Name: 器官海马切片培养模型研究肿瘤细胞的神经保护和侵袭性 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: 学习使用振动切片机制备高质量器官型海马切片培养物的方法，用于研究神经保护作用和肿瘤细胞侵袭行为。该方案可确保组织完整性并减少污染风险，为神经科学和药理学研究提供可靠的体外模型。

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作者感谢Christine Auste在视频录制方面的支持，以及Chalid Ghadban提供的出色技术协助。Urszula Grabiec得到了Roux项目FKZ 29/18的资助。

动物实验遵循欧洲议会和欧盟理事会2010/63/EU号指令批准的伦理政策以及神经科学研究中动物使用政策，该指令涉及用于科学目的动物的保护。
1. 仪器与培养基的准备
<ol>
	<li>用于制备OHSC时，请使用以下仪器：小剪刀两把、弯头镊子两把、尖头镊子一把、刀片三片（11号两片，15号一片）、手术刀柄三个、圆形滤纸（直径：35 mm）、琼脂、剃须刀片一片、未改装的巴斯德移液管一根，以及去尖端的改装巴斯德移液管一根。所有材料在使用前需经高压灭菌器灭菌图1).</li>
	<li>称取5 g琼脂，溶于100 mL蒸馏水中。将溶液在高压灭菌锅中于121.7 °C、210.8 kPa条件下灭菌20 min。使用无菌玻璃移液管将3 mL液态琼脂溶液分装至60 mm培养皿中，静置使其凝固约5 h，用塑料石蜡膜封盖以防止污染，4 °C保存备用。琼脂块用于在切片过程中稳定脑组织。</li>
	<li>培养基
	<ol>
		<li>配制200 mL制备培养基（pH 7.35），包含198 mL最低必需培养基（MEM）和2 mL L-谷氨酰胺溶液（终浓度2 mM）。在培养基制备当天配制该溶液，并于4 °C保存。</li>
		<li>配制100 mL培养基，包含49 mL MEM、25 mL Hanks平衡盐溶液（HBSS）、25 mL（v/v）正常马血清（NHS）、1 mL L-谷氨酰胺溶液（终浓度2 mM）、100 µg胰岛素、120 mg葡萄糖、10 mg链霉素、10,000 U青霉素和800 µg维生素C，如先前报道所述。将培养基预热至37 °C，调节pH值至7.4，并经0.2 µm孔径滤膜无菌过滤。重复该操作（预热、pH调节、 等等每两天在更换培养基前进行一次。4 °C 保存条件下，培养基最多使用一周。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>用制备液填充一个35 mm的培养皿以保存脑组织。在工作区域的冷却包上放置两个空的培养皿，用于收集组织。</li>
</ol>
2. 使用振动切片机进行样品制备与切片
<ol>
	<li>使用7至9日龄大鼠或4至5日龄小鼠的脑组织，按照Stoppini方法制备器官型脑片培养（OHSC） 等.4 动物断头后，用剪刀去除颅骨上的皮肤。</li>
	<li>将精细剪刀的刀片插入枕骨大孔，沿尾侧（后部）至头侧（前部）轴线剪开颅骨。再做两个与第一条切口垂直的剪切，分别将剪刀尖朝向左耳和右耳方向&#34;T形切口&#34;).</li>
	<li>用精细镊子小心打开颅骨，注意不要损伤脑组织。使用手术刀（11号刀片）切除额极最前端部分和小脑。</li>
	<li>用解剖刀小心取出脑组织，并将其轻柔地放入盛有制备液的培养皿中（图2). 将脑组织置于样本托上，并用医用氰基丙烯酸酯胶水固定。使用琼脂块以确保机械稳定性。</li>
