Name: 在电化学疗法的操作程序在肿瘤治疗中的狗和猫 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-10-24T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 32 s
Description: 学习电化学疗法治疗犬猫皮肤及皮下实体肿瘤的操作方法。该技术通过电穿孔增强博来霉素和顺铂的细胞摄取，实现肿瘤显著缩小且副作用极小，为兽医肿瘤学提供简单有效的局部治疗方案。

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作者感谢斯洛文尼亚研究署通过国家预算提供的财政支持（项目编号 P3-0003，项目编号 J3-6796）。本研究在EBAM欧洲关联实验室（LEA）的框架内开展。本文是COST行动TD1104网络合作成果的一部分。我们谨向Alenka Seliskar、Mojca Juvan（兽医学院，外科与小型动物诊所）以及Jakob Konda（斯洛文尼亚卢布尔雅那肿瘤研究所）致以诚挚谢意，感谢他们提供的所有宝贵帮助。

本方案已获得农业、林业和食品部伦理委员会的批准，并遵循其指导方针。该方案已在80多只犬和20只猫上得到验证。
注意：电化学治疗（ECT）包括给予顺铂或博来霉素，并将肿瘤结节暴露于电脉冲中。
1. 患者选择
注意：患者选择可使临床医生判断该患者是否适合接受此治疗并从中获益。
<ol>
	<li>评估患者的病史（包括年龄、品种、性别等一般资料，是否存在并发疾病、肿瘤类型、肿瘤随时间的发展情况、既往治疗及其效果、复发情况及复发速度、主人对治疗成功率的期望）。</li>
	<li>对患者进行体格检查
	<ol>
		<li>详细评估肿瘤，以进行可能的临床鉴别诊断，并实施细针穿刺进行细胞学评估，必要时进行组织活检以进行组织病理学评估，从而确定治疗范围：若为潜在侵袭性肿瘤，则需治疗广泛切缘（根据该类型肿瘤其他治疗方法的推荐标准决定切缘大小，例如，肥大细胞瘤 2r ≤ 1 cm 时，应治疗 1 cm 的切缘；r 表示半径）。</li>
		<li>评估结节的数量和大小，以制定治疗方案。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>全身检查
	<ol>
		<li>实施全面的全身检查，以完成疾病分期并核查以下内容：
		<ol>
			<li>是否存在可能妨碍治疗的其他并发疾病；患者是否有慢性感染史（依据特定地区的流行病学情况）或免疫介导性疾病，这些可能引起血液学或凝血功能改变（需进行特异性检测）；动物是否能够耐受一系列深度镇静和/或全身麻醉；患者是否对顺铂（标准剂量为 60–70 mg/m2 体表面积 / 21 天）或博来霉素过敏，或是否已接受累计剂量超过 400,000 IU/m2 的博来霉素。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>采用影像学诊断技术（胸部X线检查和腹部超声检查），根据肿瘤类型排查可能存在的转移灶。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 实验室分析
<ol>
	<li>血液检查
	<ol>
		<li>进行完整的血液学分析，并结合生化检查项目，包括血尿素氮（BUN）、肌酐、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（AF）和钙，以排除晚期慢性肾病和肝病以及可能最常见的副肿瘤综合征，从而确定临床分期，这对预后具有影响。</li>
		<li>进行额外的特异性血液分析：
		<ol>
			<li>如果患者正在服用可能影响凝血功能的药物，应检查凝血功能谱。</li>
			<li>若采用侵入性治疗（如针电极），应检查血小板数量；血小板数量应&#62;100，若血小板数量&#60;100，则凝血功能谱（PT、APTT、纤维蛋白原、D-二聚体）必须正常。</li>
			<li>根据肿瘤疾病类型及患者临床状况，在特定情况下检查总蛋白、白蛋白、磷、钠（Na）、钾（K）、氯（Cl）和脂肪酶浓度。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>肿瘤组织病理学分析
	<ol>
		<li>若此前已进行细胞学诊断，则无需进行组织学分析。但对于某些组织学分级是关键预后因素的肿瘤类型（例如，肥大细胞瘤），应进行苏木精-伊红染色16。 
		注：可在电化学治疗（ECT）前于同一次就诊时进行活检（切开或&#34;穿刺&#34;）。无论如何，明确诊断肿瘤类型均为良好的临床实践。 
