Name: 一个定制HPLC纯化协议，产量高纯度淀粉样蛋白β42和贝塔淀粉样蛋白肽40，有能力寡聚物形成的 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: 学习定制HPLC纯化方案，用于获取高纯度Aβ42和Aβ40淀粉样蛋白肽。该方法支持寡聚体形成研究，为阿尔茨海默病神经科学研究提供可靠基础。

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作者感谢安捷伦公司提供的技术支持。凯特·马凯姆（Kate Markham）和拉斐尔·帕洛米诺（Rafael Palomino）在Aβ肽的合成与纯化初期提供了帮助，在此致谢；李孝维博士（Dr Hsiau-Wei Lee）协助完成了 manuscript 中图1的制备工作，特此感谢。

1. Aβ40 或 Aβ42 肽的制备型高效液相色谱纯化
<ol>
	<li>准备用于高效液相色谱纯化的以下缓冲液。
	<ol>
		<li>通过将 1.3 mL 的 NH4OH（28% 溶液）加入 1,000 mL 超纯水中，配制缓冲液 A（20 mM NH4OH）。</li>
		<li>通过将 1.3 mL 的 NH4OH（28% 溶液）加入 800 mL HPLC 级乙腈和 200 mL 超纯水的混合溶液中，配制缓冲液 B（含 20 mM NH4OH 的 80% 乙腈）。</li>
		<li>通过将 100 µL 的 NH4OH（28% 溶液）加入 100 mL 超纯水中，配制样品溶解缓冲液（0.1% NH4OH）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>按照图 1 所示设置高效液相色谱仪。
	<ol>
		<li>使用聚合物管路将装有缓冲液 A 和缓冲液 B 的溶剂瓶连接至高效液相色谱泵的入口。使用一体式接头将聚合物管路固定在高效液相色谱泵上。确保每种缓冲液的聚合物管路连接至仪器正确的入口阀。为高效液相色谱泵配备脱气装置。</li>
		<li>使用聚合物管路将高效液相色谱泵与制备柱（300 Å 8 µm 25 mm × 300 mm）的入口连接（图 1B，最左侧柱子，参见材料列表）。
		<ol>
			<li>使用一体式手紧接头将聚合物管路连接至制备柱。确保聚合物柱方向正确。 
			注：制备柱的固定相由聚（苯乙烯-二乙烯基苯）颗粒组成。聚合物柱的正确方向在外壳上以单个方向箭头标示。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>使用聚合物管路将柱子的出口连接至双波长检测器，并将波长检测器设置为 214 nm 和 280 nm。
		<ol>
			<li>通过更改内置高效液相色谱软件中“设置仪器方法”选项内的检测波长参数来调整波长。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>使用一体式手紧接头将聚合物管路连接至波长检测器的入口。将聚合物管路连接至波长检测器的输出阀。使用一体式手紧接头将聚合物管路连接至高效液相色谱检测器的出口阀。此管路将作为样品收集管路。 
		注：Aβ 肽缺乏强生色团，因此必须使用 214 nm 作为峰收集的主要紫外（UV）波长。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="用于化合物分离和分析的高效液相色谱（HPLC）系统装置。" src="/files/ftp_upload/55482/55482fig1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图1"> 
图1：用于纯化淀粉样β肽的高效液相色谱（HPLC）仪器实验装置。（A）配备脱气装置和设定在214 nm与280 nm的可变波长检测器的四元HPLC泵；（B）用于纯化淀粉样β肽的HPLC色谱柱，从左至右分别为25 × 300 mm2制备柱、7.5 × 300 mm2半制备柱和4.6 × 250 mm2分析柱；（C）用于分析型HPLC的带20 µL不锈钢进样环的手动进样器；（D）用于制备和半制备纯化的带10 mL不锈钢进样环的手动进样器。<a href="http://cloudfront.jove.com/files/ftp_upload/55482/55482fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<ol start="3">
	<li>按照表1所示设置HPLC软件运行纯化方法。通过更改HPLC软件中“设置仪器方法”选项内的溶剂时间表参数来输入纯化方法。点击HPLC软件上的“开启”按钮，启动HPLC泵。 
	注意：泵将开始通过制备柱和HPLC仪器输送缓冲液A和缓冲液B的初始比例。
	<ol>
		<li>让系统平衡30分钟，以确保充分平衡。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<table fo:keep-together.within-page="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>时间 / min</td>
			<td>% 缓冲液 Aa</td>
			<td>% 缓冲液 Bb</td>
			<td>流速d / mL min-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0</td>
			<td>80</td>
			<td>20</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>45</td>
			<td>75.5</td>
			<td>24.5</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>45.01</td>
			<td>80</td>
			<td>20</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>52.01</td>
			<td>80</td>
			<td>20</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>52.02</td>
			<td>73</td>
			<td>27</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>85</td>
			<td>73</td>