	<li>使用滑动式振动切片机将组织水平切成350 µm厚的OHSC。</li>
	<li>使用双目显微镜对切片进行光学评估。立即弃去质量较差的离体海马切片。应仅选取来自背侧与腹侧海马之间中段区域、细胞构筑完整且结构完好的切片（见图3和图4）。</li>
	<li>使用解剖刀（圆形刀片，型号15）分离海马区与内嗅皮层； 图3）。必须保留穿通通路和内嗅皮层。</li>
	<li>每次可从每只脑组织中获得6至8个离体海马切片（OHSC）。将2-3个切片转移至一个细胞培养插件（孔径0.4 µm）中，并将其放入6孔培养板的一个孔内，每孔加入1 mL培养基。</li>
	<li>将6孔板置于35 °C、含5% (v/v) CO的完全湿润大气环境中孵育2 每隔一天更换一次细胞培养基。 
	注意：在第6天进行实验 体外 （第6天时，与切片操作相关的炎症反应消失。此时，小胶质细胞再次呈现分支状形态，突触连接也已成熟。）</li>
</ol>
3. 组织质量评估
<ol>
	<li>OHSC 中变性神经元的固定、标记与可视化
	<ol>
		<li>完成实验后，在固定前将 OHSC 与 5 µg/mL 碘化丙啶（PI）共同孵育 2 小时，以标记变性神经元的细胞核。 
		注意：PI 为疑似致癌物，操作时务必穿戴个人防护装备（PPE），如手套。</li>
		<li>用 0.1 M 磷酸缓冲液（pH 7.4）清洗 OHSC，并用 4%（v/v）多聚甲醛（PFA）溶液固定 24 小时。 
		注意：PFA 具有毒性且为疑似致癌物，操作时应在通风橱中进行，并穿戴个人防护装备。</li>
		<li>在插入物中用 1 mL PBS 清洗 OHSC，并使用钟表匠毛刷将脑片从膜上分离。</li>
		<li>在 24 孔板中使用 IB4 染料对 OHSC 进行标记（图 5）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用荧光标记单细胞进行肿瘤侵袭实验
	<ol>
		<li>实验开始前 24 小时，使用荧光染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯（CFDA SE）对肿瘤细胞进行标记。</li>
		<li>用血细胞计数板（Neubauer 计数室）收集并计数肿瘤细胞。</li>
		<li>将细胞重悬于培养基中，使 10 µL 悬液含有目标数量的细胞（通常为 50,000 或 100,000 个细胞）。</li>
		<li>将 10 µL 细胞悬液滴加至脑片培养物上，允许细胞侵袭 3 天。</li>
		<li>实验结束后，用 4%（v/v）PFA 固定脑片培养物 24 小时，再用 PI 标记共培养物 24 小时，以显示细胞结构。 
		注意：PFA 具有毒性且为疑似致癌物，操作时应在通风橱中进行，并穿戴个人防护装备。</li>
		<li>使用封片介质将共培养物封固于盖玻片上，用于后续分析。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. OHSC 实验的评估
使用共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）分析OHSC。检测PI标记的变性神经元或PI标记的细胞结构时，采用波长λ = 543 nm的单色光，并使用波长范围为λ = 585–615 nm的发射带通滤光片。对于CFDA标记的肿瘤细胞或IB4标记的小胶质细胞，使用波长λ = 488 nm的激发光。在两种实验条件下，均采集厚度为2 µm的光学切片z轴层扫图像，并用于后续分析。

