Name: 小鼠主动脉夹层损伤:高效体内平滑肌细胞增殖和内皮功能模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: 了解小鼠主动脉夹层损伤模型，用于同时评估血管平滑肌细胞增殖与内皮再生功能。该体内方法有助于研究血管介入后再狭窄机制，为开发新型治疗策略提供重要实验基础。

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我们感谢马里兰大学医学院电子显微镜核心设施的Hsia Ru-ching博士在扫描电子显微镜样品处理过程中提供的技术支持。

伦理声明：动物操作方案已获马里兰大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准（方案编号 0416009），并依照国际实验动物评估和认证委员会（AAALAC-International）的标准进行。
1. 手术步骤
<ol>
	<li>麻醉技术
	<ol>
		<li>使用蒸汽灭菌法在121 °C下对所有用于存活手术的器械灭菌30分钟。</li>
		<li>诱导麻醉 通过 一个充有100% O₂的诱导舱2 和2.5%异氟烷输送 通过 精密蒸发器。诱导后，停止异氟烷，用O冲洗舱室2使用1.5-2%异氟烷维持麻醉 通过 口罩和1 L/min氧气2 通过吸入。</li>
		<li>将诱导室和面罩均连接至活性炭废气吸附装置，以保护操作人员。通过检测对有害刺激（如脚趾夹捏）无反应来确认麻醉深度是否充分。</li>
		<li>创建一个手术区域，包括一个带有等温垫的手术托盘，用于在手术期间提供保温支持。另需准备一个等温垫，用于动物在恢复笼中的保温支持。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>动物准备
	<ol>
		<li>在10至12周龄的雄性C57BL/6小鼠上进行以下实验。</li>
		<li>使用脱毛剂或装有40号刀头的电动剪毛器，去除动物从胸骨至腹股沟区域的腹部腹侧表面的毛发。
		<ol>
			<li>若使用脱毛剂，将该化合物涂抹于手术区域2-3分钟，然后用棉球擦除。我们使用市售的氢氧化钙与氢氧化钠混合化合物。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>用70%酒精对肩部区域进行消毒，使用25号或更细的针头皮下注射卡洛芬（5 mg/kg）。该处理可为动物提供术后镇痛。</li>
		<li>将动物转移至手术区域，并置于仰卧位。</li>
		<li>使用洁净的棉签或棉纱布蘸取8-12%聚维酮碘溶液擦拭手术区域进行消毒，随后用70%乙醇重复冲洗皮肤两次。</li>
		<li>在双眼内放置眼用润滑剂，以减少角膜干燥的发生。用无菌手术巾覆盖手术区域。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>手术技术
	<ol>
		<li>使用手术刀在剑突下方紧邻处开始，向骨盆方向延伸，做一长度约为2-2.5 cm的腹部正中切口。</li>
		<li>游离小肠和十二指肠，并向右侧牵拉。将一条无菌棉纱布条用无菌生理盐水浸湿后卷起，用于填塞内脏以改善术野暴露。</li>
		<li>将小肠移至腹腔右侧后，暴露腹膜后区域，并显露从左肾静脉至腹主动脉分叉处的腹主动脉。图1).</li>
		<li>使用无菌棉签，施加30次连续的碾压，每次持续5秒。</li>
		<li>取出包装物，使内脏恢复至自然位置。</li>
		<li>用4-0可吸收单丝缝线（聚对二氧环己酮）连续缝合筋膜。皮肤用6-0不可吸收单丝缝线（尼龙）连续缝合。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>恢复与术后护理
	<ol>
		<li>手术后，将动物置于铺有清洁垫料的恢复笼中，并放置于等温垫上继续提供体温支持，直至动物能够正常行走。在动物未表现出能够维持胸卧位之前，不得将其单独留下。</li>
		<li>术后每小时监测动物一次，持续4小时。待动物行走恢复正常后，将其送回指定的饲养室。在完全恢复之前，该动物不得与其他动物同笼饲养。</li>
		<li>术后前72小时内每日观察动物两次，此后每周至少观察三次。观察内容包括每周称重三次。</li>
		<li>术后前72小时内，每天两次皮下注射卡洛芬（5 mg/kg）。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 组织获取
<ol>
	<li>安乐死方法
	<ol>
		<li>在预定时间点对动物实施安乐死。</li>
		<li>使用精密挥发罐通过诱导舱输送100% O2和2.5%异氟烷以诱导麻醉。
		<ol>
			<li>为研究内皮完整性，向动物注射伊文思蓝染料。 
			注：伊文思蓝是一种带负电荷的偶氮染料，与白蛋白具有高亲和力，仅在内皮不完整时才能对血管进行染色6。</li>
			<li>对于内皮完整性研究，在实施安乐死时，以生理压力向动物灌注5 mL 0.3%伊文思蓝染料，随后以生理压力灌注5 mL磷酸盐缓冲液（PBS）持续5分钟。灌注过程中动物需维持在手术麻醉深度。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>达到深度麻醉后，行胸骨切开术打开胸腔。在右心房制造切口以允许血液流出，并用21 G针头穿刺左心室，注入磷酸盐缓冲液（PBS），直至右心房流出液变澄清。</li>
		<li>用PBS灌注后，通过腹正中切口进入腹腔。</li>
		<li>再次将小肠移至腹腔右侧，暴露肾下腹主动脉，锐性分离主动脉周围组织，并从左肾静脉至腹主动脉分叉处完整切除主动脉。</li>
		<li>将切除的主动脉保存于4%多聚甲醛溶液中，直至进行组织处理。
		<ol>
			<li>对于内皮完整性研究，将主动脉纵向切开，并用大头针固定于石蜡板上，充分暴露管腔内表面6。通过伊文思蓝染色程度对内皮完整性进行定性评估6。</li>
			<li>对于其他组织学检测，根据所采用的组织学方法要求，将主动脉横向切片并包埋于最佳切割温度（OCT）包埋剂中7。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+angiogenesis+and+arteriogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of angiogenesis and arteriogenesis.</a> Nat Med. 6 (4), 389-395 (2000).</li>
<li>Carmeliet, P., Moons, L., Collen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+angiogenesis%2C+arterial+stenosis%2C+atherosclerosis+and+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of angiogenesis, arterial stenosis, atherosclerosis and hemostasis.</a> Cardiovasc Res. 39 (1), 8-33 (1998).</li>
<li>Baker, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparanase+Alters+Arterial+Structure%2C+Mechanics%2C+and+Repair+Following+Endovascular+Stenting+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Heparanase Alters Arterial Structure, Mechanics, and Repair Following Endovascular Stenting in Mice.</a> Circ Res. 104 (3), 380-387 (2009).</li>
