一种在96孔板表演细胞迁移/伤口愈合设备
2017年3月7日
在这里，我们提出了一个协议，以在96孔细胞培养板进行半高通量细胞迁移测定。该协议是建立在一个细胞单层一致划伤伤口快速，简便，经济的方法。
这种八通道机械细胞伤口仪的总体目标是使用伤口愈合测定以快速和半高通量的方式量化治疗对细胞迁移的影响，而无需使用昂贵和复杂的设备。细胞迁移是不同生理和强大生理条件下的重要细胞过程。体外伤口愈合测定用于不同的研究，包括癌症、肾脏和皮肤病学研究。
这种方法的主要优点是可以在 96 轨页面上监测对细胞迁移的影响，从而可以同时观察不同的处理条件。演示该程序的是我们实验室的研究生 Ka Chun Ng。要开始实验，请通过将缠绕销固定在相等的距离来准备销架。
握住移液器吸头并上下移动可调节的缠绕针以调整吸头高度。接下来，在 96 孔培养板上安装不同品牌的可调节导向杆，并确保受伤区域处于固定位置。拧紧六角螺钉，固定可调节的缠绕销。
拧紧两端的内六角头盖，将导向杆固定到位。使用 M5 六角扳手松开内六角头盖。将适当数量的调节环插入销架的两侧，使导向杆与 96 孔培养板的宽度完美贴合。
然后拧紧内六角头帽以固定导向杆。通过用无菌 10 微升塑料移液管吸头安装缠绕销来开始调整导向杆。接下来，用 M5 六角扳手松开内六角头盖。
握住伤口，将伤口针浸入 96 孔培养板的一列中。然后调整导向杆的高度，直到所有尖端几乎不接触孔的底部。拧紧内六角头盖。
确保伤口现在完全安装在培养板上，并且针头位于孔的中间。将伤口垂直于平坦、无菌的表面（如培养皿），然后用 M3 六角扳手松开所有六角螺钉。轻敲伤口，直到所有尖端均匀地接触表面。
尖端均匀接触表面后，再次拧紧六角螺钉以将销锁定到位。然后通过在平坦的无菌表面上轻轻敲击伤口来检查每个尖端的均匀度。将人脐血管内皮细胞接种在 0.1% 明胶包被的 96 孔细胞培养板上。
在补充有 20% 热灭活胎牛血清、1% 青霉素链霉素和 0.09 克/升肝素的 199 培养基中培养细胞。使用前，将细胞保存在 5% 二氧化碳在 37 摄氏度的加湿培养箱中过夜。一旦细胞获得 100% 汇合，将伤口尖端放在培养板同一列内每个孔的最左侧。
将伤口滑过井的另一侧。确保伤痕尖端接触井底。为确保细胞 molinar 的每个孔中的伤口居中并处于同一波中，请将横跨孔的伤口摆动到另一端。
对所有列重复暂存。受伤后，丢弃每个孔中的培养基，并用含有测试化合物的新鲜培养基替换。然后进行数据采集和图像分析。
刮擦后立即获得一排和一列孔的代表性图像，可以定量分析每个伤口的宽度。伤口图像来自人脐静脉内皮细胞和人真皮纤维原始细胞。虚线表示伤口区域，实线表示细胞迁移区域。
观看本视频后，您应该对如何使用该设备以半高通量方式在 96 孔页中进行伤口愈合测定，并确保每个孔都被伤口机划伤。
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概述
本文介绍了一种利用八通道机械细胞划痕仪进行半高通量细胞迁移实验的方案。该方法能够以经济高效的方式快速定量评估处理因素对细胞迁移的影响。
关键研究组成部分
科学领域
- 细胞迁移
- 伤口愈合实验
- 体外研究
背景
- 细胞迁移在多种生理过程中至关重要。
- 划痕愈合实验常用于癌症和皮肤科研究。
- 该方法可同时观察多种处理条件。
- 采用96孔板格式以提高实验效率。
研究目的
- 建立一种简单且经济的细胞迁移研究方案。
- 实现对处理效应的快速评估。
- 促进高通量实验的开展。
使用的方法
- 制备带有损伤针的针座。