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<li>Vinci, M., Box, C., Eccles, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+%283D%29+tumor+spheroid+invasion+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional (3D) tumor spheroid invasion assay.</a> J Vis Exp. (99), e52686(2015).</li>
<li>Hagemann, C., Fuchs, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+MACC1+on+human+malignant+glioma+progression+and+patients+%27+unfavorable+prognosis%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">Impact of MACC1 on human malignant glioma progression and patients ' unfavorable prognosis.</a> Neuro Oncol. 15 (12), 1696-1709 (2013).</li>
<li>Hohmann, T., Grabiec, U., Ghadban, C., Feese, K., Dehghani, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Influence+of+Biomechanical+Properties+and+Cannabinoids+on+Tumor+Invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Adh+Migr%22%5BJournal%5D)">The Influence of Biomechanical Properties and Cannabinoids on Tumor Invasion.</a> Cell Adh Migr. 11 (1), 54-67 (2016).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露

本方案描述了脑片培养物（OHSC）的制备方法。该模型可用于检测脑组织在施加生理性和病理性刺激后的内在功能与反应。除了可分析电生理参数外，还可对OHSC进行损伤处理，并确定损伤对所有细胞类型的影响。此外，可使用不同物质进行处理，从而详细描述损伤过程或在无巨噬细胞和淋巴细胞情况下的修复过程。
成功制备和培养的关键步骤包括：1）在无菌条件下操作，2）正确配制培养基，注意温度和pH，以及3）在处理OHSC时培养必要的手动操作技巧。
离体脑片培养物的特征
由于神经元细胞形态未发生改变及其 体内类器官样结构，因此这些切片被称为器官型切片。OHSC包含锥体细胞层和颗粒细胞层，分别由海马角（CA1、CA2、CA3）的锥体细胞和齿状回（DG）颗粒细胞组成。海马的某些区域具有高度有序的结构，传入纤维投射以非重叠的方式终止于特定的层次。在制备后，内嗅皮层（穿通通路）、齿状回、CA3和CA1神经元之间的传出连接...

OHSC 是一种特征明确的模型 体外 用于研究神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞生理学与病理学特性的模型1易于控制细胞外环境，并可在施加各种刺激后监测细胞及形态学变化。制备后，海马神经元的组织结构及其连接得以良好保存。2,3与多种优势相比，离体脑片培养（OHSC）可在无需动物手术的情况下监测脑损伤和肿瘤侵袭过程。单个啮齿类动物脑组织可获得6至8个离体脑片。因此，OHSC能显著减少实验动物使用数量，并可在同一动物来源的脑片中测试多种药物浓度、基因操作或不同损伤模型。在基于脑片的实验中，可精确控制实验条件。此外，通过延时成像可方便地监测如继发性损伤等病理状态的时间依赖性发展过程。
在 Stoppini 等人最初建立的该实验方案中et al.4，描述了制备步骤，并强调了选择合适脑片的重要形态学标志。我们建议使用出生后第 7–9 天的大鼠或出生后第 4–5 天的小鼠进行制备。在这些时期，离体脑片培养物（OHSC）对机械损伤具有较强的抵抗力，并且神经元环路具有较高的重组潜力。相比之下，来自胚胎期或成年大鼠的脑片在培养过程中会迅速发生结构改变，失去其器官型形态，因此不太适合用于基础研究中长期过程的观察5,6,7,8,9,10,11。影响 OHSC 存活率的另一个关键因素是脑片本身的厚度，因为扩散能力有限，从而限制了营养物质的供应12,13,14。

<table><tbody><tr><td>6孔板</td><td>Falcon</td><td>35-3046</td><td></td></tr><tr><td>琼脂</td><td>Fluka</td><td>5040</td><td></td></tr><tr><td>高压灭菌器</td><td>Systec</td><td>DX-45</td><td></td></tr><tr><td>CFDA</td><td>&amp;nbsp;Thermo Fisher</td><td>V12883</td><td></td></tr><tr><td>共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）LSM700</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Eagle&amp;acute;s 最低必需培养基&amp;nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>32360-034</td><td></td></tr><tr><td>荧光素标记的长蒴菜豆（Bandeiraea）凝集素 I</td><td>Vector Labs</td><td>FL-1101</td><td></td></tr><tr><td>葡萄糖</td><td>Merk</td><td>1083371000</td><td></td></tr><tr><td>谷氨酰胺</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>Hank&amp;acute;s 平衡盐溶液（含 Ca&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt; 和 Mg&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;）</td><td>Invitrogen</td><td>24020-133</td><td></td></tr><tr><td>Hank&amp;acute;s 平衡盐溶液（不含 Ca&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;&amp;nbsp; 和 Mg&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;）</td><td>Invitrogen</td><td>14170-138</td><td></td></tr><tr><td>胰岛素</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I5500</td><td></td></tr><tr><td>L-抗坏血酸</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5960</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酰胺</td><td>Invitrogen</td><td>25030-024</td><td></td></tr><tr><td>LN229</td><td>Cell-Lines-Service</td><td>300363</td><td></td></tr><tr><td>医用氰基丙烯酸酯胶（Histoacryl 胶）</td><td>B.Braun</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>Millicell 培养插件</td><td>Millipore</td><td>PICMORG50</td><td></td></tr><tr><td>NMDA N-甲基-D-天冬氨酸</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M3262</td><td></td></tr><tr><td>正常马血清</td><td>Invitrogen</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>培养皿（各种规格）</td><td>Greiner</td><td>627160/664160/628160</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>Roth</td><td>0335.1</td><td>有毒</td></tr><tr><td>碘化丙啶（PI）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81845-25MG</td><td>有毒</td></tr><tr><td>U138</td><td>ATCC</td><td>HTB-14</td><td></td></tr><tr><td>振动切片机</td><td>Leica</td><td>Leica VT 1200</td><td></td></tr></tbody></table>

