鼠左前降支（LAD）冠状动脉结扎:改进和简化模型的心肌梗死

我们为小鼠模型中的左前降支 （LAD） 结扎提供了一种可靠的方法。这种方法比其他方法侵入性相对较小，包括气管插管、左侧开胸手术和胸腔穿刺术。该方法可用作急性和慢性心肌梗死 （MI） 的模型。

该程序的总体目标是通过结扎左冠状动脉前降支来诱导小鼠心肌梗死。这种方法可以帮助回答心血管领域的关键问题，例如某些基因的过表达或敲除是否会影响心肌梗死后心脏的恢复。这种技术的主要优点是该手术比其他各种心肌梗死镜像模型侵入性更小，并且恢复时间短，并发症少。

一般来说，刚接触这种方法的人会很挣扎，因为气管插管和 LAD 动脉的识别需要在训练有素的教练的指导下进行练习。这种方法的视觉演示对于识别和评估 LAD 至关重要，如果没有任何经验或培训，就很难学习。在对动物进行镇静之前，开始将珠子消毒器加热到 250 摄氏度，这可能需要长达 20 分钟。

检查鼠标是否服用了重度镇静剂。呼吸频率约为每分钟 32 次呼吸。然后将镇静的小鼠仰卧物放在聚苯乙烯泡沫塑料板上。

将鼠标置于与眼睛齐平的位置，以便更容易地看到口咽部。在继续之前，请捏住脚趾确认镇静剂。然后，使用松紧带，将上门牙固定在张开位置，保持嘴巴张开。

接下来，将高强度照明器放置在鼠标上方，以便对口咽部进行透射照射。戴上手术环以注意口咽部的小结构。现在，使用弯曲的镊子打开下巴。

用另一对镊子将舌头移开，然后观察声带的张开和闭合。打开时，插入一根 20 号的 1 英寸静脉导管，并带有钝头针头导引器。使用针头将导管引导至气管开口，但避免将针头插入气管壁。

然后将插管的鼠标转移到装有加热装置的作面上，然后将鼠标连接到小型啮齿动物呼吸机。在继续之前，使用脚趾捏住来验证鼠标的麻醉平面。然后在呼吸机和 IV 导管之间的连接部位用胶带固定插管。

然后用胶带粘住所有四肢并润滑眼睛。现在，修剪胸部左侧腹侧的毛皮。然后在裸露的皮肤上涂抹一小层脱毛霜，让它渗透 30 到 45 秒。

同时，将无菌棉签浸泡在三个装满优碘的 1.5 毫升试管中。然后用蒸馏水轻轻擦去奶油和皮毛。然后用 betadine 和 70% 异丙醇清洁手术区域 3 次。

现在，在手术区域上用四分之一大小的孔覆盖鼠标。在做第一个切口之前，将高压灭菌的手术器械放入 250 摄氏度的预热热珠消毒器中约 20 秒。现在，使用细尖镊子轻轻提起突出的剑突软骨左侧约 5 毫米处的皮肤。

然后使用 10 号手术刀在柄部水平处创建一个向上的垂直切口。接下来，用弯曲的镊子轻轻分离真皮层。为了保持肌肉层张开，将两条 5 5 零聚丙烯缝合线穿过切口的两侧，并用夹子固定。

现在，沿着肋腔的自然角度在第三个肋间隙做一个切口。接下来，撕下鼠标左肢的胶带。然后将后脚粘在一起。

然后重新定位前脚，使其略微抬高。每次处理鼠标后，请务必清洁手术手套。使用牵开器轻轻地分开第三根和第四根肋骨。

然后将一小块纱布浸入无菌的 0.9% 盐水中，挤出多余的盐水。使用镊子轻轻地将湿纱布插入左肺，以防止意外的肺损伤。接下来，用镊子轻轻去除薄心包。

然后，使用蘸有生理盐水的小棉球清洁心脏表面，使动脉可见。轻轻向上推左甲骨文，找到下面的冠状动脉。现在，在 LAD 下通过 8 零尼龙缝合线并完成两次投掷以固定结扎。

如果成功，从结扎线中蒸馏出来的左心室会变白。然后，取下纱布和牵开器。接下来，通过开胸手术开口插入一根 6 英寸 25 号软管，连接到 25 号针头上。

将其插入左肺上方的胸腔 1 或 2 英寸。然后将鼠标恢复到仰卧位并清洁手术手套。现在，继续使用 5 根间歇式的零聚丙烯缝合线来闭合胸腔，将胸管保持在原位。

然后以简单的连续模式移除保持肌肉层打开并使用五根零聚丙烯缝合线闭合肌肉层的两条缝合线。接下来，将 1 毫升注射器连接到胸管上的针头上。拉回柱塞以抽出空气和血液。

如果注射器装满，请将其拆下，清空，然后重新连接。现在，拔出胸管，并确保胸部密封良好。首先给予镇痛药和皮下推注生理盐水。

五分钟后，从插管中取出鼠标。如果胸部没有双侧上升，空气就会滞留在胸腔中。在第三和第四肋骨之间插入一个带有 1 毫升注射器的 25 号针头，进入胸腔。

然后轻轻抽出滞留的空气，胸部将开始正常移动。在所述手术后使用氯化钾对小鼠实施安乐死 28 天。他们的心脏被停在舒张期，然后用多聚甲醛固定。

该图像显示缺血性左心室中缺乏 Evans 蓝。用三色染料染色的心形显示梗死区域的胶原蛋白增加，表明纤维化。对照心脏现在显示出胶原蛋白增加的证据。

观看此视频后，您应该对如何使用小鼠模型诱导心肌梗死有很好的了解。利用气管插管技术、左侧胸腔闭式方法进行 LAD 结扎，以及无需在胸壁上额外切口即可进行全合成。一旦掌握了这项技术，如果执行得当，可以在 30 分钟内完成。

在尝试此程序时，重要的是要记住通过结扎 LAD 动脉为脉管系统周围提供马槽。在此程序之后，可以进行超声心动图检查，以回答其他问题，例如在预定的术后时间后心脏功能丧失或恢复的程度。该技术开发后，为心血管外科领域的研究人员探索药物和特定基因对小鼠心肌梗死的影响铺平了道路。