			<td>27</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>92</td>
			<td>5</td>
			<td>95c</td>
			<td>6</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表1：使用25 × 300 mm聚合物柱纯化Aβ42和Aβ40肽的时间表。 a缓冲液A - 含20 mM NH4OH的H2O；b80% MeCN / 20% H2O，含20 mM NH4OH；c运行15分钟，用于在下一次样品进样前清洗色谱柱；d为了在HPLC仪器上实现6 mL/min的流速，需将压力上限降低至200 bar。
<ol start="4">
	<li>Aβ 肽样品的纯化 
	注意：粗品肽通过自动固相肽合成获得。10
	<ol>
		<li>将 3 mg 粗 Aβ 肽溶解于 4 mL 样品溶解缓冲液中。在室温下以 40 kHz 频率超声处理样品 30–60 秒以促进溶解。</li>
		<li>使用配有 16 号不锈钢针头的 5 mL 塑料注射器将整个样品注入 HPLC 色谱柱。按照步骤 1.3 中所述运行纯化方法。 
		注意：该系统可通过配备 10 mL 不锈钢进样环的手动进样器实现样品进样（图 1D）。目标 Aβ 肽将在 72 至 74 分钟之间以尖锐且分离良好的峰形式洗脱（图 2C）。</li>
		<li>将洗脱液收集至 50 mL 圆锥形离心管中。通过直接进样质谱法分析收集的洗脱液，确认 Aβ 峰的身份。11 洗脱液可在 -20 °C 下保存最多 12 小时。 
		注意：由于肽可能发生氧化，不建议将溶液保存超过 12 小时。</li>
		<li>通过液氮快速冷冻收集的 Aβ 肽分装样品，并进行冻干以分离纯化后的肽。在 -60 °C 温度和 20 mTorr 压力下冷冻干燥样品 24 小时完成冻干过程。</li>
		<li>按照下述分析型 HPLC 方案检测 Aβ 肽的纯度。将肽以冻干粉形式储存于 -20 °C，可保存长达 6 个月。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 纯化Aβ蛋白的分析型HPLC分析
<ol>
	<li>按照上述方案第1.1节所述配制高效液相色谱（HPLC）缓冲液。</li>
	<li>根据步骤1.2.1设置分析型HPLC系统，如图1所示，安装4.6 × 250 mm分析柱（图1B，最右侧色谱柱），并在仪器上装配带有20 µL不锈钢进样环的手动进样器（图1C）。</li>
	<li>按照步骤1.3中的类似说明，在HPLC软件中编程，运行如表2所示的分析方法。</li>
</ol>
<table fo:keep-together.within-page="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>时间 / min</td>
			<td>% 缓冲液 Aa</td>
			<td>% 缓冲液 Bb</td>
			<td>流速 / mL min-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0</td>
			<td>95</td>
			<td>5</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30</td>
			<td>50</td>
			<td>50</td>
			<td>1</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
表2：Aβ肽的HPLC纯度分析时间表。a缓冲液A - 含20 mM NH4OH的H2O；b80% MeCN / 20% H2O，含20 mM NH4OH。
<ol start="4">
	<li>Aβ 肽纯度分析
	<ol>
		<li>将纯化后的肽溶解于样品缓冲液中，配制浓度为 1 mg/mL 的溶液。 
		注：缓冲液配方见第 1.1 小节。通过测定蛋白质在 280 nm 处的吸光度（A280nm）来确定蛋白浓度。12 用于浓度计算的摩尔消光系数（ε）为 ε = 1,490 dm3 mol-1 cm-1。13</li>
		<li>取 20 µL 的 1 mg/mL（222 µM）溶液注入 HPLC 色谱柱，运行步骤 2.3 中设定的分析方法。 
		注：未用于分析的剩余溶液可用液氮速冻后冻干回收 Aβ 肽。冻干操作细节见第 1.4.4 小节。Aβ 肽在分析柱上的洗脱时间为 16 至 18 分钟（图 2D）。使用 HPLC 仪器配套的内置积分分析软件确定 Aβ 肽的纯度。纯度通过积分色谱图中各个单独峰并计算肽峰所占面积百分比来确定。通常，纯度应达到 >95%。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
<img alt="色谱结果，吸光度随时间变化曲线，蛋白质分离分析，已标记峰位。" src="/files/ftp_upload/55482/55482fig2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="图2"> 
图2：Aβ42的代表性高效液相色谱图谱。 (A传统C4 硅胶纯化，条件：缓冲液A：H2O 含 0.1% 三氟乙酸（TFA），缓冲液 B：MeCN（乙腈）含 0.1% TFA，梯度：在 40 分钟内缓冲液 B 从 20% 升至 27%，随后等度洗脱，保持 27% 缓冲液 B；（B) 使用 25 x 300 mm 柱进行制备纯化2 聚合物柱，条件：缓冲液A：H2O，含20 mM NH4OH，缓冲液B：80% MeCN / 20% H2O，含20 mM NH4OH，梯度：20% 至 27% 缓冲液 B，70 分钟内完成，随后等度洗脱，27% 缓冲液 B；C) 使用 25 x 300 mm 柱进行优化的制备级纯化2 聚合物柱，条件详见方案描述文本第1.3小节中的表1；D) 使用 4.6 x 250 mm 分析型高效液相色谱2 聚合物柱，条件：缓冲液A：H2O，含20 mM NH4OH，缓冲液B：80% MeCN / 20% H2O，含20 mM NH4OH，30分钟内缓冲液B从5%梯度升至50%。在A、B和C部分中，对应Aβ42的峰以星号标记。收集C部分中标记的Aβ42峰，其纯度为 &gt;如D部分所示，95%。采用质谱法确定Aβ42峰的身份。 <a href="http://cloudfront.jove.com/files/ftp_upload/55482/55482fig2large.jpg" target="_blank">请点击此处以查看此图的放大版本。</a>