<li>Petrov, L., Laurila, H., Hayry, P., Vamvakopoulos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+aortic+angioplasty+for+genomic+studies+of+neointimal+hyperplasia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Res%22%5BJournal%5D)">A mouse model of aortic angioplasty for genomic studies of neointimal hyperplasia.</a> J Vasc Res. 42 (4), 292-300 (2005).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+cells+of+recipient+origin+mediate+intimal+expansion+after+aortic+allotransplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Path%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle cells of recipient origin mediate intimal expansion after aortic allotransplantation in mice.</a> Am J Path. 158 (6), 1943-1947 (2001).</li>
<li>Radu, M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+assay+to+test+blood+vessel+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An in vivo assay to test blood vessel permeability.</a> J Vis Exp. (73), e50062(2013).</li>
<li>Turbett, G. R., Sellner, L. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+optimal+cutting+temperature+compound+can+inhibit+amplification+by+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Mol+Pathol%22%5BJournal%5D)">The use of optimal cutting temperature compound can inhibit amplification by polymerase chain reaction.</a> Diagn Mol Pathol. 6 (5), 298-303 (1997).</li>
<li>Puchtler, H., Waldrop, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+mechanism+of+Verhoeff%27s+elastica+stain%3A+a+convenient+stain+for+myelin+sheaths%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem%22%5BJournal%5D)">On the mechanism of Verhoeff's elastica stain: a convenient stain for myelin sheaths.</a> Histochem. 62 (3), 233-247 (1979).</li>
<li>Salic, A., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+method+for+fast+and+sensitive+detection+of+DNA+synthesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A chemical method for fast and sensitive detection of DNA synthesis in vivo.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (7), 2415-2420 (2008).</li>
<li>Nelson, P. R., Yamamura, S., Mureebe, L., Itoh, H., Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smooth+muscle+cell+migration+and+proliferation+are+mediated+by+distinct+phases+of+activation+of+the+intracellular+messenger+mitogen-activated+protein+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">Smooth muscle cell migration and proliferation are mediated by distinct phases of activation of the intracellular messenger mitogen-activated protein kinase.</a> J Vasc Surg. 27 (1), 117-125 (1998).</li>
<li>Rzucidlo, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+pathways+regulating+vascular+smooth+muscle+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular%22%5BJournal%5D)">Signaling pathways regulating vascular smooth muscle cell differentiation.</a> Vascular. 17, Suppl 1. S15-S20 (2009).</li>
<li>Aoki, T., Sumii, T., Mori, T., Wang, X., Lo, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier+disruption+and+matrix+metalloproteinase-9+expression+during+reperfusion+injury%3A+mechanical+versus+embolic+focal+ischemia+in+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier disruption and matrix metalloproteinase-9 expression during reperfusion injury: mechanical versus embolic focal ischemia in spontaneously hypertensive rats.</a> Stroke. 33 (11), 2711-2717 (2002).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MARCKS+Signaling+Differentially+Regulates+Vascular+Smooth+Muscle+and+Endothelial+Cell+Proliferation+through+a+KIS-%2C+p27kip1-+Dependent+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">MARCKS Signaling Differentially Regulates Vascular Smooth Muscle and Endothelial Cell Proliferation through a KIS-, p27kip1- Dependent Mechanism.</a> PLoS One. 10 (11), e0141397(2015).</li>
<li>Banai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+ear+model+of+injury-induced+arterial+smooth-muscle+cell-proliferation+-+kinetics%2C+reproducibility%2C+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Rabbit ear model of injury-induced arterial smooth-muscle cell-proliferation - kinetics, reproducibility, and implications.</a> Circ Res. 69 (3), 748-756 (1991).</li>
</ol>