		注：在全面评估病例后，需与动物主人进行充分讨论和说明。应向主人解释什么是电化学治疗（ECT），以及在临床效果方面可能获得的预期结果。与主人讨论治疗方案：在全身麻醉或深度镇静下进行的ECT治疗次数、治疗总时长、治疗费用以及复发的可能性。若患者符合参与ECT临床试验的条件，需获得主人的书面知情同意。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 治疗方式的选择
注意：犬的电化学治疗使用顺铂和博来霉素。猫的电化学治疗仅使用博来霉素，因为顺铂在猫中属于禁忌。
<ol>
	<li>每个肿瘤应单独处理。确定每个结节的位置和大小，以及结节的数量，以制定治疗方案。</li>
	<li>使用公式 V = ab²π/6 计算肿瘤结节的体积（&#34;a&#34; 为肿瘤结节的较大直径，&#34;b&#34; 为与 &#34;a&#34; 垂直的肿瘤结节直径），或使用公式 V = abcπ/6（&#34;a&#34;、&#34;b&#34; 和 &#34;c&#34; 为肿瘤结节的三个相互垂直的直径）。</li>
</ol>
4. 手术模式的选择
<ol>
	<li>电极的选择 
	注意：选择最佳的电极类型非常重要，因为电极构型会影响组织中电场的分布。使用两种类型的电极：板状电极和针状电极。板状电极由平行的不锈钢板组成，电极之间的内侧距离取决于肿瘤的大小以及电脉冲发生器的容量。通常电极间距为6–8 mm。针状电极可排列成行（平行阵列）或六边形几何结构。六边形电极具有一个中心针和围绕其呈环形排列的6个针。脉冲在环形阵列的电极之间以及它们与中心针之间施加。每对电极之间在两个方向上均施加脉冲。根据肿瘤结节的深度选择电极类型，并确保在整个目标治疗区域实现适当的电穿孔。根据特定靶组织选择电极。通常，两种类型的电极均可用于治疗。</li>
	<li>顺铂或博来霉素的选择与配制 
	注意：电化学治疗（ECT）包括瘤内注射顺铂或博来霉素，或静脉注射博来霉素，随后对肿瘤结节施加电脉冲。
	<ol>
		<li>选择合适的细胞毒药物及其给药途径。</li>
		<li>若顺铂（顺式-二氨二氯铂II）为粉末状，用蒸馏水溶解至浓度为1 mg/ml（否则可使用药用制剂溶液）。顺铂采用瘤内注射。</li>
		<li>将博来霉素溶解于生理盐水中，浓度为3 mg/ml，并进行瘤内或静脉注射。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>麻醉 
	注意：根据操作模式（表1），可采用深度镇静或全身麻醉。
	<ol>
		<li>根据美国麻醉医师协会（ASA）的体格状态分级标准以及可能存在的副肿瘤综合征情况，对患者进行评估。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>深度镇静
	<ol>
		<li>在犬中使用美托咪定（0.08 mg/kg），或联合使用美托咪定（0.025 mg/kg）与酒石酸布托啡诺（0.1 mg/kg）；或遵循特定医院的深度镇静标准操作流程。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>全身麻醉
	<ol>
		<li>以乙酰丙嗪（0.02 mg/kg）和美沙酮（2 mg/kg）进行麻醉前给药。</li>
		<li>30分钟后，使用硫喷妥钠（5 mg/kg）或丙泊酚（1 mg/kg）诱导全身麻醉。</li>
		<li>插入气管插管，并通过T型麻醉回路以氧气输送异氟烷维持麻醉。</li>
		<li>麻醉期间使用乳酸林格液进行液体支持治疗，输注速率为10 ml/kg/hr，并使用单次剂量的非甾体类镇痛药（例如，卡洛芬 2–4 mg/kg）进行镇痛。</li>
		<li>使用眼膏防止麻醉期间角膜干燥。治疗后密切监护患者，直至其恢复足够的意识以维持胸卧位。患者应在诊所留观约2至4小时。 
		注意：也可遵循特定医院的全身麻醉标准操作流程。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>操作环境 
	注意：操作人员为经过培训的电化学治疗（ECT）操作者（DVM）、麻醉师及助手。
	<ol>
		<li>当在深度镇静下进行ECT时，可使用任何急救室；当需要全身麻醉时，可使用允许全身麻醉的任何手术室。</li>
		<li>根据麻醉操作规程，配备镇静和/或全身麻醉所需的所有设备。</li>
		<li>关于ECT操作，请参见材料清单中的所有必需材料。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>操作者及周围人员的防护 
