使用中性毛细管进行单克隆抗体亚型的毛细管电泳分离

如今，毛细管电泳技术已成为分析单克隆抗体等生物大分子最具分辨力和灵敏度的技术之一。然而，该技术的成功实施依赖于分析人员在样品和系统制备等关键步骤中所具备的知识与操作技能。本教程旨在详细介绍如何成功开展分析，内容涵盖溶液与样品的制备、毛细管电泳系统的准备、仪器方法的设置，以及数据的判读与处理。

总体而言，本方案可用于分析化学实验室准备工作中相关人员技能的培养与提升。称取适量 HPMC，使其在 100 毫升溶液中的终浓度为 0.05%。由于 HPMC 是一种基础的弹性聚合物，第一步应将称好的粉末倒入玻璃烧杯中，缓慢加入 80 毫升水，以充分分散粉末。

然后，用水冲洗润湿托盘以去除粉末残留。按常规加入剩余试剂并搅拌溶液。用50%的乙酸将pH值调节至4.8。

静置溶液5分钟使其稳定。随后根据需要调节pH值。加水定容至100毫升。

将制备好的BG溶液通过中性滤膜过滤，倒入玻璃瓶中。最后，正确标记玻璃瓶，并置于冷藏条件下保存。为制备样品，首先在1.5毫升离心管中加入162 µL微量缓冲液。

然后加入18 µL先前配制的MAP样品，浓度为10 mg/mL。第三步，加入20 µL先前配制的1%组胺溶液，使最终样品体积达到200 µL。下一步，将样品处理5秒。

离心5秒。吸出样品的全部体积，并向上 dispensing 至微量小瓶中，以避免引入气泡。

最后，盖上瓶盖并冷藏保存。按下电源开关关闭毛细管电泳仪，并打开前门。

在接口块下方放置一块新的移动擦拭垫。使用洗瓶通过接口块用水冲洗电极。让水从孔中滴落，并彻底干燥接口块。

使用擦拭纸小心地从电极上去除多余的水分。在此操作过程中，注意不要触碰电极。将擦拭纸从样品固定系统中取出。

使用新的、蘸水的无尘擦拭布清洁样品托盘的表面，以及缓冲液托盘的表面。将缓冲液托盘向上滑动，抬起样品固定系统，并用擦拭布清洁其表面。

将缓冲液托盘移回原位。随后彻底清洁接口块，清洁夹紧杆和紫外灯外壳。

最后，务必在使用前测试系统。用洗瓶中的水冲洗开口杠杆，并用一块新的无绒布彻底清洁其表面，以去除灰尘和积聚的盐分。

最后，在安装前务必先进行测试。使用沾水的微纤维布清洁光纤电缆的两端，并确认两端之间的光输出情况。从包装中取出一个新的中性毛细管。

将毛细管保护套管的一端取至工作台。解开并拉直塑料套管，小心地将毛细管从套管中抽出。在工作台上用一张纸标出以下尺寸刻度。

将毛细管窗口与厘米刻度的零点对齐，具体操作如下：随后用胶带将毛细管两端固定在工作台上。在刻度标记外侧两毫米处标记毛细管两端。剪去远离窗口一端毛细管的保护帽。

将毛细管末端浸入装有水的毛细管电泳小瓶中，以避免毛细管内壁涂层受到永久性损伤。从瓶中取出毛细管，并小心地将此端插入卡盒的出口侧。当毛细管从另一侧露出后，轻轻拉出所需长度，使毛细管的检测窗口与卡盒的窗口居中对齐，如下所示。

此后，将滤芯翻转，将孔径塞插入滤芯窗口，按压至卡入到位。操作过程中需小心，避免损坏毛细管窗口。确认在宽光源照射下光线可透过窗口。

将毛细管插入已预装冷却液管路的套管中，确保管路未扭曲且O形圈已正确安装。推动毛细管穿过管路，直至毛细管从另一端露出。然后，将管路末端插入卡盒出口侧，并拧紧管路螺母。

将毛细管的进样端插入卡盒的进样侧。当毛细管从另一侧露出后，根据需要将其拉出。随后，将管路的一端插入卡盒的进样侧，并拧紧管路螺母。

从靠近窗口一端的毛细管末端开始，切割保护帽。然后将细胞固定夹安装到毛细管两端，按压使其卡入到位，操作如下。在毛细管延长板上的参考线以下位置，切割毛细管末端。

务必使用放大镜检查毛细管末端。若毛细管末端不光滑，需使用划片石进行抛光。将光圈O型圈放入光圈蓝色孔中。

使用O型圈插入工具小心地将其插入。最后，将装有水的CE小瓶安装到卡盒外壳中，并立即将卡盒放入外壳，毛细管端插入小瓶中，置于冷藏条件下保存。调节移液器体积。

将适量的水加入缓冲液入口托盘的 A1、B1 和 F6 位置，以及缓冲液出口托盘的 A1、B1、C1、E6 和 F6 位置。向缓冲液入口托盘的 C1 和 E6 位置加入 0.1 N 的 HCl。向缓冲液入口托盘的 D1 和 E6 位置加入 BGE，并向缓冲液出口托盘的 D1 位置加入 BGE。最后，盖紧缓冲液入口和出口托盘中的所有毛细管电泳（CE）小瓶。操作过程中，避免润湿瓶盖，以防止碳泄漏。打开毛细管电泳仪的前门。

首先，安装紫外检测器，并通过顺时针旋转螺丝将其固定。抬起内门，将开口杠杆向上压入接口块中进行安装。将光纤电缆插入夹具中，并顺时针旋转。

将另一端连接到检测器。小心操作光纤电缆，因为弯曲可能导致其断裂。将样品托盘放入样品固定系统中，并卡入到位。

按照相同步骤，将缓冲液托盘放入样品承载系统中。升起夹紧杆，将毛细管盒插入接口块。按压夹紧杆两端，并顺时针旋转旋钮将其拧紧。

关闭内门，然后关闭前门。最后，按下电源开关以开启毛细管电泳仪。创建仪器平衡方法。

在初始条件栏中设置参数，包括电压、色谱柱、样品储存温度和触发设置。选择2014作为采集波长。通过将参数配置到时间程序单元中，定义仪器需执行的操作。

包括每次清洗、进样和分离步骤的具体设置。执行此操作以创建仪器的平衡运行和关机方法。下一步是创建一个新的序列。

使用活化方法对毛细管进行活化程序设置。若毛细管为首次使用，则设置四个循环；否则，设置两个循环。

然后使用运行方法对要分析的样品进行程序设置。最后，使用关闭方法对毛细管进行储存程序设置。毛细管区带电泳分析在30分钟内完成。

第一个结果对应于组胺内标标准，用于评估adeque系统的性能。随后是ebaluadith单克隆抗体的不同碱性、主要和酸性冰晶形态。整个分离过程在约30微安的恒定电流下进行。

实验完成后，从grab软件导出原始数据，并通过Empower软件导入进行处理。通过电泳图谱曲线的垂直滴线积分，获得每种冰晶形态的百分比含量。本文提供了利用毛细管区带电泳生成的单克隆活性分析的详细逐步操作指南。

除了提供若干建议以减轻潜在问题外，本方案还具有易于定制的优点，只需对电导率和 pH 参数进行简单修改，即可用于其他蛋白质的分析。