转移性的型号同源小鼠肾细胞癌的临床前疗法的定量和纵向评估

在免疫活性小鼠肾细胞癌的原位模型的实现，得到研究者通过初级肾肿瘤和肺转移瘤的在相同的动物的存在所定义的临床相关系统。该系统可用于临床前测试各种体内治疗。

该程序的总体目标是通过肿瘤细胞的肾内植入建立小鼠原位肾肿瘤，以研究肿瘤生长和转移以及抗肿瘤治疗的疗效。该方法可用于回答泌尿肿瘤学领域的关键问题，例如一种新疗法在肾癌临床前模型中的有效性如何。该技术的主要优点是肾内肿瘤植入建立了模拟临床肾细胞癌发病机制的原发性肺转移性肾肿瘤。

为了制备 Renca 肿瘤细胞，首先用 PBS 冲洗后用 0.25% 胰蛋白酶和 HBSS 分离细胞培养物。5 分钟后，用 RPMI 完全培养基中和反应。将细胞转移到锥形管中进行离心，并将沉淀重新悬浮在新鲜的 HBSS 中。

计数后，在 HBSS 中将体积调节至每毫升 6 个细胞浓度的 2 倍 10，并将细胞吸入配备有 18 号针头的 1 毫升注射器中。接下来，将无菌手术单放在加热垫上，并通过捏住脚趾确认适当的镇静水平。去除鼠标左侧的毛发，并在眼睛上涂抹兽医药膏。

然后用 5% 聚维酮碘消毒剂擦拭植入部位，并使用无菌手术刀在左侧做一个一到一厘米半的切口，注意不要穿透腹膜。用剪刀将真皮与腹膜分开，用无菌棉纱布轻拍切口部位以去除任何血液。然后用左手抓住头部，用右手托住侧面，通过腹膜定位脾脏。

用右手的一根手指从下方触诊鼠标。肾脏应该变得可见。牢牢抓住动物以提供跨腹膜和肾脏的张力，让助手通过完整的腹膜缓慢地将 0.1 毫升 Renca 细胞输送到肾脏中心。

将针头固定 5 到 10 秒，以减少细胞回流。然后，用一层薄薄的氰基丙烯酸酯组织粘合剂闭合切口。在实验终点，用剪刀做一个中线切口，从腹部中部开始，穿过胸腔、颈部和唾液腺。

使用剪刀和镊子小心地去除肋骨，不要损害肺组织，并去除结缔组织以露出气管。在配备 18 号针头的 3 毫升注射器中加入 10% 印度墨水和 PBS。然后用镊子小心地将丝缝线穿入气管下方，然后打一个松散的结。

接下来，小心地将针头插入气管，并用一到一毫升半的 India Ink 溶液慢慢给肺部充气。将结拉紧气管周围以抑制墨水回流，然后取下针头并小心切开结缔组织以去除膨胀的肺。在室温下将肺固定在含有 5 毫升化学通风橱中的 Fekete 溶液的 15 毫升锥形管中。

24 至 48 小时后，取出完整的脱色肺，并在 35 x 10 毫米的培养皿中小心地将肺叶分开。然后在解剖显微镜下计数白色肿瘤结节的数量。成功的小鼠肾内 Renca 细胞植入导致肿瘤在肾脏中发展并转移到肺部，荷瘤动物表现出强大的肿瘤负荷，通过肿瘤植入肾脏的重量增加来衡量。

据观察，Renca 肿瘤可以通过细胞角蛋白 8 和 18 的免疫组织化学染色来识别。植入表达荧光素酶的 Renca 细胞系可以通过生物发光成像跟踪肾脏中的肿瘤负荷和向肺部的转移，印度链接肺充气进一步证实了这一点。一旦掌握，如果执行得当，每只鼠标可以在不到五分钟的时间内完成这项技术。

在尝试此手术时，重要的是要记住通过腹膜清楚地识别肾脏，以确保准确的肾内肿瘤植入。在此程序之后，可以进行其他方法，如临床前药物检测来回答其他问题，例如新药在多大程度上影响肾内肿瘤的生长或转移？看完这个视频，你应该对如何进行肾内肿瘤细胞植入来建立小鼠原位肾肿瘤有一个很好的了解。

不要忘记，与活体动物和手术器械一起工作可能很危险，并且在执行此程序时应始终采取预防措施，例如遵循机构动物处理指南和保持无菌手术区域和器械。