	注意：抗肿瘤药物以液滴形式接触皮肤极少引起急性问题。顺铂和博来霉素不会通过完整的皮肤吸收。顺铂可能仅引起刺激。在注射质地较硬的结节或肿瘤时，可能发生顺铂或博来霉素泄漏。如发生针刺伤，应立即用大量水冲洗，并按照标准医疗实践处理伤口。
	<ol>
		<li>操作者及周围助手应佩戴口罩和手套进行防护。若皮肤接触顺铂或博来霉素溶液，应立即并大量用水冲洗。</li>
		<li>根据符合当地抗癌药物使用法规的质量保障计划，建立生物安全措施（如有）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>电脉冲发生器 
	注意：电脉冲的施加可通过电脉冲发生器完成。通常，该设备为带有集成软件和触摸屏界面的方波脉冲发生器，用于选择预设的电脉冲参数。设备配备带有脉冲激活按钮的手持式电极夹，通过导线连接至发生器。电脉冲的递送也可通过脚踏开关控制。电脉冲发生器应符合欧盟标准：2006/95/CE（2006年12月12日发布），涉及特定电压范围内的电子设备；2004/108/CE（2004年12月15日发布），涉及电磁兼容性；并应符合美国食品药品监督管理局（FDA）的法规要求。</li>
	<li>电脉冲施加操作步骤 
	注意：电脉冲的施加应在瘤内注射顺铂或博来霉素，或静脉注射博来霉素后进行。瘤内给药时应缓慢注射细胞毒药物，以防止泄漏。静脉给药时，细胞毒药物应以持续约30秒的推注方式给予。使用水性凝胶以确保皮肤与电极（无论是板状还是针状）之间良好接触，并减少电场分布的不均匀性。所用凝胶的电导率应在0.5至1 S/m之间17,18。本实验所用凝胶的电导率为0.5 S/m。板状电极应放置于肿瘤两侧，使其完全位于两电极之间。此外，为实现更佳的电场分布，应在两个相互垂直的方向上各施加一次电脉冲。若肿瘤尺寸大于电极间距，应从肿瘤边缘（包括安全边缘）开始施加电极，并逐步向肿瘤中心推进。使用针状电极时，应注意确保所有针头均插入组织中，以实现适当的电场分布。无需使用凝胶。其余操作步骤与板状电极相同。
	<ol>
		<li>在电脉冲施加区域剃除皮肤毛发</li>
		<li>给予顺铂或博来霉素。若细胞毒药物为静脉注射，等待8分钟后开始电脉冲递送，电脉冲递送的时间窗口为20分钟。若细胞毒药物为瘤内注射，则应在注射后立即（1分钟内）开始电脉冲施加。</li>
		<li>在施加电脉冲前，将水性凝胶涂抹于已剃毛的皮肤表面。</li>
		<li>对于板状电极，使用以下脉冲参数：脉冲持续时间100 µsec，电压与电极间距比值为1,300 V/cm，频率为1 Hz或5 kHz。每次施加8个单相电脉冲，分为两组，每组4个脉冲，间隔1秒，在两个相互垂直的方向上进行。</li>
		<li>对于成行排列的针状电极，使用以下脉冲参数：脉冲持续时间100 µsec，电压与电极间距比值为1,000 V/cm，频率为1或5 kHz。每次单相电脉冲施加包含8个脉冲。</li>
		<li>对于六边形排列的针状电极，使用以下脉冲参数：脉冲持续时间100 μsec；六边形电极的固定电压为730 V（当电极间距为7 mm时，对应1,040 V/cm），频率为5 kHz，脉冲数量取决于针的数量。若使用7根针，则施加24个脉冲。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>污染材料的处理
	<ol>
		<li>将所有污染材料（注射器、针头、药瓶、纱布、手套）放入专用于焚烧的容器中处理。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. 随访
注意：每次随访时，使用游标卡尺测量肿瘤结节并进行拍照。随访还用于评估可能的局部和全身不良反应。治疗反应根据以下标准在4周后进行评分 &#34;实体瘤疗效评价标准&#34; （实体瘤疗效评价标准）19 完全缓解（CR）——结节完全消失；部分缓解（PR）——以基线直径总和为参照，目标病灶直径总和至少减少30%；疾病进展（PD）——以所研究的最小直径总和为参照，目标病灶直径总和至少增加20%；疾病稳定（SD）——病灶缩小程度未达PR标准，且增大程度未达PD标准，以所研究的最小直径总和为参照。所有疗效评价类型的确认均需至少持续4周。观察时间定义为首次治疗日期与患者最后一次检查日期之间的间隔。可能的不良反应根据兽医协作肿瘤学组毒性评价标准（VCOG - CTCAE）进行判定。20 在每次随访检查时。
<ol>
	<li>治疗后1周预约复诊。治疗后2周预约复诊。治疗后4周预约复诊。4周后每月预约一次复诊。</li>
</ol>