本工作由美国退伍军人事务部职业发展奖（1IK2BX001553-01）（TSM）和血管治愈基金会E. J. Wylie奖学金（TSM）资助。

我们表征了一种小鼠主动脉损伤模型的作用，该模型可导致中膜增生和内皮屏障功能障碍。沿主动脉内膜部分内皮细胞脱落，伴随细胞间接触丧失以及细胞突起增强。相应地，内皮屏障功能显著受损，从而激活了有丝分裂原敏感的信号通路，导致血管平滑肌细胞增殖和血管壁增厚。该模型的优点在于，相较于其他主动脉疾病模型，其技术上更易于学习和操作，并且能够同时评估损伤后的增殖反应和内皮功能。本方案中的关键步骤是实际的挤压损伤操作。挤压损伤程度的差异可能导致损伤程度不同，从而引起平滑肌细胞增殖量的差异。在我们实验室中，减少这种变异性的一步措施是由一名对处理方式或实验条件设盲的科研人员完成全部的挤压损伤操作。
该模型的一个局限性在于其对临床相关人类疾病过程的可推广性。尽管在此模型中，血管平滑肌细胞（VSMCs）表现出早期强烈的增殖反应，但它并未模拟再狭窄的晚期事件，即未形成新生内膜。炎症介质（如细胞因子）的减少可能调控了这一过程。该现象可能是由于内皮在部分损伤后迅速恢复所致。类似于先前报道的兔血管挤压损伤模型13，免疫细胞的浸润程度较轻。在本研究中，我们利用细胞因子谱分...