用于研究肿瘤细胞神经保护作用及侵袭性的海马组织切片器官型培养模型

Organotypic Hippocampal Slice Cultures As a Model to Study Neuroprotection and Invasiveness of Tumor Cells

在海马组织切片培养（OHSC）中，神经元和胶质细胞的形态学与功能特征均得到良好保存。该模型适用于研究神经保护、神经元电生理、神经网络活动或肿瘤侵袭等多种科学问题。尽管切片操作本身会初始造成损伤并引发胶质瘢痕形成，但OHSC中多突触环路的海马结构和神经元活性仍保持良好。瘢痕的形成可能改变局部机械特性以及小分子的扩散行为。 等等脑片技术可在无需动物手术的情况下监测脑损伤后的时间依赖性过程，并可用于研究不同脑源性细胞类型（即星形胶质细胞、小胶质细胞和神经元）在生理和病理条件下的相互作用。该模型的一个矛盾之处在于缺乏血流和免疫血细胞。在神经元损伤进展过程中，来自血液的迁移性免疫细胞发挥重要作用。由于脑片中缺少这些细胞，因此可以在无外界干扰的情况下观察培养物中的内在过程。此外，在离体脑片培养（OHSC）中，培养基及外部环境的组成可被精确控制。该方法的另一优势是相较于标准制备方法，所需牺牲的动物数量更少。单只动物可获得多个离体脑片，从而可在同一只动物来源的样本中同时进行多种处理的平行研究。基于上述原因，离体脑片培养适用于分析组织损伤后或肿瘤侵袭过程中新型保护性治疗手段的效果。

关键词：离体脑片培养，脑损伤，星形胶质细胞，小胶质细胞，神经元，免疫细胞，神经保护，肿瘤侵袭，细胞相互作用，培养基控制 
本文所述方案介绍了一种制备OHSC的方法，可获得高度可重复且保存良好的脑片，适用于多种实验研究，如神经保护或肿瘤侵袭研究。

神经保护研究：为确定神经元损伤，对齿状回颗粒细胞层（GCL）每隔第三个光学切片中PI阳性细胞核和IB4阳性小胶质细胞的数量进行计数。在肿瘤侵袭实验中，采用最大强度z投影法对图像堆栈进行处理，以计算肿瘤细胞覆盖的面积，作为侵袭程度的指标，并用于观察不同的侵袭模式（图6）。
在未处理的对照组OHSC（CTL）中，神经元保持良好。在齿状回（DG）的颗粒细胞层（GCL）中，几乎未观察到PI阳性的神经元核（图5A）。在分子层中，大多数小胶质细胞呈分支状。在DG的GCL中，仅检测到极少数IB4阳性的小胶质细胞（图5A）。在使用50 µM N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）孵育后，与对照组OHSC相比，PI阳性神...

器官型海马切片培养（OHSC）是一种 体外 模拟的模型 体内 该方案能很好地满足这一需求。本文介绍一种基于振动切片机的优化切片方法，用于制备高质量脑片，以评估新物质的神经保护潜力或肿瘤细胞的生物学行为。