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<li>Cemazar, M., Avgustin Ambrozic, J., Pavlin, D., Sersa, G., Poli, A., Krhac Levacic, A., Tesic, N., Lampreht Tratar, U., Rak, M., Tozon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+and+safety+of+electrochemotherapy+combined+with+peritumoral+IL-12+gene+electrotransfer+of+canine+mast+cell+tumours%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Comp+Oncol%22%5BJournal%5D)">Efficacy and safety of electrochemotherapy combined with peritumoral IL-12 gene electrotransfer of canine mast cell tumours.</a> Vet Comp Oncol. , (2016).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

电化学疗法已被证明对犬和猫的不同原发性肿瘤或转移灶具有高度有效性。电化学疗法可用于治疗单发或多发的皮肤或皮下肿瘤结节，以达到根治目的，也可作为手术的辅助治疗。对于犬的多种肿瘤（包括肥大细胞瘤），标准首选治疗方法是手术切除肿瘤。一项将手术作为标准治疗与电化学疗法（ECT）用于治疗犬肥大细胞瘤的比较研究表明，ECT治疗的完全缓解率为70%，而手术治疗的完全缓解率为50%11，表明ECT与手术具有相当的治疗效果。
要实现电化学治疗（ECT）显著的抗肿瘤效果，必须满足两个关键条件，这两个条件是方案中的关键步骤。第一个条件是细胞毒性药物的给药。药物在靶组织中的存在决定了ECT的疗效，因为药物必须进入细胞内部才能发挥杀伤作用。当药物通过瘤内注射给药时，组织变白是药物良好滞留的标志。此外，在给药后，部分溶液可能通过穿刺针在肿瘤上造成的孔洞或在后续ECT治疗过程中坏死组织的裂隙发生渗漏。因此，在这些情况下，达到1 mg/cm3（顺铂）或3,000 UI/cm3（博来霉素）的浓度可能仅具有理论意义，但目标仍是尽可能在靶组织中保留更多的药液。此外，应尽快施加电脉冲，以产生血管收缩效应，从而有助于药液在组织中的滞留。
电化学治疗（ECT）可采用两种不同的给药途径：瘤内注射和静脉注射。瘤内注射顺铂或博来霉素，以及静脉注射博来霉素的抗肿瘤效果相当21，而静脉给予顺铂进行电化学治疗的效果较差22，因此顺铂仅用于瘤内给药。顺铂药物的另一个重要特点是禁止在猫中使用，因为已证实顺铂对猫具有高度毒性23。如果患者仅有单个或少数几个结节，则推荐采用瘤内给药途径。若结节数量超过约5个，则推荐采用静脉给药途径。即使不施加电脉冲，瘤内注射顺铂仍具有一定抗肿瘤效果，而由于博来霉素具有高度亲水性，其在无电脉冲时则无此效果。因此，若在犬中可行瘤内给药，顺铂为首选药物。这一点尤为重要，因为电化学治疗要发挥有效抗肿瘤作用必须满足第二个条件，即整个肿瘤区域需被足够强的电场覆盖。为了实现细胞膜通透性的增加，组织内感应产生的电场必须超过一定阈值。组织中电场的分布取决于所用电极的类型，因此选择何种电极至关重要。对于较小的表浅肿瘤，可安全使用板状或平行阵列电极24。若肿瘤较厚或较大，则更适合使用六角形电极。一个重要事实是，电脉冲的应用可以重复进行，以确保覆盖整个肿瘤区域，包括安全边缘。由于电脉冲会引起血管闭锁，其施加应从肿瘤边缘开始，逐步向中心推进。
目前，该技术的局限性在于电极的可获得性，这限制了对深部肿瘤的治疗。然而，电极的构型是一种正在快速发展的技术特征，目前已有不同类型的电极用于特定部位的治疗：长针形单电极用于肝内结直肠肿瘤转移灶25、骨转移灶7、软组织肉瘤26；腔内电极用于结直肠、胃和食管肿瘤27；可扩张的“伞形”电极则用于脑肿瘤8。
电穿孔化疗（ECT）可作为单次治疗手段即产生疗效，但在治疗失败或肿瘤部分缓解的情况下，可重复进行多次治疗，以提高疗效。ECT是一种局部消融治疗，其局部疗效可达80%的局部肿瘤控制率，但对远处转移灶无明显作用。7，这是该疗法的另一个局限性。因此，为了实现全身性反应，可将电穿孔疗法（ECT）与其他疗法联合使用。近期，我们提出将电穿孔疗法（ECT）与电穿孔的另一种生物医学应用相结合， 即，编码具有抗肿瘤活性的免疫调节分子白细胞介素-12（IL-12）的基因电转移。已有研究显示，电化学治疗（ECT）联合IL-12基因电转移是一种安全的联合疗法，无不良反应，对局部肿瘤控制效果良好，完全缓解率高28，同时也防止了远处转移的复发。
总之，电化学治疗的优点在于其操作简便、治疗时间短、细胞毒性药物剂量低且副作用轻微。此外，该治疗可在门诊进行，因此患者无需住院。
如今，市场上各种电脉冲发生器的可获得性不断提高，同时也使得这些发生器的价格降低，而可靠性并未下降，从而使电化学治疗变得更加经济实惠。这些因素都将推动该疗法在兽医学领域得到更广泛的应用。

