Dissection of the Auditory Bulla in Postnatal Mice: Isolation of the Middle Ear Bones and Histological Analysis

解剖程序的总体目标是分离听性大疱和胶囊，然后从出生后小鼠中分离单个听小骨，以进行各种整座和组织学分析。该方法可用于解决伤口生物学领域的关键问题，例如形态发生不良、软骨内骨化或矿物质代谢不良的机制。这种方法基于对解剖细节的深入了解。

一般来说，刚将小鼠作为生物系统的个体可能会很困难，因为他们对人类中耳的了解可能不适用于小鼠。演示该程序的是我实验室的技术人员 Ayako Sakamoto。首先将听觉大疱和囊膜以及周围的颅骨放入室温下含有磷酸盐缓冲盐水 pH 7.4 的标本培养皿中。

在双目解剖显微镜下，识别听囊周围的颅骨，如图所示。用一副镊子夹住周围的颅骨，用第二套镊子拉出基蝶骨和枕骨。然后用镊子轻轻地将顶骨和顶骨从胶囊中拉出，并在完全松开时取出。

接下来，将鳞状细胞从大疱和胶囊中拉出，轻轻梳理掉骨骼和软组织。接下来，握住外耳并翻转标本以露出内侧。接下来，将标本旋转 180 度，抓住胶囊并拉出剩余的软组织。

现在可以看到背嵴。在这个角度下，内耳道、弓下窝和前半规管中的面神经和前庭耳蜗神经清晰可见。当背嵴向解剖盘底部倾斜时，可以清楚地看到听觉大疱。

如果制剂略微倾斜，则在大疱内可以看到锤状骨。首先使用镊子将锤骨上方和鼓膜沟外侧的外耳道骨折。在第一个 facture 之前创建第二个 facture。

然后取出外耳道，使鼓膜可见。接下来，去除腹壁和后壁踝短突附近的部分鼓膜和鼓骨。现在应该暴露出锤骨、砧骨、镫骨和鼓膜张肌。

提起锤骨，用 27 号针的斜面边缘切开鼓膜张肌。请注意，踝柄牢固地附着在鼓膜上，就像在其他哺乳动物中看到的那样。通过破坏关节腺踝的前突，使踝骨从听骨关节的砧骨脱位。

使用镊子将锤骨与听觉大疱分离。去除听大疱的主要部分，露出砧骨和镫骨。然后使用 27 号针的斜面边缘切断短嵴处的砧后韧带。

使用镊子隔离砧骨。用 27 号针的斜面边缘切断镫骨附近的镫骨动脉。旋转样品，使圆形窗口位于底部。

然后将缝纫针插入镫骨的闭孔并提起镫骨。去除镫骨后，椭圆形的窗户开口应该清晰可见。使用 27 号针将镫从缝纫针上推开。

要开始组织包埋，首先用剪刀剪掉大疱前端的茎状突。通过切割部分可以看到锤骨和背嵴。将大疱和胶囊浸入 PBS 中的 1-2% 多聚甲醛中。

如果空气滞留在大疱中，请使用针头和注射器将其清除。将大疱和胶囊留在 4 摄氏度的固定剂中，在试管旋转器上过夜。第二天，在 PBS 中快速清洗大疱和胶囊。

然后立即浸入 4 摄氏度的液体冷冻包埋化合物中。在中耳和外耳水平的冷冻包埋化合物中形成气泡是很常见的。通过针头抽吸去除中耳的气泡。

对外耳中的气泡使用相同的技术。去除所有气泡后，根据要获得的切片类型确定组织的方向。然后可以在切片前将组织包埋在冷冻块中。

该图像显示了脱钙锤骨纵向石蜡切片的 H 和 E 染色，由字母 M 表示，以及 P14 小鼠的听大疱和荚膜。鼓膜由字母 TM 表示。该图显示了冷冻未脱钙锤骨纵切的钙骨标记，由字母 M 表示，以及 P21 小鼠的听大疱。钙绿信号显示锤状、大疱和关节囊中新的骨形成。

一旦掌握了这项技术，如果手术执行得当，可以在 10 分钟内分离出听觉大疱和胶囊。看完这个视频，你应该对小鼠听小骨和大疱的解剖方向有很好的了解，这在正文中有描述。