Name: 小鼠淋巴细胞通过标签 64的Cu-抗体受体靶向用于体内由PET / CT细胞运输 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: 了解使用铜修饰放射性单克隆抗体稳定标记小鼠淋巴细胞的方法，通过PET/CT成像追踪淋巴细胞在体内的时空分布和归巢模式。该技术可在炎症或癌症小鼠模型中实现高对比度细胞迁移成像，且对细胞活性影响极小。

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作者感谢 Julia Mannheim 博士、Walter Ehrlichmann、Ramona Stumm、Funda Cay、Daniel Bukala、Maren Harant 以及 Natalie Altmeyer 在实验和数据分析过程中提供的支持。本研究得到了维尔纳·西门子基金会、德国研究基金会（通过 SFB685 项目 B6）和 Fortüne（2309-0-0）的资助。

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作者无任何利益冲突需要披露。

本方案介绍了一种稳定标记细胞放射性同位素的可靠且简便的方法 体内 通过PET进行追踪。利用该方法，分离并扩增cOVA-TH1细胞 体外 来自供体小鼠的细胞，可用放射性同位素标记 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb 的归巢被追踪至肺部和胸腺周围淋巴结，这些部位是cOVA诱导的急性气道迟发型超敏反应（DTHR）中cOVA呈递的位点。
使用螯合剂对单克隆抗体（mAb）进行修饰时，需要快速高效地操作，并使用不含胺类痕量杂质的超纯溶液。为确保DOTA-NHS活性酯能够有效与mAb的胺基残基结合，所有溶液均经过螯合离子交换树脂处理。与非特异性细胞标记试剂相比，将螯合剂偶联的mAb作为细胞内放射性标记物具有多项优势。首先，mAb具有优异的特异性，可实现对特定细胞群体的靶向标记。mAb本身无细胞毒性，对细胞的存活率或功能无不良影响。其次，细胞内放射性外排显著减少，从而提高了PET图像的信噪比17,24。通过选择具有不同...

非侵入性细胞追踪是一种多功能工具，可用于在体内监测细胞功能、迁移和归巢。in vivo。近期的细胞追踪研究主要集中在再生医学中的间充质1,2或骨髓来源的干细胞3、炎症中的自体外周白细胞，以及用于癌症过继性细胞治疗的T淋巴细胞3,4。阐明基于细胞治疗的作用位点及其背后的生物学原理具有重要意义。CD8+细胞毒性T淋巴细胞、基因工程改造的嵌合抗原受体（CAR）T细胞或肿瘤浸润性淋巴细胞（TILs）被广泛视为金标准。然而，肿瘤相关抗原特异性的TH1细胞已被证明是一种有效的替代治疗选择4,5,6,7。
作为炎症、器官特异性自身免疫性疾病（例如，类风湿性关节炎或支气管哮喘）以及癌症免疫治疗中备受关注的细胞，TH1细胞的时间分布和归巢模式的表征至关重要。通过PET进行的非侵入性体内成像是一种定量且高度敏感的方法8，可用于研究细胞迁移模式、体内归巢过程，以及T细胞在炎症、过敏、感染或肿瘤排斥反应中的作用部位和应答情况9,10,11。
临床上， 111铟-草酰胺肟（In-oxine）用于白细胞闪烁显像，以鉴别炎症与感染12，而2-脱氧-2-(18F)氟代-D-葡萄糖（18F-FDG 常用于PET细胞示踪研究3,13然而，这种PET示踪剂的一个主要缺点是放射性核素的半衰期较短 18在过继性细胞转移后较晚时间点成像时，由于脂肪酸在109.7分钟时的信号衰减以及细胞内稳定性较低，限制了成像效果。对于长期 体内 尽管在细胞中不稳定，但可通过PET进行细胞示踪研究 64Cu-PTSM 常用于非特异性标记细胞14,15 对T细胞活力和功能的不利影响降至最低16.
本方案描述了一种利用T细胞受体（TCR）特异性放射性标记单克隆抗体（mAb）进一步降低对细胞活力和功能不利影响的方法。首先，介绍了放射性同位素64Cu的制备过程、将单克隆抗体KJ1-26与螯合剂DOTA偶联，以及随后的64Cu放射性标记步骤。其次，详细描述了来自DO11.10供体小鼠的cOVA-TH1细胞的分离与扩增，以及使用负载64Cu的DOTA偶联单抗KJ1-26（64Cu-DOTA-KJ1-26）对细胞进行放射性标记的过程。文中还展示了通过剂量校准仪测定放射性摄取值、通过γ计数测定放射性外排情况，以及利用台盼蓝排斥法评估64Cu放射性标记对细胞活力的影响、通过IFN-γ ELISA评估细胞功能性的方法。为实现非侵入性的体内细胞示踪，进一步描述了构建cOVA诱导的急性气道迟发型超敏反应（DTHR）小鼠模型、过继性细胞转移后采用PET/CT进行成像的操作流程。
此外，这种标记方法可应用于不同的疾病模型、具有不同TCR的小鼠T细胞，或具有膜结合受体或持续膜穿梭相关的表达标志物的其他目标细胞17。