再狭窄 在心血管手术（如旁路手术、血管成形术或支架植入术）后，再狭窄是一个严重影响这些手术长期疗效的重要问题。所有血运重建手术均受到再狭窄的困扰。目前预防再狭窄的策略（如药物洗脱支架和药物涂层球囊）会同时抑制血管平滑肌细胞（VSMC）和内皮细胞（EC）的增殖。因此，这些干预措施虽然可防止由VSMC介导的再狭窄，但同时也阻碍了内皮层的再生。若缺乏完整的内皮层，患者必须长期使用强效抗血小板药物，以降低原位血栓形成的风险，但随之而来的出血并发症风险亦随之增加。理想的治疗方法应在抑制VSMC增殖的同时促进内皮再生。因此，有必要同时研究VSMC增殖和内皮屏障功能n 体内.
目前已有多种小鼠再狭窄模型1，包括颈动脉结扎和股动脉导丝损伤模型2。主动脉模型则包括支架植入3、球囊损伤4以及主动脉异体移植5。然而，现有所有模型均存在局限性。颈动脉结扎主要产生血流介导的新生内膜病变，但缺乏内皮损伤。此外，颈动脉和股动脉的细胞层数远少于人类血管，限制了其临床转化价值。小鼠主动脉直径约为1.3 mm，是唯一在尺寸上接近临床相关（冠状动脉）人类动脉的血管（3）。
尽管小鼠主动脉疾病模型具有一定的转化潜力，但现有模型存在局限性。这些模型需要高超的显微外科技术以及血管成形术球囊、支架等专用设备。本文中，我们介绍一种新颖且可重复的技术，可同时诱导血管平滑肌细胞增殖并破坏内皮屏障功能。

<table><tbody><tr><td>眼部润滑剂</td><td>Dechra</td><td>17033-211-38</td><td>药物制剂</td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>VetOne</td><td>502017</td><td>药物制剂</td></tr><tr><td>卡洛芬</td><td>Zoetis</td><td>26357</td><td>药物制剂</td></tr><tr><td>精密蒸发器</td><td>Summit Medical</td><td>10675</td><td>手术用品</td></tr><tr><td>活性炭吸附装置</td><td>Bickford Inc.</td><td>80120</td><td>手术用品</td></tr><tr><td>等温垫</td><td>Harvard Apparatus</td><td>50-7053-R</td><td>手术用品</td></tr><tr><td>无菌棉签</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-124</td><td>手术用品</td></tr><tr><td>4-0 可吸收单丝缝线&amp;nbsp;</td><td>Ethicon, Inc</td><td>J310</td><td>手术用品</td></tr><tr><td>5-0 不可吸收单丝缝线</td><td>Ethicon,Inc</td><td>1666</td><td>手术用品</td></tr><tr><td>21 号 × 1 英寸针头</td><td>BD Biosciences</td><td>305165</td><td>手术用品</td></tr><tr><td>25 号 × 1 英寸&amp;nbsp;针头</td><td>BD Biosciences</td><td>305125</td><td>手术用品</td></tr><tr><td>干式灭菌器</td><td>Cellpoint&amp;nbsp;</td><td>7770</td><td>手术用品</td></tr><tr><td>精细剪刀</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-09</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>艾德森镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11006-12</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>杜蒙特 #5 精细镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>万纳斯弹簧剪刀，3 mm 刃口</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>持针器</td><td>Fine Science Tools</td><td>91201-13</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>手术刀柄 #4</td><td>Fine Science Tools</td><td>10004-13</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>手术刀片 #10</td><td>Fine Science Tools</td><td>10010-00</td><td>手术器械</td></tr><tr><td>PBS&amp;nbsp;</td><td>Lonza</td><td>17-516F</td><td>组织处理试剂</td></tr><tr><td>伊文思蓝</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E2129</td><td>组织处理试剂</td></tr><tr><td>多聚甲醛</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td>组织处理试剂</td></tr><tr><td>模型蜡</td><td>Bego</td><td>40001</td><td>组织处理试剂</td></tr><tr><td>OCT 包埋剂</td><td>Tissue-Tek Sakura</td><td>4583</td><td>组织处理试剂</td></tr><tr><td>梅耶苏木精染液</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MHS16</td><td>免疫组织化学分析试剂</td></tr><tr><td>醇溶性伊红 Y 染液&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT110316</td><td>免疫组织化学分析试剂</td></tr><tr><td>弹性蛋白染色试剂盒</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT25A</td><td>免疫组织化学分析试剂</td></tr><tr><td>Click-it Edu Alexa-488 成像试剂盒</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>免疫组织化学分析试剂</td></tr><tr><td>抗 Erk1/2 抗体</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>4695</td><td>免疫组织化学分析试剂</td></tr><tr><td>抗磷酸化 Erk1/2 抗体</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>4370</td><td>免疫组织化学分析试剂</td></tr><tr><td>抗 p27kip1 抗体</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>3698</td><td>免疫组织化学分析试剂</td></tr><tr><td>三氯乙酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T9159</td><td>免疫组织化学分析试剂</td></tr></tbody></table>