ECT 是一种用于治疗多种组织学类型肿瘤的局部消融技术。消融效果源于药物诱导的细胞杀伤作用，其机制是在肿瘤内或静脉注射药物后，通过在肿瘤周围皮肤直接施加电脉冲，改变细胞膜通透性，从而增加药物在细胞内的蓄积。ECT 的主要作用机制是通过细胞膜电穿孔（电渗透）导致细胞膜通透性增加，提高细胞内药物浓度，从而增强细胞抑制药物的疗效。1,2电穿孔可增强两种亲水性细胞毒药物博来霉素和顺铂的摄取，这两种药物的细胞膜通透性较差。由于在电脉冲作用部位博来霉素和顺铂的细胞毒性增强，因此仅需使用低剂量药物即可获得良好的抗肿瘤效果，从而避免或仅产生轻微的药物全身不良反应。3另一种ECT的特征是肿瘤抗血管效应，该效应首先导致血管闭锁， 即，肿瘤内血流减少，从而导致细胞毒性药物在其中滞留，以及其次的血管破坏作用， 即，小血管内皮细胞的直接杀伤，导致肿瘤细胞继发性死亡4-6ECT抗肿瘤作用的第三种机制是免疫系统的激活，因为ECT通过促使肿瘤周围释放肿瘤抗原，引发免疫反应。免疫系统的参与对于肿瘤的彻底清除至关重要。7.
电穿孔化疗（ECT）在人类肿瘤学中已展现出巨大潜力，目前已被用作皮肤和皮下肿瘤的标准治疗方法，其客观缓解率可达80%3。此外，ECT还被应用于多项治疗脑部8、骨骼9和肝脏10肿瘤转移的临床研究中。在兽医肿瘤学中的临床研究已表明，对犬11, 12、猫13和马14的皮肤及皮下肿瘤进行ECT治疗时，可实现高达80%的持久性客观缓解。抗肿瘤疗效与肿瘤大小相关，体积小于2 cm3的肿瘤比更大的肿瘤具有更好的治疗反应15。
此外，一项比较手术与电化学疗法（ECT）治疗犬肥大细胞瘤的研究显示，采用ECT治疗的完全缓解率为70%，而手术治疗的完全缓解率为50%。11 证明电化学疗法（ECT）是一种与手术效果相当的治疗方法。此外，ECT 还可作为手术治疗实体瘤的一种替代方法，特别是在主人不同意手术或肿瘤因位置原因难以完整切除（即无法获得清晰切缘）的情况下例如，侵犯主要血管、头颈部或腿部肿瘤、肛门区域肿瘤 等等。本文旨在定义电化学治疗（ECT）的操作规程，提供顺铂和博来霉素与电脉冲联合应用的使用说明，以安全、恰当地治疗犬猫的皮肤及皮下肿瘤。