<ol><li>Querfurth, H. W., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20107219">Alzheimer's Disease.</a> N. Engl. J. Med. 362 (4), 329-344 (2010).</li>
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<li>Thess, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequence-engineered+mRNA+Without+Chemical+Nucleoside+Modifications+Enables+an+Effective+Protein+Therapy+in+Large+Animals%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Sequence-engineered mRNA Without Chemical Nucleoside Modifications Enables an Effective Protein Therapy in Large Animals.</a> Mol Ther. 23 (9), 1456-1464 (2015).</li>
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<li>Thompson, J. A., Lim, T. K., Barrow, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On-line+High-performance+Liquid+Chromatography%2FMass+Spectrometric+Investigation+of+Amyloid-%CE%B2+Peptide+Variants+Found+in+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Commun.+Mass+Spectrom%22%5BJournal%5D)">On-line High-performance Liquid Chromatography/Mass Spectrometric Investigation of Amyloid-β Peptide Variants Found in Alzheimer's Disease.</a> Rapid Commun. Mass Spectrom. 13 (23), 2348-2351 (1999).</li>
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<li>Ioannou, J. C., Donald, A. M., Tromp, R. H. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0268005X1400469X">Characterizing the secondary structure changes occurring in high density systems of BLG dissolved in aqueous pH 3 buffer.</a> Food Hydro. 46, 216-225 (2015).</li>
<li>Rahimi, F., Maiti, P., Bitan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photo-Induced+Cross-Linking+of+Unmodified+Proteins+%28PICUP%29+Applied+to+Amyloidogenic+Peptides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Photo-Induced Cross-Linking of Unmodified Proteins (PICUP) Applied to Amyloidogenic Peptides.</a> J. Vis. Exp. (23), e1071(2009).</li>
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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