在海马组织切片培养物（OHSC）中，神经元和胶质细胞的形态学与功能特征均得到良好保存。

使用振动切片机制备和切片。在切片过程中需要三个琼脂块以稳定脑组织。为避免污染，请使用经过高压灭菌的器械套装。移除琼脂。应先在滤纸上晾干，再使用医用氰基丙烯酸酯胶将其粘贴到金属板上。用刮铲小心取出脑组织，并将其轻轻放入盛有制备液的培养皿中。接下来，用滤纸将脑组织短暂吸干。在金属板上涂布医用氰基丙烯酸酯胶水。使用镊子和刮勺将脑组织放置在样品托上。使用先前准备好的两块琼脂，从两侧确保机械稳定性。此时，应将脑组织放置在琼脂块旁边，并用另外两块琼脂固定，以防止切片过程中受损。将金属板放入振动切片机中，并用冷的制备液覆盖组织。随后，使用滑动式振动切片机将组织水平切成350微米厚的离体海马脑片（OHSC）。用折断的巴斯德移液管背面收集切片，并将其转移至培养皿中。将脑片保存在冷的制备液中。使用双目显微镜对切片进行光学评估。用带有15号圆形刀片的解剖刀分离海马区并进入内层皮层。重要的是，仅取位于海马背侧与腹侧之间中段区域、且细胞结构完整的切片。低质量的OHSC应立即弃去。将2到3个获得的脑片转移至孔径为0.4微米的细胞培养插入物中。使用巴斯德吸管从细胞培养插入物顶部吸出培养基。将组织块放入六孔培养板中，每孔加入一毫升培养基。将六孔板置于35°C、5% CO2的完全湿化环境中孵育，每隔两天更换一次细胞培养基。大鼠组织培养六天后，或小鼠组织培养十四天后，与切片操作本身相关的炎症反应已消失。现在可以开展实验。神经保护研究的代表性结果。图A部分显示了未损伤的离体海马脑片，在体外培养9天且未经任何处理的培养基中保存，作为对照组脑片。共聚焦激光扫描显微镜证实，对照组 OHSC 显示出良好的神经元保存状态。Isolectin B4 阳性的小胶质细胞主要定位于分子层和 Plexiform 层，并呈现分枝状表型。在齿状回颗粒细胞层中，仅发现极少数 Isolectin B4 阳性的小胶质细胞，几乎未见 Propidium Iodide 阳性的细胞核。另一组OHSC（如图像B部分所示）在培养基中培养六天，随后用50 µM NMDA处理四小时以造成损伤，之后再在培养基中继续培养三天。NMDA损伤后，在齿状回所有层内，大量活化的Isolectin B4阳性小胶质细胞在神经元损伤部位聚集并黏附于该处。定量分析显示，在齿状回颗粒细胞层中，损伤组OHSC中Isolectin B4阳性的小胶质细胞数量高于对照组。类似地，在NMDA损伤切片的颗粒细胞层中，碘化丙啶阳性变性神经元的数量显著增加。肿瘤侵袭研究的示例结果。所有图像均展示了使用OHSC进行肿瘤侵袭SS实验的结果，图像通过共聚焦激光扫描显微镜获得。红色标记OHSC的细胞结构，绿色标记肿瘤细胞。图像A显示了U138胶质母细胞瘤细胞在允许侵袭四天后典型的侵袭模式。可以观察到清晰、呈球形且边界分明的肿瘤，OHSC结构似乎保持完整，齿状回和海马角清晰可见。图B显示了LN229胶质母细胞瘤细胞在培养四天后形成的另一种侵袭模式。在此情况下，由于形成的网络覆盖了大部分OHSC，单个肿瘤无法被明确区分，尽管细胞结构仍保持完整，齿状回和海马角未发生变形。此外可以得出结论，LN229 细胞比 U138 细胞更具侵袭性。图像 C 和 D 显示了 LN229 细胞在侵袭四天后的相同肿瘤侵袭结果。在左侧可见，肿瘤组织几乎覆盖了整个视野。图D显示了相应的碘化丙啶染色结果。在此切片中，细胞结构已不再完整，海马区（Cornu Ammonis）已不可见，齿状回也出现扭曲变形。造成该结果的可能原因包括：实验开始时离体海马脑片（OHSC）本身未完全完整、接种的肿瘤细胞数量过多，或侵袭时间过长，导致观察到的组织结构丧失。因此，此类侵入性实验结果应予以舍弃。器官型海马脑片培养是一种优良的体外模型，能够反映具有完整神经元连接的脑组织生理状态。由于单个动物可获得多个脑片培养样本，该模型允许在来自同一动物的组织中测试多种条件，且实验结果具有高度可重复性。由于具有高度的可及性，海马区器官型脑片培养非常适合多种实验类型，包括电生理学和神经发生研究，也适用于神经保护、肿瘤侵袭以及肿瘤细胞与健康脑组织相互作用的实验。