小鼠主动脉压榨损伤：一种高效的 体内 平滑肌细胞增殖与内皮功能研究模型

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

动脉重建（无论是血管成形术还是旁路手术）均涉及医源性损伤，导致内皮破坏和血管平滑肌细胞（VSMC）增殖。常用的小鼠模型通常研究颈动脉和股动脉等小血管。本文描述了一种可在大血管中同时评估VSMC增殖和内皮屏障功能的体内系统。我们研究了C57BL/6小鼠肾下主动脉对损伤的反应。使用棉签尖端从左肾静脉至主动脉分叉处对主动脉进行30次贯穿全层的挤压损伤，每次持续5秒。通过常规组织学方法评估形态学变化。主动脉壁厚度从管腔表面测量至外膜。采用EdU掺入法，并结合DAPI和α-肌动蛋白复染，以显示VSMC增殖。通过Western Blot分析检测已知调节内膜增生形成的ERK1/2的激活情况。通过B细胞、T细胞和巨噬细胞的免疫组织化学染色评估炎症的影响。En face内皮切片通过扫描电子显微镜（SEM）观察。内皮屏障功能通过伊文思蓝染色进行测定。贯穿全层损伤导致主动脉壁增厚。该损伤诱导VSMC增殖，以损伤后第3天最为显著，并伴随ERK1/2的早期激活及p27kip1表达下降。损伤未引起血管壁内B细胞、T细胞或巨噬细胞浸润增加。损伤导致部分内皮细胞剥脱及细胞间连接丧失。损伤引起内皮屏障功能显著下降，但在7天后恢复至基线水平。小鼠贯穿全层钝性主动脉损伤模型为在大血管中同时研究VSMC增殖和内皮屏障功能提供了一个高效的系统。

将包埋于OCT中的主动脉进行横切，切片后采用苏木精-伊红染色，再用Verhoeff-Van Gieson（VVG）染色复染，以识别内弹力板和外弹力板7。与仅接受假手术处理（仅行剖腹术和小肠游离）的动物相比，挤压伤导致主动脉壁增厚。通过测量从外膜至管腔的距离评估管壁厚度，损伤后第3天管壁最厚（42.2 ± 1.7 µm vs. 22.1 ± 1.1 µm，仅剖腹术组）（图2A-B）。损伤还导致细胞形态更趋圆形，管腔表面轮廓不规则（图2C）。
损伤主动脉的管壁增厚至少部分由中膜血管平滑肌细胞增殖增加所介导。为了证实管壁增厚是由细胞增殖增加所致，而非细胞肥大，我们采用了EdU增殖检测。在此检测中，于小鼠安乐死前24小时经静脉给予胸腺嘧啶类似物5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）。EdU在DNA合成过程中被整合入DNA。通过点击化学反应（使用绿色...

