血管移植物。将去脂后的移植物转移至左侧大腿，并用湿敷料覆盖右侧术区。接下来，使用微血管夹在左侧腹股沟区域近端结扎股静脉。然后在分支前的膝关节上方远端结扎股静脉。进行吻合时，使用11-0缝线以端对端技术将静脉移植物的近端与静脉的近端连接。首先在12点和6点位置放置前两针缝线。然后，在前侧的这两个点之间再缝合两到三针，接着在后侧也缝合两到三针。吻合环状血管是本方案中最关键的步骤。必须尽可能准确地进行缝合，以降低环状血管发生风险并确保其闭合。接下来，使用微血管夹结扎股动脉，并采用电凝法，类似于结扎股静脉的操作。在继续操作前，务必确认环状血管无扭曲。然后，使用与之前相同的缝合技术将静脉移植物的远端与动脉的近端进行吻合。完成第二次吻合后，静脉注射25 IU肝素。现在，再次检查确保血管环路无扭曲，随后移除血管夹。观察血管环约五分钟，检查是否有渗漏及是否通畅。如果通畅，血管环会扩张，并可见动脉搏动。观察期间，向血管滴加罂粟碱以防止血管痉挛。接下来，用基质混合物的一半（约0.5毫升）预先填充植入室。然后将环状物植入植入室中。用两块纤维蛋白凝块封闭植入室入口，并用剩余的基质混合物填充植入室，总体积为1毫升。现在，在大腿部位放置植入室，用盖子密封植入室，并使用不可吸收的6-0缝线固定盖子。然后，再用另一条不可吸收的6-0缝线将植入室固定在大腿上。使用电凝止血。最后，使用可吸收的4-0缝线缝合皮肤，并用铝喷雾覆盖伤口。为骨组织工程目的，在小型动物大鼠动静脉环（A-V loop）模型中植入了多种不同的骨替代材料。通过三维显微计算机断层扫描观察血管化情况。将加工过的牛松质骨基质预血管化六周后，显著提高了注射的成骨细胞的存活率。在植入后的不同时间点获取环状样本，进行切片和染色。例如，苏木精和伊红染色显示，使用β-磷酸三钙-羟基磷灰石骨替代材料联合间充质干细胞可在六周内形成大量血管连接。一旦掌握，该技术若操作得当，可在五到六小时内完成。通过该方法，可植入多种不同的细胞、因子或抗体，以研究多种疾病状态。该技术也可应用于大型动物绵羊的静脉回路模型。因此，该方法可使研究人员大规模生成具有临床相关数量的血管化组织。该模型可能为研究病理条件下的血管化过程提供机会。例如，可利用该模型探究不同生长因子和细胞在肿瘤血管网络形成过程中的作用。

the-arteriovenous-av-loop-small-animal-model-to-study-angiogenesis

Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

在小型动物模型的动静脉（AV）循环研究血管生成和血管组织工程

新生小鼠视网膜为血管生成提供了一个特征明确的生理学模型，可在体内环境中研究不同基因或药物对血管生成的调控作用。准确可视化血管丛的免疫荧光染色对于此类研究的成功至关重要。...

对新生小鼠视网膜进行整体免疫荧光染色以研究血管生成 在体内的

血管化是实现成功组织工程的关键因素。因此，需要可靠的技术来评估组织构建物中血管网络的形成。本文介绍了一种简单且经济有效的方法，用于可视化并定量分析血管化 体内.

用于评估生物材料血管化的全层皮肤缺损模型 体内

本文介绍了一种结合临床相关吻合构型的动静脉瘘（AVF）失败的小鼠模型。该模型可用于研究其病理生理机制，并测试潜在的治疗干预措施。...

一种新型的小鼠动静脉瘘衰竭模型：手术步骤详解

本指南介绍如何在组织工程腔室内利用显微外科动静脉环或贯穿式血管蒂结构构建体内血管化组织。所生成的血管化组织可用于器官再生、组织缺损修复，以及药物筛选和疾病模型研究。...

通过内在血管化进行组织工程 在体 内 组织工程室

血管生成涉及多种细胞和多系统的相互作用，需要在生理相关的环境中进行研究。本研究的目的是展示大鼠肠系膜培养模型在血管生成过程中对完整的微血管网络进行延时比较的能力。...

一个 离体 延时成像培养大鼠肠系膜微血管网络的方法

目前，所有类型的带血管复合组织异体移植均依赖于长期免疫抑制，而对于非生命攸关的适应证，这种治疗难以持续支持。我们提出一种新的猪胫骨VCA模型，可用于研究骨组织VCA，并展示如何通过手术诱导血管生成来维持骨组织活性，而无需长期免疫调节。...

猪胫骨异体移植中的手术诱导血管生成：一种新的大型动物骨血管化复合组织异体移植模型

我们提出一种用于分离脂肪组织来源的微血管片段的方案，这些微血管片段是极具前景的血管化单元。它们可被快速分离，且无需 体外...

分离小鼠脂肪组织来源的微血管片段作为组织工程中的血管化单元

本研究展示了一种评估血管内皮干细胞（VESCs）增殖、分化及成血管潜能的新方法，通过乳腺脂肪垫移植后进行整体组织制备，以实现显微观察。采用谱系示踪策略以研究VESCs的行为 体内...

一种新型乳腺脂肪垫移植技术用于可视化血管内皮干细胞的血管生成

该实验利用小鼠胚胎干细胞分化形成的类胚体，将其培养在三维胶原凝胶中，以在体外分析调控出芽型血管生成的生物学过程。in...

体外 利用小鼠胚胎干细胞进行血管生成的三维出芽实验，用于血管疾病建模与药物筛选

本方案介绍了一种采用改良无接触技术在兔子体内建立动静脉瘘的方法。该技术包括颈总动脉与颈外静脉之间的侧侧吻合，且不分离静脉周围组织，也不切断动脉。...

一种改良的兔动静脉瘘构建技术

血管新生是发育和疾病中的基本过程，涉及复杂的分子和力学机制。本文介绍一种多功能的2.5D ex vivo...

2.5D 模型 离体 活体组织中出芽式血管生成的力学表征

学习显微外科技术构建动静脉环路，用于研究血管生成与组织工程。该方法利用活体生物反应器生成带血管蒂的可移植组织，为个性化治疗提供新途径。

小型动物模型中的动静脉环（AV环）用于研究血管生成与带血管组织工程

探索更多视频