在P10大鼠新生儿中风的短暂大脑中动脉栓塞模型

新生儿中风是早期脑损伤的重要原因，需要一个具有一致局灶性损伤模式和高可重复性的转化模型才能进行研究。本研究描述了在足月等效啮齿动物中造成非出血性单侧局灶性缺血再灌注损伤的详细外科手术。

新生大鼠短暂性大脑中动脉闭塞的总体目标是为足月新生儿提供卒中的转化模型。这种方法可以通过了解发育中的大脑损伤和修复机制，以及我们如何用不同的治疗策略来改变这些机制，从而帮助回答新生儿缺血性脑损伤领域的关键问题。该技术的主要优点是提供了新生儿局灶性动脉缺血性卒中的生理学准确模型，并且还包括再灌注成分，这是人类新生儿损伤进展的重要组成部分。

此模型的视觉演示至关重要，因为此手术的步骤可能非常难以学习。动脉解剖结构的二维表示并不总是充分证明大鼠 3-D 分支的复杂性。首先称量幼犬的重量，确保它在 19 到 21 克之间。

根据批准的方案使用吸入异氟醚麻醉幼犬后，确保对脚部挤压没有反应。在手术阶段使用加热垫保持体表温度。用胶带将动物固定在仰卧位。

使用无菌棉签用 70% 乙醇擦拭颈前部区域，然后用棉签蘸取聚维酮碘溶液。接下来，将 0.25% 布比卡因局部浸润到计划的切口部位。然后，在通过立体镜工作的同时，在颈椎前部做一个 5 到 7 毫米的中线切口，以暴露颈总动脉。

放置 2 到 4 个牵开器，保持空腔开放且动脉裸露。接下来，找到颈内动脉、枕动脉和颈外动脉。从动脉中取出结缔组织和脂肪以获得清晰的视野。

剪断 1.5 厘米的 6-0 丝编织缝合线后，解开缝合线，拉出单股。确保单股整齐且没有磨损。将缝合线保持在 45 度镊子内，在 ICA 下方以弧形扫动镊子，使尖端出现在 ICA 和 OA 之间。接下来，抓住缝合线的末端并拉动它，使末端易于接近。

从镊子中松开股线，然后将镊子从 ICA 下方向外拉出，反转先前的运动。在 ICA 最靠近它与 CCA 分离位置的底部系上临时结扎。小心地横向缩回 ICA，然后使用夹子将缩回的股线固定在切口对面一侧腋窝区域附近的多余皮肤上。

在进行下一步之前，确保回缩的股线足够紧以阻止血液流动。动脉应该是平坦的和苍白的。使用 45 度镊子抓住另一根未编织的缝合线，并像以前一样将其绕在 ICA 下方和周围。

将此股线放置在回缩股线的侧面。然后在打结和解开的结扎线之间切开一个 0.2 毫米的小动脉切开术，更靠近打结的结扎线。现在，使用公制尺子测量 10 毫米的硅涂层尼龙缝合线作为咬合线。

剪断缝合线，额外留出 2 到 3 毫米的余量，以便在再灌注期间移除。用 45 度镊子握住闭塞缝合线，并使用直镊子形成弯曲，标记前进的停止点。将闭塞缝合线送入动脉切开术，使其平行于 ECA 并朝向头部。

平稳地推进缝合线，直到达到弯曲。然后使用位于回缩股线外侧的股线系上临时结扎线以固定闭塞缝合线。取下牵开器夹，然后修剪两条临时结扎线的股线，留下用于去除结的股线比用于收紧结的股线长。

取下牵开器，并使用 6-0 编织丝闭合空腔，以创建三到四条间断缝合线。将幼犬从麻醉中取出，并将其放在室内空气中的加热垫上。监测幼崽，直到它恢复足够的意识以维持胸骨斜躺，并确保它在将其送回母马之前完全恢复。

在闭塞期间，可以使用弥散加权磁共振成像来验证损伤的适当诱导。这些图像显示了在短暂性 MCAO 期间通过 DW-MRI 检测到的持续缺血性损伤，如箭头所示。MCA 闭塞后约 2 小时 50 分钟，准备手术材料，然后像以前一样麻醉开始再灌注手术。

拆下中断的缝合线，找到由两条结扎线和闭塞缝合线的尾端标记的连接处。通过拉动较长的股线，小心地解开临时结扎线的最外侧结，然后从腔中取出缝合线。在 MCA 闭塞后正好 3 小时，慢慢将闭塞缝线从动脉中拉出。

不应该有抵抗。使用镊子对动脉切开术施加压力，然后小心地解开内侧结以恢复血流。从体内取下缝合线后，在动脉切开术中涂抹止血剂以止血。

动脉恢复原来的形状和红色证实 ICA 血流已经恢复。取下牵开器，并使用 6-0 编织丝封闭腔体，以创建三到四条中断的缝合线。将幼犬从麻醉中取出，并像以前一样通过监测让它恢复，然后再将其放回家笼。

每天检查幼崽，持续五天。记录它们的重量，并仔细检查切口部位是否适当愈合。这些从 P-38 动物身上采集的从后到前 50 微米甲酚紫染色的冠状脑切片在 P-10 进行 3 小时的 TMCAO 后表现出相当严重的损伤。

箭头表示同侧囊肿形成以及皮质和纹状体体积减少。左侧的圆孔表示对侧半球标识符。在尝试此过程时，请务必记住，虽然此过程在概念上很简单，但成功和掌握可能需要数小时的优化和练习。

一旦掌握，闭塞可以在不到 10 分钟的时间内完成，而再灌注可以在不到 5 分钟的时间内完成。