<table><tbody><tr><td>顺铂 Kobi</td><td>Fresenius Kobi Oncology, Hampshire, Great Britain</td><td></td><td>细胞毒性药物</td></tr><tr><td>博来霉素 PCH</td><td>Pharmachemie B.V., Haarlem, Dutch</td><td></td><td>细胞毒性药物</td></tr><tr><td>AquaUltra Basic</td><td>Ultragel, Budapest, Hungary</td><td></td><td>水性凝胶&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Electropulsator ELECTROvetS13&amp;nbsp;</td><td>Leroy biotech, Toulouse, France</td><td></td><td>方波脉冲发生器</td></tr></tbody></table>

犬猫肿瘤电化学治疗的操作规程

Operating Procedures of the Electrochemotherapy for Treatment of Tumor in Dogs and Cats

电化学治疗（ECT）是一种用于治疗不同组织学类型实体瘤的局部治疗方法。其作用机制基于通过&#34;电穿孔&#34;使细胞膜通透性增加。为了实现细胞的&#34;电穿孔&#34;，需由电脉冲发生器产生电脉冲，并通过电极将电脉冲传递至靶组织。电穿孔是一种物理方法，可用于将诸如细胞毒性药物等自身难以穿过细胞膜的分子导入细胞内。目前在电化学治疗中，临床上使用的药物主要包括顺铂和博来霉素。电化学治疗具有较高的抗肿瘤疗效，例如，对于体积小于 2 cm3 的犬肥大细胞瘤，完全缓解率可达100%。此外，电化学治疗还可用于不可手术切除肿瘤的治疗。电化学治疗的一个重要特征是，单次治疗即可达到有效疗效。然而，若治疗失败或肿瘤部分缓解，也可重复多次治疗，且疗效相当甚至更佳。目前，电化学治疗已成为人类肿瘤学和兽医肿瘤学中多种组织学类型皮肤及皮下肿瘤的标准治疗手段。此外，目前还有多项针对深部肿瘤应用电化学治疗的临床研究正在进行中。