- 使用机械细胞划痕仪创建划痕伤口。
- 监测细胞在不同处理条件下的迁移反应。
- 采用96孔细胞培养板进行半高通量分析。
主要结果
- 证明了机械细胞划痕装置的有效性。
- 展示了在不同条件下监测细胞迁移能力的方法。
- 验证了该实验方案的高效性与简便性。
- 提供了关于处理因素对细胞行为影响的深入见解。
结论
- 该方案为研究细胞迁移提供了一种可靠的方法。
- 它适用于多种研究应用，包括癌症研究。
- 该方法提高了高通量实验的能力。
常见问题
行业重要性概述
八通道机械细胞划痕仪可在96孔板中实现半高通量的细胞划痕愈合实验，支持对药物处理对细胞迁移影响的快速评估。该方法通过在多种条件下提供可重复、定量的划痕参数，提高了靶点验证的预测可信度。该技术满足了药物早期筛选阶段对可扩展、低成本检测方法的关键需求，有助于做出继续或终止项目的决策。
生物制药研发中的战略应用
早期发现与靶点验证
- 科学价值：通过量化细胞对化合物或基因扰动的迁移反应，实现对治疗假设的验证。
- 操作价值：利用可调节的针头和导向杆产生清晰且可重复的划痕，降低迁移测量中的变异性。
- 预测价值：通过标准化的伤口创建支持机制性风险评估，实现不同处理组间迁移速率的可靠比较。
筛选与检测方法开发
- 科学价值：通过生成一致的去细胞区域，促进下游化合物筛选中经验证的生物系统的制备。
- 操作价值：使用一次性移液器吸头以最大限度减少交叉污染，并确保操作便捷，从而提高检测的标准化水平。
- 可扩展性：可在96孔板上同时监测多种处理条件，无需昂贵设备即可提高通量。
转化与临床前研究
- 转化连续性：通过可量化的迁移读数，支持在血管生成和肿瘤转移研究中进行与疾病相关的建模。
- 临床前一致性：生成适用于评估化合物对血管和皮肤通路相关细胞行为影响的数据。
- 基于风险的决策：可根据迁移抑制或促进特征，实现候选药物的早期优先筛选。
流程与工作流整合
该方法适用于从靶点验证到先导化合物筛选的整个发现流程，可提供基于细胞迁移的表型数据，用于指导化合物的筛选与选择。
- 发现生物学：通过在受控的伤口环境中测量细胞对刺激的反应，支持假设验证和通路阐明。
- 筛选：通过随时间推移对伤口闭合进行图像分析，提供可直接用于检测的准备状态和定量输出，实现对化合物的可靠评估。
- 分析：提供可量化的伤口宽度和细胞迁移面积等指标，帮助研究团队比较不同条件并评估治疗效果。
- 转化研究：通过在癌症、血管和皮肤疾病模型中应用，将细胞迁移这一关键病理生理过程与临床前研究连续性相连接。
- 企业级复用：作为一个可重复使用且可灭菌的平台，支持跨项目和团队的多次迁移实验。
运营与企业影响
- 科学价值：通过降低迁移实验中的机制模糊性，提高靶点验证的预测可信度。
- 操作价值：通过可调节组件和一次性吸头，增强实验的标准化、可重复性和可扩展性。
- 战略价值：通过实现多种条件的快速平行评估，优化决策流程并提升资本使用效率。
- 项目组合影响：在药物发现流程早期提供定量的迁移数据，支持基于风险调整的优先级排序。
实施注意事项
- 需要接受无菌操作技术和培养板操作的基础培训，以正确对准伤口器并调整针头高度。
- 依赖于标准的96孔板读板仪或成像系统，用于进行延时或终点伤口分析。
- 需在不同操作者之间标准化划伤压力和针头高度，以确保实验间的可重复性。
- 在应用于影响单层细胞形成的不同类型细胞或包被条件时，需考虑相应的适应性调整。
- 由于需要手动将伤口器在培养板上滑动，若操作未得到适当引导，可能引入操作者依赖性的变异，存在一定局限性。
