应用改良袖套技术的小鼠胰腺移植模型

我叫 Benno Cardini，来自因斯布鲁克医科大学内脏、移植和胸外科系 Daniel Swarovski 研究实验室。今天，我们将向您展示一种使用改良袖带技术进行胰腺移植的小鼠模型。通过腹膜内注射氯胺酮和甲苯噻嗪麻醉供体动物，并剃除腹部区域。

然后将受体以仰卧位放在手术区域上，并用洗必泰擦洗手术区域 3 次。现在，进行从耻骨区域到剑突的中线剖腹手术，并将切口向肋下两侧扩大，以更好地观察手术区域。然后将内脏向左侧外出，并将肝素注射到肾下腔静脉中。

在下一步中，确定左肾静脉交叉口近端的腹主动脉，破坏主动脉，并在该点系扎。现在，移动到肝门，识别并解剖靠近肝脏的胆总管，并在靠近胰腺的地方结扎它。最后，横切结扎线上方的胆总管。

接下来，解剖靠近肝脏的门静脉，以获得足够的长度以进行静脉吻合。作为提示，在门静脉上留下一小块肝脏，以便以后更容易识别。接下来，破坏主动脉周围组织中的左肾静脉并结扎它。

然后横切肾静脉和主动脉周围组织，保持在结扎线的右侧。接下来，从腹腔干到横膈膜钝剖腹主动脉，破坏靠近横膈膜的主动脉并在该点横切。接下来，识别并凝固所有腰椎分支并横切它们。

现在在先前设置的结扎下横切主动脉。现在通过主动脉贴用冰冷灌注溶液灌注胰腺，直到您看到流出物从门静脉流出。在顶部，您可以看到灌注的门静脉，在灌注的主动脉下方。

现在将内脏置换到腹膜腔中，并使用 8-0 逐步将胰腺与肠道分开丝绸连字。从幽门后区域开始，破坏十二指肠两次，拉 8-0丝绸连字穿过它。然后结扎它并将胰腺与十二指肠急剧分离。

这种方法反复进行，直到到达 Treitz 韧带。重要的是不要损坏十二指肠，因为由于可能的污染，它会将移植物排除在实验之外。胰腺与十二指肠完全分离后，移动到肠系膜上，破坏它并结扎它，然后横切它。

与前面的步骤类似，通过破坏、结扎并最终横切来将胰腺与横结肠分开。现在使用相同的方法，通过在结扎后尖锐地解剖胰腺来将胰腺与胆道区域分开。随后，从胃中直接解剖胰腺。

确定左胃动脉，结扎并横切。最后，取出带有附着脾脏的胰腺，将其放入冰冷的再灌注溶液中，直至进一步植入。用脾当把手。

与供体类似，通过腹膜内注射氯胺酮和甲苯噻嗪麻醉受体动物并剃除颈部区域。之后，将供体动物仰卧位放在手术区域，并用洗必泰擦洗颈部区域 3 次。接下来，从颈静脉切口到右下颌角进行皮肤切口。

接下来，识别右颈外静脉的所有外侧分支，在双极凝血后动员、破坏和分裂它们。然后，抓住右下颌下腺的下极，将其颅骨抬起，并在其饲血管双极凝固后解剖。现在横切双极凝血后右颈外静脉的所有内侧分支。

将颈外静脉尽可能颅骨连接两倍，并将其分成结扎线。将颈外静脉的近端穿过聚乙烯袖带。在这里，袖带的手柄面向手术外科医生很重要。

下一步，放置来自侧面的微血管静脉夹。现在用肝素润湿静脉，取下结扎线，轻轻地将静脉拉过聚乙烯袖带。最后，用圆形 8-0 固定袖口上的静脉真丝连字，背面有 1 个结，前面有 3 个结。

为了进入右侧颈总动脉，在近端和远端凝血后动员并横切右侧胸锁乳突肌。随后，轻轻动员颈总动脉，注意不要伤害邻近结构，例如迷走神经。与静脉类似，尽可能在颅骨上结扎颈总动脉两次，并将其分成结扎线。

现在将血管穿过动脉袖带。最后，用来自内侧的微血管夹固定动脉袖带。接下来，移除结扎线并使用血管扩张器扩大动脉腔。

管腔充分增宽后，将动脉拉过动脉袖带。最后，以静脉为例，用 8-0 固定动脉丝绸连字。在这里，您可以看到因动脉静脉吻合而修复的静脉和动脉。

植入时，将移植物放在宫颈区域湿润的 Ace 上。然后，通过 8-0 拉动门静脉丝绸结扎环，缩短静脉以实现无张力吻合，然后将门静脉拉过静脉套囊。最后，用圆形 8-0 固定矿脉丝绸连字。

与静脉类似，将主动脉残端穿过结扎环并缩短主动脉。然后，将主动脉拉过动脉袖带，最后用圆形 8-0 固定丝绸连字。再灌注前，识别脾管并结扎，最后锐利解剖并切除脾脏。

对于再灌注，首先取下静脉夹，然后取下动脉夹。移植物的充分再灌注显示动脉的可见搏动和整个移植物的粉红色。用常温盐水溶液润湿移植物。

在伤口闭合之前，请取下静脉套袋的手柄，以避免血管扭结。最后，用 6-0 连续缝合缝合伤口，皮下注射 0.5 毫升常温盐水。为了验证该模型，我们测试了移植胰腺的内分泌功能。

小鼠在手术前 4 天通过链脲佐菌素预处理而出现低血糖，如果血糖水平高于 300 毫克百分比，则认为小鼠出现低血糖。此线照片以红色显示活体未移植对照小鼠的血糖水平，以蓝色显示未暴露于长时间冷缺血时间的移植物接受者的血糖水平。此外，暴露于 16 小时冷缺血时间的胰腺移植物受者的血糖水平显示为绿色。

活小鼠在整个观察期间保持低血糖状态。相比之下，未暴露于长时间冷缺血时间的胰腺移植物在 24 小时内导致正常的血糖，证实了移植物的内分泌功能。暴露于 16 小时冷缺血时间的移植物移植不能使受者恢复正常血糖。

更重要的是，在该组中，由于缺血再灌注损伤相关的早期移植物损伤，所有小鼠都必须在 48 小时内处死。在本视频中，我们介绍了一种使用非缝合袖带技术对小鼠进行胰腺移植的方法。这在技术和显微镜手术中都是可行的，并且成功率很高。

然而，鉴于由于导管闭塞导致胰腺的 gredient 纤维化，我们认为该模型最适合专注于早期缺血再灌注损伤相关移植物损伤的研究领域。