<table><tbody><tr><td>HCl，超纯级</td><td>Merck，德国达姆施塔特</td><td>1.00318</td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>甲醇，超纯级</td><td>Merck，德国达姆施塔特</td><td>1.06007</td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>异丙醇，超纯级</td><td>Merck，德国达姆施塔特</td><td>1.0104</td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>Pt/Ir（90/10）板</td><td>&amp;Ouml;gussa</td><td>定制</td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>PEEK 反应室</td><td>WKL</td><td>定制</td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Ni</td><td>Chemotrade</td><td></td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>Polygram SIL G/UV 254 薄层板</td><td>Macherey-Nagel</td><td>805021</td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>离子交换柱</td><td>BioRad</td><td>AG1-X8</td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>PETtrace 固体靶系统</td><td>WKL</td><td>定制</td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 后处理模块</td><td>WKL</td><td>定制</td><td>&lt;sup&gt;64&lt;/sup&gt;Cu 制备</td></tr><tr><td>放射性活度计</td><td>Capintec</td><td>CRC-25R</td><td></td></tr><tr><td>PETtrace 回旋加速器</td><td>通用电气医疗系统</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DOTA-NHS</td><td>Macrocyclics</td><td>B-280</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>抗 cOVA-TCR 抗体（KJ1-26）</td><td></td><td>由杂交瘤细胞培养分离</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71633</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>H&lt;sup&gt;+&lt;/sup&gt; Chelex 100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7901</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-15 滤膜离心管</td><td>Merck Millipore</td><td>UFC910008</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>Rotipuran 超纯水</td><td>Carl Roth</td><td>HN68.3</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>乙酸铵</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>32301</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>PBS</td><td>蒂宾根大学</td><td></td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>Micro Bio-spin P-6 层析柱</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>7326221</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>柠檬酸钠</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71497</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>Cyclone Plus 磷光成像仪&amp;nbsp;</td><td>Perkin-Elmer</td><td>L2250116</td><td>DOTA 偶联</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Merck Millipore</td><td>102568</td><td>T 细胞培养基组分&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>FCS</td><td>Merck Millipore</td><td>S0115/1004B</td><td>T 细胞培养基组分&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>丙酮酸钠</td><td>Merck Millipore</td><td>L0473</td><td>T 细胞培养基组分&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>MEM 氨基酸</td><td>Merck Millipore</td><td>K0293</td><td>T 细胞培养基组分&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>HEPES&amp;nbsp;</td><td>Merck Millipore</td><td>L 1613</td><td>T 细胞培养基组分&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>&amp;nbsp;青霉素/链霉素</td><td>Merck Millipore</td><td>A2212</td><td>T 细胞培养基组分&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>0.05 mM 2-&amp;beta;-巯基乙醇</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td>T 细胞培养基组分&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>DO11.10 小鼠</td><td></td><td>本单位繁育</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Gibco</td><td>14190144</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>40 &amp;micro;m 细胞筛&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>352340</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>ACK 裂解缓冲液</td><td>Lonza</td><td>10-548E</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>CD4 微珠，小鼠</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-097-145</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>QuadroMACS 分离器</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-090-976</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>LS 柱</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-042-401</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>抗 