小鼠原位膀胱肿瘤模型和肿瘤检测系统

这个协议描述在雌性C57BL / 6J小鼠和肿瘤生长的监测小鼠原位膀胱肿瘤的生成。

这种非手术方法的总体目标是在小鼠中持续产生原位非肌层浸润性膀胱肿瘤，可以很容易地监测以评估膀胱内治疗。这种方法可以帮助回答膀胱癌领域的关键问题。例如新型膀胱内疗法的评估。

该技术的主要优点是易于将肿瘤植入小鼠体内并监测其生长，这有助于准确确定对治疗的反应。植入前一天，当细胞约 80% 汇合时，以 1 至 2 次分裂的方式传代到完全 DMEM 培养基中的 MB49 PSA 肿瘤细胞。在手术当天，收集并计数细胞，确保它们足够健康。

混合等体积的细胞悬液和 4% 台盼蓝，并使用血细胞计数器对蓝色染色的活细胞进行计数。细胞应具有至少 80% 的活力。接下来，在 15 mL离心管中以每毫升 200 万的浓度重悬细胞，并在 DMEM 中洗涤 3 次。

然后，将它们冷藏直到要注射。麻醉雌性小鼠后，以每 10 克体重 1 毫升的腹膜内注射 Hartmanns 溶液为其提供水分。在麻醉期间每 1 或 2 小时重复一次。

接下来，将无菌眼药膏涂抹在双眼上，根据需要重新涂抹。然后，将鼠标仰卧在加热垫上的纸巾上以保持体温。接下来，用胶带固定后腿。

现在对下腹部区域施加轻柔的压力，并将尿液收集到 1.5 毫升的试管中，以测量尿 PSA 的基础水平。接下来，在一毫升注射器中装入无菌 PLL，并连接一根 24 号静脉导管，并移除针头管心针。在导管尖端涂抹润滑剂。

然后，将导管插入尿道，并使用镊子将其引导至膀胱。感觉到阻力时停止。然后，以每 20 秒 10 μL 的速度缓慢射出 50 μL PLL，以避免膀胱输尿管反流。

现在将导管留在膀胱中 20 分钟，并用塞子防止流出。20 分钟后，取出导管，轻轻按压下腹部，排空膀胱中的任何内容物。然后，使用 1 毫升注射器将残留的内容物从导管中冲洗出来。

现在通过移液彻底混合 MB49 PSA 细胞，并将它们加载到 1 mL 注射器中。像以前一样连接导管并润滑。像以前一样将导管插入膀胱。

并开始注射细胞，以每 20 秒 10 μL 的剂量逐渐喷射。然后等待 1 小时。一小时后，取出导管并排空膀胱中的任何内容物。

然后，释放鼠标，位于其腹侧，并通过注射阿替唑使其恢复活力。现在，监测老鼠，直到它恢复胸骨卧位，然后将其放回笼子。发现 MB49 细胞的 PSA 分泌随生长培养基而变化。

使用 DMEM 培养基是因为它导致 PSA 分泌最多。为了确定 PSA ELISA 的敏感性，将不同数量的 MB49 PSA 分泌细胞与 MB49 亲本细胞混合。该检测检测到每百万个细胞中至少有 100， 000 个分泌 PSA 的细胞。

肿瘤植入的 PLL 方法导致膀胱中发生多个肿瘤。使用代谢笼收集过夜尿液和随机尿液样本都可用于通过 ELISA 测量 PSA。对于所有动物研究，小鼠体重被记录为健康的衡量标准。

每周监测尿液 PSA 作为肿瘤生长的量度。对每只小鼠使用不同的疗法，导致肿瘤大小不同。植入后 2 周，采集和加工膀胱。

肿瘤大小各不相同，PSA 测量可预测这一点。看完这个视频，你应该对如何在小鼠中产生正交各向异性膀胱瘤，并监测它们的生长有一个很好的了解。一旦掌握，每只鼠标可以在两个小时内完成这项技术。

在尝试此程序时，重要的是要记住确保在植入前混合细胞，并以缓慢的速度进行植入。在此程序之后，可以进行其他方法，如 Uvm 或 ELISA 的流式细胞术分析，以研究治疗后的免疫激活。