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Research

科研

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Neuroscience

神经科学

器官海马切片培养模型研究肿瘤细胞的神经保护和侵袭性

器官型海马脑片培养模型是一种用于在多种实验范式中研究神经元损伤的体外模型。本文中，我们描述了制备脑片培养物以及定量神经元损伤的方法。...

用于检测神经元损伤的海马组织切片培养模型

我们介绍一种制备海马组织切片的方法，该方法可轻松适用于其他脑区。将脑切片置于多孔膜上，使培养基形成液-气界面。此方法可在培养中维持海马整体结构长达两周。...

海马组织切片培养

本视频展示了三维共培养系统的建立过程。将小鼠脑切片置于膜上，接种荧光标记的人脑肿瘤细胞并使其在其上生长。待系统准备就绪后，对其进行染色以进行成像。...

在器官型脑片共培养模型中建立脑肿瘤

该视频展示了从胶质母细胞瘤组织中制备和维持类器官切片培养物的方法。将分离的组织包埋在琼脂糖基质中，使用振动切片机获取薄切片。随后将这些切片置于微孔板内的可渗透膜插件上，并在切片培养维持培养基中进行长期培养。...

利用人胶质母细胞瘤组织制备和维持脑片培养

通过将脑组织切片与癌细胞进行器官型共培养，可以在癌细胞侵袭脑组织的过程中，利用荧光显微镜以及明场（视频）显微镜观察其形态学变化。该模型系统还支持细胞交换与补充操作，并可进行多种实验干预和分析。...

具有类器官脑切片与癌细胞三维球体的共培养系统

关键词：共培养系统，类器官脑切片，癌细胞，三维球体，肿瘤微环境，脑转移，体外模型

本文介绍了一种内嗅-海马体脑片器官型培养的实验方案，该方法可重现缺血性脑损伤的多个方面。通过在研究神经元变化的同时，对神经血管系统的变化进行观察，该方案成为研究脑损伤后神经组织可塑性变化的多功能工具。...

内侧颞叶-海马器官型脑片培养中神经血管重塑的分析

本文介绍了一种利用脑片组织培养技术研究海马体出生后神经发生的实验方法。该方法可实现 体外...

用于研究出生后神经发生的器官型脑片培养

多种人类脑肿瘤局限于脑内的特定区域，且难以在培养条件下生长。本方案旨在研究肿瘤微环境的作用，并通过分析在小鼠脑组织切片中生长的荧光标记原代脑肿瘤细胞，探索新的药物治疗方法。...

一种用于研究肿瘤微环境及靶向药物治疗的脑肿瘤/器官型脑片共培养体系

人胶质母细胞瘤类器官切片培养模型用于研究肿瘤细胞迁移及抗侵袭药物的个体化效应

本文描述了鼻周皮层-海马体脑片的制备方法。在逐步且受控的血清剥夺条件下，这些脑片会表现出逐渐发展的类似癫痫样活动，可被视为一种癫痫发生的离体模型。该系统是监测自发性活动动态变化的优良工具，也可用于评估癫痫发生过程中神经炎症特征的进展。...

内嗅皮层-海马器官型脑片培养中的癫痫发生模型

我们介绍了一种在器官型脑切片模型中实时测量乳腺癌脑转移细胞对药物和辐射反应的实验方案。该方法提供了一种定量分析手段，可在脑微环境界面中以离体（ex...

一个 离体 脑切片模型用于研究和靶向乳腺癌脑转移肿瘤生长

学习使用振动切片机制备高质量器官型海马切片培养物的方法，用于研究神经保护作用和肿瘤细胞侵袭行为。该方案可确保组织完整性并减少污染风险，为神经科学和药理学研究提供可靠的体外模型。

用于研究肿瘤细胞神经保护作用及侵袭性的海马组织切片器官型培养模型

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