心血管手术（如搭桥手术、血管成形术或支架植入术）后发生的再狭窄是一个严重影响手术长期效果的重要问题。理想的治疗方法应在抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的同时，促进内皮层的再生。本文介绍了一种可在体内同时评估VSMC增殖和内皮功能的模型。

动脉重建，无论是血管成形术还是旁路手术，均涉及医源性损伤，导致内皮破坏和血管平滑肌细胞……

本实验的总体目标是建立一种动物模型，用于同时评估血管平滑肌细胞增殖和再内皮化过程。该方法有助于回答血管生物学领域中的关键问题，例如：血管干预后发生再狭窄的机制是什么？该技术可实现对血管平滑肌细胞增殖和再内皮化过程的同步体内评估。这两个关键事件均能增强或减轻血管介入治疗后血管再狭窄的程度。本实验操作由本实验室的博士后研究员 Dr.Dan Yu 演示。在确认小鼠对脚趾夹捏无反应后，将一只10至12周龄的雄性C57BL/6小鼠腹部从胸骨至腹股沟区域的腹侧毛发去除。接下来用70%乙醇对肩部区域进行消毒，并使用25号或更小的针头给予适当的镇痛剂。然后将动物置于由等温垫加热的手术托盘上，呈仰卧位。用聚维酮碘或氯己定对手术部位进行擦洗，再用酒精冲洗。重复上述两个步骤两次。将药膏涂抹于动物的眼睛。行腹部正中切口开腹后，将小肠和十二指肠向右侧横向牵开。使用新的棉签暴露从左肾静脉至腹主动脉分叉处的腹膜后腔和腹主动脉。然后使用另一支无菌棉签对腹主动脉进行连续30次、每次5秒的压榨损伤。完成最后一次压榨损伤后，移除棉卷并使内脏恢复至其原始位置。然后使用编织的可吸收缝线缝合筋膜，再用连续的6-0不可吸收单丝缝线缝合皮肤，并将动物置于铺有清洁垫料的恢复笼中，持续监测直至完全恢复卧位。为分析受损心肌组织的内皮完整性，在适当的实验时间点，将21号针头插入放血后心脏的左心室。注入PBS，直至右心房流出液变澄清，然后在五分钟内以生理压力灌注5毫升0.3%伊文思蓝染料，随后再灌注5毫升新鲜PBS。在 PBS 灌注结束时，沿腹壁正中线切开腹腔，并将小肠移至腹腔右侧（如前所示），以暴露肾下腹主动脉。锐性分离腹主动脉与其周围组织，从左肾静脉至腹主动脉分叉处完整切除血管，并将其保存于 4% 多聚甲醛中。固定结束后，沿纵轴切开腹主动脉，将组织平铺并固定于石蜡板上，充分暴露管腔内表面，通过伊文思蓝染料染色程度对内皮完整性进行定性评估。挤压伤导致主动脉壁增厚，与假手术处理动物的主动脉相比，损伤后第3天观察到最显著的管壁厚度增加。损伤还导致细胞呈现圆形，腔面轮廓相应变得不规则。EdU掺入实验表明，损伤主动脉的管壁增厚至少部分由中膜血管平滑肌细胞增殖增加所介导。伤后三天，磷酸化 Erk1/2 的表达水平较基线升高超过 200%，同时在早期时间点检测到 p27Kip1 表达下降。伤后一个月，磷酸化 Erk1/2 和 p27Kip1 的表达均恢复至基线水平，提示所观察到的主动脉壁增厚部分归因于中膜细胞增殖增加。通过扫描电子显微镜评估，主动脉腔面受到挤压损伤后导致内皮细胞破坏及内皮层部分剥脱。此外，内皮屏障功能受损后，伊文思蓝染料可渗入并染色基底膜，而仅接受剖腹手术处理的小鼠内皮仍保持其屏障功能，呈现白色外观。熟练掌握后，若操作得当，该技术可在20分钟内完成。在实施该操作时，需注意保持作用于主动脉的力度一致，并对操作的

murine-aortic-crush-injury-an-efficient-vivo-model-smooth-muscle-cell

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

小鼠主动脉夹层损伤：高效<em&gt;体内</em&gt;平滑肌细胞增殖和内皮功能模型

我们展示了一种新型的小鼠斜方肌动脉结扎模型，包括逐步操作流程及所需仪器设备的详细说明。我们描述了手术过程以及与血管网络重塑和功能性血管舒张相关的结果测量方法，这些方法结合了活体显微成像和共聚焦显微镜技术。...