Aβ 肽的高效液相色谱纯化在很大程度上取决于所采用的固定相和用于洗脱肽段的流动相的选择。由于该肽段的等电点较低且极易发生聚集，使用传统的疏水蛋白分离色谱条件（如 C4 或 C8 固定相结合酸性流动相洗脱剂）具有挑战性，此时 Aβ 肽通常以一个宽而拖尾、未完全分离的峰形式洗脱（图 2A）。
为解决这一问题，发现PLRP-S固定相在高pH条件下化学性质稳定，适用于Aβ肽的纯化（图2B和2C）。使用高pH流动相可最大程度减少聚集程度，经优化后可获得尖锐且分离良好的峰。在优化后的方案中，缓冲液B的比例在52分钟时迅速从20%升至27%，从而得到清晰界定的Aβ峰（图2C）。该优化方案的前提是所有疏水性杂质在缓冲液B浓度初始从20%升至24.5%的过程中已从色谱柱中洗脱。若存在与Aβ肽疏水性相近的杂质，则可能需要进一步优化HPLC方案。该优化方法在不同批次合成的Aβ肽之间具有高度可重复性，并且无需调整优化程序即可用于纯化肽的40和42两种变体（...

阿尔茨海默病是一种影响全球超过3500万人的神经退行性疾病。1 在该病的发病和发展过程中起关键作用的是一种极易聚集的疏水性多肽——淀粉样蛋白β（Aβ）。2 Aβ的长度介于36至43个氨基酸之间，但普遍认为，由42个氨基酸组成的变体——淀粉样蛋白β42（Aβ42）——是该蛋白最具毒性的形式。3 这主要归因于Aβ42易于形成可扩散的寡聚体物种，这些寡聚体被认为具有特别强的神经毒性。4 为了进一步加深对Aβ多肽的理解，常规获得高纯度的样品至关重要。已有研究表明，痕量杂质的存在会显著改变该多肽的聚集倾向性。5
传统上，疏水性多肽（如 Aβ）的高效液相色谱（HPLC）分离通常采用基于硅胶的 C4 或 C8 固定相与酸性流动相相结合的方法6。然而，此类条件可能给多肽的纯化带来挑战。Aβ 多肽的等电点较低（pI 约为 5.5）7，意味着在酸性条件下，多肽更容易发生聚集，从而产生宽而未分离的 HPLC 峰，这类峰通常难以分离（图 2A）。此外，这些宽峰中常含有杂质，可能影响多肽的聚集特性，通常需要进行后续多轮纯化，这会显著降低最终获得的多肽产量。
聚（苯乙烯/二乙烯基苯）固定相PLRP-S为纯化疏水性肽段提供了一种替代方法。该固定相已被用于多种不同蛋白质和信使核糖核酸（mRNA）的纯化8,9。PLRP-S固定相在反相分离过程中无需额外的烷基配体，更重要的是，其在高pH条件下具有化学稳定性，有助于肽段的去聚集7。本文中，我们报道了一种定制的高效液相色谱（HPLC）纯化方案，可获得高纯度的淀粉样蛋白β42（Aβ42）和淀粉样蛋白β40（Aβ40）肽段。