CD4 抗体（Gk1.5）</td><td></td><td>由杂交瘤细胞培养分离</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>抗 CD8 抗体（5367.2）</td><td></td><td>由杂交瘤细胞培养分离</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>抗大鼠抗体（MAR18.5）</td><td></td><td>由杂交瘤细胞培养分离</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>兔补体 MA</td><td>tebu-Bio</td><td>CL3221</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>抗 IL-4 抗体（11B11）</td><td></td><td>由杂交瘤细胞培养分离</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>cOVA 323-339 肽&amp;nbsp;</td><td>EMC-micro-collections</td><td>定制订购</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>CPG1668 寡核苷酸</td><td>Eurofins MWG Operon</td><td>定制订购</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>IL-2</td><td>诺华</td><td>65483-116-07</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>96 孔板</td><td>Greiner&amp;nbsp;</td><td>655180</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>24 孔板</td><td>Greiner&amp;nbsp;</td><td>662160</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>细胞培养瓶</td><td>Greiner&amp;nbsp;</td><td>660175</td><td>TH1 细胞培养</td></tr><tr><td>48 孔板</td><td>Greiner&amp;nbsp;</td><td>677 180</td><td>细胞标记</td></tr><tr><td>Gammacell 1000</td><td>Best Theratronics</td><td>&lt;em&gt;通过&lt;/em&gt; 咨询&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Gulmay RT225</td><td>Gulmay</td><td>&lt;em&gt;通过&lt;/em&gt; 咨询&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>台盼蓝</td><td>Merck Millipore</td><td>L6323</td><td>&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt; 评估</td></tr><tr><td>小鼠 IFN-&amp;gamma; ELISA</td><td>BD Biosciences</td><td>558258</td><td>&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt; 评估</td></tr><tr><td>PE Annexin V 凋亡检测试剂盒&amp;nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>559763</td><td>&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt; 评估</td></tr><tr><td>5 mL 管</td><td>Sarstedt</td><td>55.476</td><td>&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt; 评估</td></tr><tr><td>圆底管&amp;nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>352008</td><td>&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt; 评估</td></tr><tr><td>Wizard &amp;gamma; 计数器</td><td>Perkin-Elmer</td><td>2480-0010</td><td>&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt; 评估</td></tr><tr><td>ELISA 读板仪 MultiscanEX</td><td>赛默飞世尔科技</td><td>51118177</td><td>&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt; 评估</td></tr><tr><td>显微镜</td><td>Leica</td><td>&lt;em&gt;通过&lt;/em&gt; 咨询&amp;nbsp;</td><td>&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt; 评估</td></tr><tr><td>BD LSRII&amp;nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>&lt;em&gt;通过&lt;/em&gt; 咨询&amp;nbsp;</td><td>&lt;em&gt;体外&lt;/em&gt;评估</td></tr><tr><td>BALB/c 小鼠</td><td>查尔斯河</td><td>028</td><td>&lt;em&gt;体内&lt;/em&gt; 细胞迁移</td></tr><tr><td>氢氧化铝凝胶</td><td>Serva Electrophoresis</td><td>12261.01</td><td>&lt;em&gt;体内&lt;/em&gt; 细胞迁移</td></tr><tr><td>赛拉嗪</td><td>Bayer HealthCare</td><td>通过大学医院订购&lt;em&gt;通过&lt;/em&gt; 大学医院</td><td>&lt;em&gt;体内&lt;/em&gt; 细胞迁移</td></tr><tr><td>氯胺酮</td><td>Ratiopharm</td><td>通过大学医院订购&lt;em&gt;通过&lt;/em&gt; 大学医院</td><td>&lt;em&gt;体内&lt;/em&gt; 细胞迁移</td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>CP-Pharma</td><td>通过大学医院订购&lt;em&gt;通过&lt;/em&gt; 大学医院</td><td>&lt;em&gt;体内&lt;/em&gt; 细胞迁移</td></tr><tr><td>30 G 针头</td><td>BD Biosciences</td><td>304000</td><td>&lt;em&gt;体内&lt;/em&gt; 细胞迁移</td></tr><tr><td>注射器</td><td>BD Biosciences</td><td>11612491</td><td>&lt;em&gt;体内&lt;/em&gt; 细胞迁移</td></tr><tr><td>10 &amp;micro;L 毛细管</td><td>VWR</td><td>612-2439</td><td></td></tr><tr><td>Inveon PET 扫描仪</td><td>西门子医疗</td><td>已停产</td><td>&lt;em&gt;体内&lt;/em&gt; 细胞迁移，替代厂商：Bruker，Mediso&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Inveon SPECT/CT 扫描仪</td><td>西门子医疗</td><td>已停产</td><td>&lt;em&gt;体内&lt;/em&gt; 细胞迁移</td></tr><tr><td>Inveon 研究工作站</td><td>西门子医疗</td><td></td><td>图像分析，替代软件：Pmod</td></tr></tbody></table>

