Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

本实验的总体目标是评估环境中的农药残留如何影响蜂巢群自然条件下的个体蜜蜂。这种方法的主要优点是它可以调查杀虫剂或其他感兴趣的污染物对单个蜜蜂和整个蜂群的影响。这种方法的视觉演示至关重要，因为蛹的作很困难，因为它们很脆弱。

演示该程序的是我实验室的博士生 Ko Chong-Yu。在实验之前，给每个菌落喂一升 50% 糖浆。每周补充食物库，一个健康的蜂群将有 9 个蜂巢框架和一个产卵的蜂王。

首先，在蜂群中找到蜂王，并用空镜框替换她这边的至少一个镜框。然后插入 Queen 排除器，将 Queen 隔离到包含至少一个空帧的四帧部分。第二天，检查框架是否有新鲜产下的鸡蛋，并将鸡蛋与蜂王分开 72 小时。

然后取下这些框架，刷掉工蜂，准备处理育雏细胞中的幼虫。对于每种处理，覆盖 50 只随机选择的 1 日龄幼虫，在带有透明载玻片的框架中。用图钉固定载玻片，然后用永久性记号笔在载玻片上制作识别信息。

现在使用加热至 35 摄氏度的 BLD，在 100 mL 体积中制备不同浓度的 PPN，范围从 0.1 到 100 ppm。在接下来的三天里，处理育雏细胞群。要处理幼虫，请揭开它们并向每个育雏细胞中加入 10 微升 PPN BLD 溶液。

第二天使用 10 μL 治疗液重复治疗，第三天使用 20 μL 治疗液重复治疗。第三次处理后，让它们在菌落中发育 在实验设计中，使用不同的菌落将每个处理组复制四次。第 7 天，检查 PPN 处理的幼虫，记录处理组的死亡率和加帽率。

在第 13 天，记录每个治疗组的羽化率。首先，从加帽的育雏细胞中取出蜂蜡。然后用尖镊子轻轻地抓住蛹，轻轻地将它们拉出。

取出蛹时，抓握头部和胸部，非常轻柔地取出蛹。在进行实验之前，有必要多次练习以获得至少 90% 的存活率。将蛹转移到 24 个孔组织培养板中，内衬两层实验室组织。

请务必注意转移过程中发生的任何死亡率损害。将培养板保持在 34 摄氏度和 70% 相对湿度下，直到出苗。在接下来的 8 天内，记录羽化率。

像以前一样设置一个健康的 9 帧菌落，其中 Queen 被限制在一个包含至少一个空帧的 4 帧部分。将四框部分称为 A 部分，将五框部分称为部分 B.Be 以确保蜂王排除者完全划分蜂群，因此蜂王不能在部分之间移动。这种划分对于收集一日龄幼虫群至关重要。

第二天，像以前一样用新鲜产下的鸡蛋标记一组 100 个育雏细胞。这是第一组，将其返回到 A 部分三天。两天后，将蜂王转移到 B 部分产蛋。

第二天，将 B 部分中的 100 个新鲜产下的鸡蛋标记为第 2 组，并将该部分返回到菌落中的 B 部分。再过两天，将蜂王移回 A 部分，现在重复该过程以制作另一组，并继续每三天在 A 部分和 B 部分之间交换蜂王，直到每隔三天分配 9 组一日龄的鸡蛋。在发育的前五天，对每组标记的育雏细胞的孵化率进行评分。

发育 11 天后，开始记录每组中加帽育雏细胞的数量。在实验的第 13 天，用含有百万分之 10 或 100 的 PPN 的 50% 糖浆处理菌落。在饲喂箱中装入 1 升处理液并将其连接到菌落。

第一组是未处理的对照，因为这些细胞现在应该加帽。从第 17 天开始，记录每组的羽化率。为此，如前所述，将幼虫转移到 24 孔板中，然后孵育板，然后记录羽化速率。

49 天后，应该知道所有 9 组的羽化数据。按照 PPN BLD 的描述处理单个育雏细胞。农药对幼虫期蜜蜂的负面影响很容易观察到，并且与剂量有关。

这些影响包括黑色素化和机翼变形。为了模拟遭受环境 PPN 残留的蜜蜂群，整个蜂群都喂食了 PPN 糖浆。第一组是对照，因为这些蜜蜂在治疗前发育成成虫。

第 2 组和第 3 组最初发生在幼虫阶段，第 4 至第 9 组最初以卵的形式受到影响。PPN 处理后孵化、加帽、羽化和畸形发生变化。100 ppm 的 PPN 比 10 ppm 更有效，但孵化率除外。

此外，治疗后，许多蛹因黑色角质层或未出现而死亡。在 100 ppm PPN 处理中，加帽细胞被破坏，受伤的蛹从菌落中取出。一旦掌握，菌落治疗程序可以在大约一个月内完成，蛹的日常作可以在大约两个小时内完成。

在尝试此程序时，重要的是要记住定期检查蜂群的状况，并在进行实验之前熟练处理蛹。不要忘记，由于蜂毒过敏，与蜜蜂一起工作可能是危险的。执行此程序时应始终采取预防措施，例如穿着防护服。