小鼠脊柱-斜方肌模型评估小动脉结扎对微血管功能与重塑的影响

本文描述了一种小鼠颈动脉支架植入模型。与其他类似方法相比，该手术操作极为快速、简便且易于实施，能够方便地研究血管壁对不同药物洗脱支架的反应以及再狭窄的分子机制。...

用于研究再狭窄的颈动脉支架植入小鼠模型

动脉瘤腔内移植物隔绝术后组织学和生物化学的改变仍不明确。我们描述了一种在小鼠动脉瘤模型上进行腔内移植物植入的新方法。通过分析血栓形成情况（包括存在或不存在持续血液循环界面的情况）以及评估新型血管内生物材料，该模型将有助于更深入地理解血管内动脉瘤隔绝术的病理生物学机制。...

一种新的小鼠血管内腹主动脉瘤修复模型

了解动脉去内皮损伤后重新内皮化过程的细胞和分子机制，对于预防动脉血栓形成和再狭窄至关重要。本文介绍了一种可重复的肾下腹主动脉去内皮损伤造模方案。该方法旨在利用小鼠模型研究调控内皮再生的潜在机制。...

通过小鼠肾下腹主动脉夹闭实现可重复的动脉去内膜损伤

利用小鼠胚胎期及围产期主动脉进行研究的实验方案 体内...

使用 在体 内 研究胚胎期和围产期主动脉形态发生与发病机制的组织与细胞外植体方法

本文展示了一种小鼠模型，用于研究主动脉球囊损伤后肌性内膜增生（MH）的发展过程。...

基于球囊损伤诱导小鼠腹主动脉内膜增生

本文介绍了一种使用不透射线的含铅硅橡胶灌注小鼠血管系统的详细方法，用于在主动脉瘤和主动脉夹层小鼠模型中定量测定主动脉直径。...

利用微计算机断层扫描对β-氨基丙腈诱导的小鼠主动脉瘤与主动脉夹层疾病模型进行定量分析

本文介绍了一种在小鼠颈部分异位主动脉移植模型中应用无缝合套管技术的小鼠异位主动脉移植方案。该模型可用于研究慢性移植物血管病变（CAV）的潜在病理机制，并有助于评估新的治疗药物以预防其发生。...

采用改良无缝合套管技术的小鼠颈动脉主动脉移植模型

我们描述了一种手术方案，可稳定地在小鼠体内诱导形成显著的降胸主动脉瘤。该操作包括左侧开胸、暴露胸主动脉，并将浸有猪胰弹性蛋白酶的海绵放置于主动脉壁上。...

小鼠局部弹性蛋白酶诱导降胸主动脉瘤外科模型

本方案介绍了一种通过单次手术操作在小鼠模型中诱导颈动脉瘤的标准外科方法。...

一种颈动脉瘤形成的鼠类模型

本文介绍了一种用于股动脉吻合的鼠类模型，为研究人员提供了一个有价值的动物模型，可用于研究和模拟血管吻合口狭窄。该模型的建立对于深入理解该疾病的病理生理机制，以及推动血管疾病更准确、更有效的研究具有重要意义。...

小鼠股动脉吻合性狭窄模型的建立

了解小鼠主动脉夹层损伤模型，用于同时评估血管平滑肌细胞增殖与内皮再生功能。该体内方法有助于研究血管介入后再狭窄机制，为开发新型治疗策略提供重要实验基础。

小鼠主动脉压榨损伤：一种高效的体内平滑肌细胞增殖与内皮功能研究模型

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小鼠主动脉压榨损伤：一种高效的 体内 平滑肌细胞增殖与内皮功能研究模型

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