小鼠淋巴细胞标记 64铜-抗体受体靶向 在体实验 细胞迁移的pet/ct成像

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

本方案阐述了64Cu的制备、单克隆抗体（mAb）的螯合剂偶联与放射性标记，随后进行小鼠淋巴细胞培养以及64Cu-抗体对细胞表面受体的靶向结合。体外评估放射性标记物的性质，并通过PET/CT在气道迟发型超敏反应（DTHR）动物模型中进行非侵入性的体内细胞示踪。 
详细展示了单克隆抗体与螯合剂1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸（DOTA）的偶联过程。在放射性标记之前 64Cu，描述了DOTA偶联单克隆抗体的放射性标记。接着，描述了鸡卵清蛋白（cOVA）特异性CD4+ 分泌干扰素（IFN）-γ的辅助性T细胞（cOVA-TH1）及其后续对cOVA-TH1细胞的放射性标记如图所示。多种 体外 技术用于评估以下影响 64细胞的铜放射性标记，例如通过台盼蓝排斥法测定细胞活力、使用Annexin V进行流式细胞术检测凋亡，以及通过干扰素-γ酶联免疫吸附试验（ELISA）评估细胞功能。此外，文中详细描述了细胞对放射性物质的摄取及标记稳定性的测定方法。本方案还介绍了如何在气道迟发型超敏反应（DTHR）动物模型中开展细胞示踪研究，因此包含了在BALB/c小鼠中诱导cOVA诱导的急性气道DTHR的方法。最后，提供了一套完整的PET/CT工作流程，涵盖图像采集、重建与分析。
这 64铜-抗体受体靶向方法通过受体的后续内化作用，与常用的细胞标记PET示踪剂相比，具有更高的特异性和稳定性，细胞毒性更低，外排速率更小。 例如64铜-丙酮醛双(N4-甲基缩硫脲)64Cu-PTSM)。最后，我们的方法实现了非侵入性 体内 通过PET/CT进行细胞追踪，可在48小时内实现最佳的信噪比。该实验方法可推广应用于具有可内化膜结合受体的不同动物模型和细胞类型。

图1 总结了用cOVA-TH1细胞标记的 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb 及实验设计 体外 和 体内 本方案涵盖的研究。
<img alt="放射性标记流程图：从CD4+ T细胞分离到PET/CT分析用于受体研究" src="/files/ftp_upload/55270/55270fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图1"> 
图1： 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb 标记过程 &amp; 实验设计 (A放射性细胞标记的示意图 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb。该 64Cu-DOTA-KJ1-26-mAb 与 TH1 细胞表面...