<table><tbody><tr><td>安捷伦 1260 Infinity II 四元泵</td><td>安捷伦</td><td>G7111B</td><td>http://www.agilent.com/zh-cn/products/液相色谱/液相色谱泵和真空脱气机/1260-infinity-ii-四元泵</td></tr><tr><td>安捷伦 1260 Infinity II 双通道可变波长检测器</td><td>安捷伦</td><td>G7114A</td><td>http://www.agilent.com/en-us/products/liquid-chromatography/lc-detectors/1260-infinity-ii-variable-wavelength-detector</td></tr><tr><td>配备10 mL不锈钢进样环的Agilent 1260 Infinity II手动进样器</td><td>安捷伦</td><td>0101-1232</td><td>http://www.agilent.com/zh-cn/products/liquid-chromatography/lc-injection-systems/1260-infinity-ii-manual-injector</td></tr><tr><td>配备20 µL进样环的Agilent 1260 Infinity II手动进样器 &amp;micro;L型不锈钢样品环</td><td>安捷伦</td><td>G1328C</td><td>http://www.agilent.com/en-us/products/liquid-chromatography/lc-injection-systems/1260-infinity-ii-manual-injector</td></tr><tr><td>环形支架安装支架</td><td>安捷伦</td><td>1400-3166</td><td></td></tr><tr><td>安捷伦 PLRP-S 300 &amp;Aring; 5&amp;nbsp;&amp;micro;4.6 × 250 mm（分析柱）</td><td>安捷伦</td><td>PL1512-5501</td><td>http://www.agilent.com/zh-cn/products/液相色谱/液相色谱柱/生物分子分离/plrp-s-生物分子柱#特点</td></tr><tr><td>A&amp;beta;42 或 A&amp;beta;40肽</td><td></td><td></td><td>使用CEM liberty全自动多肽合成仪在实验室内部合成。</td></tr><tr><td>氨水（NH&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;OH，28% 溶液</td><td>Fisher Scientific</td><td>A669-500</td><td></td></tr><tr><td>乙腈</td><td>Fisher Scientific</td><td>A998-4</td><td></td></tr><tr><td>HPLC级水</td><td>Fisher Scientific</td><td>W5-4</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 50 mL 圆锥形离心管</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-954-49A</td><td></td></tr><tr><td>Supelco PEEK 螺帽 一体式指旋接头，每包5个</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z227250</td><td></td></tr><tr><td>Normject 5&amp;nbsp;无菌注射器</td><td>Fisher Scientific</td><td>1481729</td><td></td></tr><tr><td>16 号不锈钢针头</td><td>Rheodyne</td><td>3725-086</td><td></td></tr></tbody></table>

一种定制的高效液相色谱纯化方案，可获得高纯度的淀粉样蛋白β42与淀粉样蛋白β40多肽，并支持寡聚体形成

A Tailored HPLC Purification Protocol That Yields High-purity Amyloid Beta 42 and Amyloid Beta 40 Peptides, Capable of Oligomer Formation

淀粉样蛋白原性肽（如与阿尔茨海默病相关的淀粉样蛋白β（Aβ））在获取高纯度材料时可能面临重大挑战。本文介绍了一种定制的高效液相色谱（HPLC）纯化方案，用于制备高纯度的淀粉样蛋白β42（Aβ42）和淀粉样蛋白β40（Aβ40）肽。我们发现，在高pH条件下，使用市售的疏水性聚（苯乙烯/二乙烯基苯）固定相——聚合物实验室反相-苯乙烯-二乙烯基苯（PLRP-S），可在单次色谱运行中获得高纯度（&gt;95%）的Aβ42。该纯化方法具有高度可重复性，并可根据所需纯化的样品量调整为半制备或分析条件。该方案同样适用于Aβ40肽的纯化，效果相同，且无需修改方法。

使用PLRP-S固定相和高pH流动相联合纯化Aβ42肽，可在72至74分钟的保留时间内获得尖锐且分离良好的Aβ肽峰。图 2C）。通过直接进样质谱法对收集的洗脱液进行分析，以确认该峰的身份。洗脱液可在 -20 °C 在溶液中可保存长达12小时，更长时间的储存可能导致蛋白质氧化。为分离纯化后的肽段，将洗脱液在液氮中快速冷冻并冻干。纯化肽段的分析型高效液相色谱显示其纯度为 &gt;95% (图 2D）。相同的步骤也可用于纯化 Aβ40 肽（图3A）无需对方法进行修改。分析型高效液相色谱（HPLC）显示 Aβ40 的纯度大于 95%（图3B).
<img alt="色谱分析结果；吸光度随时间变化；214 nm 处的峰；分析方法示意图。" src="/files/ftp_upload/55482/55482fig3.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" ...