本病例展示了一例位于犬眼睑的肥大细胞瘤。对该患者采用顺铂瘤内注射，并使用板状电极施加8次电脉冲进行治疗。
肿瘤大小为 5 mm。由于肿瘤位于敏感区域，因此使用了全身麻醉。根据肿瘤大小，瘤内注射了 0.5 ml（0.5 mg）顺铂。注射后 1 分钟，使用 8 mm 板状电极施加电脉冲。仅进行了一次电脉冲处理。治疗后，对患者进行监护直至意识充分恢复。两小时后患者出院。一周后，患者前来进行常规复查。肿瘤发生溃疡，肿瘤周围区域略有肿胀。使用游标卡尺测量肿瘤大小并拍照记录。治疗一个月后，未再发现肿瘤存在的证据。伤口已闭合，治疗部位可见伴有脱发的瘢痕。治疗后，该犬未表现出任何疼痛迹象，眼睑功能在整个愈合期间均得以保留，治疗后的美容效果良好。
<img alt="犬眼睑测量，用于犬眼健康研究的带尺子示意图，近距离检查。" src="/files/ftp_upload/54760/54760fig1.jpg" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 1"> 
图 1. 电化学治疗。 该图显示了治疗前的犬（A）、治疗后一周（B）、一个月（C）和三个月（D）的情况。（A）下眼睑的肥大细胞瘤。一只2.5岁的德国拳师犬，治疗前肿瘤大小为5 mm。（B）治疗后，肿瘤开始发生溃疡，电穿孔区域周围的组织出现轻度肿胀。治疗两周后，肿瘤部位形成结痂并脱落（未显示）。（C）电化学治疗一个月后，肿瘤部位未见肿瘤迹象，可见伴有脱发的瘢痕。（D）电化学治疗三个月后，肿瘤部位完全重新上皮化。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/54760/54760fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td colspan="2">操作模式 (OM)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>肿瘤结节数量、体积和位置</td>
			<td>A</td>
			<td>B</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1–3 个结节，体积 &lt; 1 cm³，皮肤和口腔肿瘤</td>
			<td>√</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&gt; 3 个结节，任意体积，皮肤和口腔头颈部肿瘤</td>
			<td></td>
			<td>√</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>任意数量、任意体积的皮肤和口腔头颈部肿瘤</td>
			<td></td>
			<td>√</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1. 手术模式的选择依据肿瘤结节数量及其大小。 深度镇静 = 模式A；全身麻醉 = 模式B。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>化疗药物/肿瘤大小</td>
			<td>瘤内给药</td>
			<td>静脉给药</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>顺铂剂量 (1 mg/ml) &lt; 1 cm3</td>
			<td>1 ml (1 mg)/cm3 肿瘤组织</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>顺铂剂量 (1 mg/ml) &gt; 1 cm3</td>
			<td>0.5–1 ml (0.5–1 mg)/cm3 肿瘤组织</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>博来霉素剂量 (3,000 IU/ml) &lt; 1 cm3</td>
			<td>0.5 ml (1,500 IU)/cm3 肿瘤组织</td>
			<td>300 IU/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>博来霉素剂量 (3,000 IU/ml) &gt; 1 cm3</td>
			<td>0.5 – 1 ml (1,500–3,000 IU)/cm3 肿瘤组织</td>
			<td>300 IU/kg</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表2. 根据给药途径和犬肿瘤大小确定的细胞毒性药物适宜注射体积。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>化疗药物/肿瘤大小</td>
			<td>瘤内给药</td>
			<td>静脉给药</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>博来霉素剂量 (3,000 IU/ml) &lt; 1 cm3</td>
			<td>0.5 ml (1,500 IU)/cm3 肿瘤</td>
			<td>300 IU/kg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>博来霉素剂量 (3,000 IU/ml) &gt; 1 cm3</td>
			<td>0.5 - 1 ml (1,500 - 3,000 IU)/cm3 肿瘤</td>
			<td>300 IU/kg</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表3. 根据猫肿瘤大小选择细胞毒性药物的合适注射体积。