在完成制备后 64铜修饰的单克隆抗体结合转基因小鼠T细胞受体，T细胞被放射性标记 体内，进行细胞活力、功能、标记稳定性及凋亡分析后，过继转移至具有气道迟发型超敏反应的小鼠体内，通过正电子发射断层扫描/计算机断层扫描（PET/CT）进行无创成像。

小鼠淋巴细胞标记 64铜-抗体受体靶向 在体实验 细胞迁移的PET/CT成像

本方案阐述了64Cu的制备，以及单克隆抗体（mAb）的螯合剂偶联/放射标记及其后续在小鼠淋巴细胞中的应用……

本实验的总体目标是利用铜修饰的放射性单克隆抗体稳定地标记小鼠淋巴细胞，通过在炎症或癌症小鼠模型中进行PET/CT成像，追踪淋巴细胞在体内的时序分布及归巢模式。该方法有助于阐明基于细胞的治疗方法（如再生医学中的干细胞治疗或癌症免疫治疗）的作用位点及其关键的生物学机制。该技术的主要优势在于，可在对细胞造成最小不利影响的情况下，实现长达48小时的细胞迁移高对比度成像。该方法可轻松转移至任何具有特定膜结合受体及相应单克隆抗体的细胞类型。通常，初次接触该方法的研究人员可能在螯合剂偶联和放射性标记过程中遇到困难，导致免疫反应性分数降低以及细胞特异性活性下降。首先用70%乙醇对DO11.10小鼠进行消毒。然后用胶带固定四肢，沿动物腹部做一正中切口。将切口两侧向外侧拉开，分离皮肤与腹膜，找到颈、腋窝、臂部和腹股沟淋巴结。用钝头镊子将淋巴结转移至含有1%FCS的PBS容器中。然后切开腹膜，将脾脏与胰腺及结缔组织分离，并连同淋巴结一起保存脾脏。当所有组织收集完毕后，将样本转移至装有40微米滤膜的15毫升锥形管中，并用注射器活塞研磨组织。随后用10毫升含FCS的PBS冲洗滤膜，通过离心收集单细胞悬液。裂解红细胞后，根据制造商说明书，将白细胞沉淀重悬于新鲜的含FCS和CD4阳性MicroBeads的PBS中。在4摄氏度孵育20分钟后，用最多50毫升的新鲜含FCS PBS缓冲液洗涤细胞，并将细胞重悬于适量体积的含FCS PBS中，用于磁珠柱分离法去除CD4阴性细胞群。将细胞上样至磁性细胞分离柱中，收集穿流液至15毫升锥形管中。磁性细胞分离结束后，使用推杆将CD4阳性细胞群冲洗至新的锥形管中，并用新鲜完全培养基将分离得到的CD4阳性T细胞悬液浓度调整为每毫升1×10⁶个细胞，于4°C保存。通过离心收集CD4阴性细胞。将细胞沉淀重悬于抗CD4、抗CD8、鼠抗大鼠单克隆抗体和兔补体中，在37°C孵育45分钟。离心收集细胞后，将沉淀重悬于3 mL新鲜完全培养基中，并将经阴性筛选的抗原呈递细胞以30 Gy剂量进行照射。用新鲜完全培养基将抗原呈递细胞浓度调整为5 × 10⁶ 个细胞/mL，然后向96孔平底培养板的相应实验孔中各加入100 µL CD4阳性T细胞和100 µL抗原呈递细胞。随后向每孔加入相应的刺激物，并将培养板转移至细胞培养孵箱中。 对于鸡卵清蛋白特异性TH1细胞的放射性标记，首先使用活度计将37兆贝可勒尔（MBq）的T细胞特异性放射性抗体无死腔地吸入注射器中。接着，将抗体排入反应杯内，并测量注射器中剩余的放射性活度，从初始吸取量中扣除该值。然后向反应杯中加入1毫升生理盐水，配制成浓度为37兆贝可勒尔每毫升（MBq/mL）的溶液。接下来，将2 × 10⁶个OVA-TH1细胞加入0.5毫升完全培养基中，接种至48孔板的每个孔内，随后加入20微升放射性标记的抗体溶液。在符合辐射安全要求

murine-lymphocyte-labeling-64cu-antibody-receptor-targeting-for-vivo

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

小鼠淋巴细胞通过标签<sup&gt; 64</sup&gt;的Cu-抗体受体靶向用于<em&gt;体内</em&gt;由PET / CT细胞运输

在本视频中，我们演示了使用放射性同位素偶联的单克隆抗体对辅助性T细胞进行细胞内放射标记，以实现无创的正电子发射断层扫描成像。...

