Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Yu Wang; Sharmin Alhaque; Kate Cameron; Jose Meseguer-Ripolles; Baltasar Lucendo-Villarin; Hassan Rashidi; David C. Hay

doi:10.3791/55355

JoVE Journal
Developmental Biology

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JoVE Journal Developmental Biology

Defined and Scalable Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Pluripotent Stem Cells

界定和由人多能干细胞的肝细胞样细胞的可扩展代

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March 2, 2017

DOI: 10.3791/55355-v

Yu Wang¹, Sharmin Alhaque¹, Kate Cameron¹, Jose Meseguer-Ripolles¹, Baltasar Lucendo-Villarin¹, Hassan Rashidi¹, David C. Hay¹

¹MRC Centre for Regenerative Medicine,University of Edinburgh

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这里介绍的方法描述了一个可扩展性和良好生产规范（GMP）-ready分化系统生成的多能干细胞的人类肝细胞样细胞。它作为一个具有成本效益的和标准化的系统以产生用于基础和应用的人肝研究人肝细胞样细胞。

该方案的总体目标是在规定的条件下使用重组层粘连蛋白基质从多能干细胞生产人肝细胞样细胞。该方法允许用户定制功能性人肝细胞，以研究培养皿中的肝脏生物学。该技术的主要优点是其确定的性质允许大规模生产具有高度实验可重复性的肝细胞。实验开始时，在 4 摄氏度下解冻每毫升 100 微克重组层粘连蛋白-521 或 LN-521 原液，将解冻的 LN-521 在冰冷的 1xDBPS 中用钙镁稀释，制成每毫升 5 微克的溶液。加入每毫升 5 微克 LN-521 溶液的 1 毫升，包被六孔板的一个孔，然后摇动板以使其均匀分布在孔中。接下来，将板在 37 摄氏度的 5%CO2 细胞培养箱中孵育至少两个小时，以备紧急使用。将包被板从培养箱中取出到组织培养罩中。小心吸出涂层 LN-521 溶液，不要损坏涂层表面。然后立即加入 1 毫升预热的 mTeSR

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