电化学治疗是一种针对实体瘤的局部治疗方法。其主要机制是通过电穿孔介导的肿瘤细胞膜通透性增加，从而促进博来霉素和顺铂等细胞抑制剂在细胞内的富集。因此，在肿瘤部位施加电脉冲可显著增强抗肿瘤效果。

电化学治疗（Electrochemotherapy，ECT）是一种用于治疗不同组织学类型实体瘤的局部治疗方法。其作用机制基于细胞膜……

本实验的总体目标是利用细胞毒性药物联合电脉冲治疗犬和猫的皮肤及皮下肿瘤。电化学治疗是一种用于治疗不同组织学类型实体瘤的局部治疗方法，其作用机制基于通过电穿孔技术实现细胞膜通透性的增加。电化学治疗的主要机制是通过电穿孔增强化疗药物的效果，从而增加药物在细胞内的蓄积。电穿孔可提高两种亲水性化疗药物——博来霉素和顺铂的细胞摄取，这两种药物本身膜通透性较差。本文报道的病例展示了对一只德国拳师犬下眼睑肥大细胞瘤的治疗过程。电化学治疗可采用两种不同的给药途径：瘤内注射和静脉注射。顺铂可通过瘤内注射给药，而博来霉素则可通过瘤内或静脉注射给药。这些药物的浓度较低，不会产生全身性副作用。可以使用任何能够产生适当幅度、持续时间和频率的方波电脉冲的电脉冲发生器来实施电脉冲的应用。本视频所使用的发生器配备集成软件和触摸屏界面，可用于选择预设的电脉冲参数。该设备还配有一个手持式电极架，通过连接线与发生器相连，并带有用于触发脉冲的按钮。电脉冲由脚踏开关触发。进行瘤内注射药物时，组织变白是药物良好滞留的标志。需注意瘤内注射过程中可能出现的药物渗漏。应尽快施加电脉冲，以获得血管收缩效应，这有助于保留注射的药物溶液。电极与皮肤之间良好的接触至关重要，当使用板状电极时，可通过脱毛并涂抹水性凝胶来确保良好接触。电脉冲通过具有不同构型的电极输送。可使用板状或针状电极，其选择取决于肿瘤的位置、大小和厚度。本例中采用非侵入式不锈钢板状电极，电极间距离为七毫米。在触摸屏上设置方波电脉冲的参数。电化学治疗的另一特征是诱导血管闭锁，即肿瘤内血流减少，从而将化疗药物滞留于肿瘤内，这种现象可视为一种轻微且短暂的缺血。因此，由于其破坏血管的作用，可防止治疗部位肿瘤的可能出血。首次检查建议在一周后进行，以评估可能的局部和全身不良反应。一周后，肿瘤发生溃疡，肿瘤周围区域出现轻度肿胀。一个月后的随访用于评估治疗反应。治疗效果取决于肿瘤体积的变化。因此，使用游标卡尺测量肿瘤结节并进行拍照记录。四周后，未观察到肿瘤存在的证据。伤口已闭合，治疗部位可见伴有脱发的瘢痕形成。治疗后，该犬未表现出任何疼痛，眼睑功能在全部愈合期间均得以保留，治疗后的美容效果极佳。电化学治疗可用于孤立性或多个皮肤及皮下肿瘤结节的治疗，既可作为根治性治疗手段，也可作为手术的辅助治疗。电化学治疗仅需一次治疗即有效，但如果治疗失败或肿瘤部分缓解，可重复多次治疗以提高疗效。总之，电化学治疗的优点在于操作简便、治疗时间短、化疗药物剂量低以及副作用轻微。此外，该治疗可在门诊进行。因此，患者无需住院。

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Research

科研

JoVE Journal

Cancer Research

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