使用放射性标记单克隆抗体标记小鼠辅助性T淋巴细胞

本视频展示了一种利用放射性免疫偶联物的技術 体内...

一种利用放射性标记抗体在小鼠模型中通过活体PET成像检测肿瘤的技术

我们描述了一种在小鼠模型中使用MRI进行体内细胞示踪的通用方案，其中细胞经过体外标记。本文包括典型的细胞标记、图像采集、处理与定量分析流程。...

in vivo 19F MRI 细胞示踪

生物正交的逆电子需求Diels-Alder环加成反应已被用于开发一种高效且模块化的预靶向PET成像策略，用于癌症检测。本方案以靶向结直肠癌的抗体huA33和一种64Cu标记的放射性配体构成的模型系统为例，详细描述了该方法的各个步骤。...

利用生物正交逆电子需求狄尔斯-阿尔德环加成反应实现预靶向PET成像

病毒来源的肽段与抗体偶联物（ACs）相结合是一种日益受到关注的方法，因其具有增强分子载荷在肿瘤细胞内蓄积的潜力。本实验方案利用常规方法评估肽段偶联效率、抗体偶联物及其载荷在细胞内的积累情况以及肿瘤靶向性，可为研究人员在关键的早期研发阶段提供支持。...

利用病毒衍生肽修饰抗体偶联物的初步评估：提高细胞摄取与增强肿瘤靶向性

本方案描述了一种对人肺肿瘤组织切片中经荧光标记抗体标记的驻留性肿瘤浸润CD8 T细胞进行成像的方法。该技术可利用共聚焦显微镜对CD8...

体外 利用共聚焦显微镜成像人肺癌组织切片中的驻留性CD8 T淋巴细胞

用于定量评估淋巴细胞趋化性和迁移性的实验方案是免疫学研究中的重要工具。此处，一个 体外 该方案可实现对细胞迁移进行实时、多重评估，以及一种互补的 体内...

量化人单核细胞趋化性 体外 和小鼠淋巴细胞迁移 体内

本文展示了从正常、炎症及恶性小鼠皮肤中 体内 定量白细胞迁移出的实验方法。我们对两种模型进行了直接比较：经皮 FITC 应用与 原位...

量化白细胞通过小鼠皮肤和肿瘤淋巴管的迁移

本方案描述了一种在不改变器官结构的情况下对引流淋巴结中不同细胞群体进行成像的技术。...

利用离体共聚焦显微镜观察淋巴结结构及细胞定位

本方案描述了非侵入性追踪经基因工程改造以表达嵌合抗原受体的T细胞的方法学 体内...

动态成像嵌合抗原受体T细胞与[18F]四氟硼酸盐正电子发射断层扫描/计算机断层扫描

本文详细介绍了对一种人源特异性抗CD19单克隆抗体进行放射性标记的方法，以及如何利用该标记抗体在多发性硬化小鼠模型中定量中枢神经系统及外周组织中的B细胞 体内 PET成像， 离体...

使用正电子发射断层扫描在实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型中成像 CD19+ B 细胞

了解使用铜修饰放射性单克隆抗体稳定标记小鼠淋巴细胞的方法，通过PET/CT成像追踪淋巴细胞在体内的时空分布和归巢模式。该技术可在炎症或癌症小鼠模型中实现高对比度细胞迁移成像，且对细胞活性影响极小。

小鼠淋巴细胞标记 ⁶⁴铜-抗体受体靶向在体实验细胞迁移的PET/CT成像

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小鼠淋巴细胞标记 64铜-抗体受体靶向 在体实验 细胞迁移的PET/CT成像

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