本文报道了一种定制的高效液相色谱（HPLC）纯化方案，可获得高纯度的淀粉样蛋白β42（Aβ42）和淀粉样蛋白β40（Aβ40）肽段，这些肽段具有形成寡聚体的能力。淀粉样蛋白β是一种极易聚集的疏水性肽段，与阿尔茨海默病密切相关。由于该肽段具有淀粉样蛋白生成特性，其纯化过程具有挑战性。

淀粉样蛋白生成肽（如与阿尔茨海默病相关的淀粉样蛋白β（Aβ））在尝试获得高...时可能带来显著挑战

本实验的总体目标是利用高效液相色谱（HPLC）纯化方法制备高纯度的淀粉样蛋白β42和淀粉样蛋白β40多肽，这些多肽能够形成寡聚体。淀粉样蛋白β多肽的生化特性常使其纯化过程较为困难，因此获得能够形成寡聚体的高纯度多肽具有挑战性。本实验方案有助于缓解这一难题。在进行该HPLC实验前，需预先配制好缓冲液A和缓冲液B，以及用于样品溶解的缓冲液。设置HPLC系统时，首先将缓冲液A和缓冲液B的瓶体连接至泵的进液口，使用聚合物管路和单件式接头，并注意不要混淆阀门。将聚合物管路从泵的出口连接至制备柱的入口，单件式接头用手拧紧即可，并确保色谱柱安装方向正确。接着，用另一段聚合物管路将色谱柱出口连接至双波长检测器入口，接头同样用手拧紧。然后在HPLC系统软件中，将波长检测器设置为在214和280纳米处检测峰信号。接下来，使用聚合物管路和一个手拧紧的单件式接头，将波长检测器的输出阀连接至HPLC检测器的出口阀，该管路将作为样品收集管路。随后在HPLC软件中编程运行纯化方法：在“设置仪器方法”选项中，通过修改溶剂时间表参数来输入纯化程序。最后，在HPLC软件中启动HPLC泵。此时泵将开始以设定的初始比例将缓冲液A和缓冲液B输送至HPLC仪器中的制备柱。系统必须在进样前平衡30分钟，此步骤至关重要。实验开始时，将3毫克粗提A

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一个定制HPLC纯化协议，产量高纯度淀粉样蛋白β42和贝塔淀粉样蛋白肽40，有能力寡聚物形成的

阿尔茨海默病的一个特征是Aβ1-42肽水平升高。本文提供了一种合成Aβ1-42寡聚体的实验方案，该寡聚体可损害海马区的长时程增强作用（Long-Term...

制备寡聚态β-淀粉样蛋白1-42并诱导海马脑片突触可塑性损伤

适配体是通过筛选获得的短链核糖/脱氧核糖寡核苷酸 体外...

阿尔茨海默病致病因子淀粉样β蛋白的适配体筛选

本文描述了一种快速了解细胞外基质中多糖结构的方法。该方法利用了糖基水解酶的特异性和质谱技术的高灵敏度，可分析极微量的样品。此技术可直接应用于组织本身。...

细胞外多糖的寡糖质谱分析（OLIMP）

本视频演示了使用密度梯度离心法和非淀粉样蛋白消化法从小鼠脑组织提取物中分离淀粉样纤维的实验方案。...

从脑组织提取物中分离淀粉样纤维

蛋白质可折叠成天然结构，也可错误折叠形成不溶性淀粉样蛋白。有利于错误折叠途径的条件可导致不同类型的淀粉样纤维形成。本文所述方法可实现天然蛋白质向淀粉样蛋白的快速转化 体外.

天然蛋白质快速生成淀粉样蛋白 体外

我们提出一种自动化、模块化的高通量方法，用于小规模微生物胞外多糖的鉴定与表征。该方法结合快速初筛以分析分泌多糖的总量，以及详细的碳水化合物指纹图谱分析，从而实现对新分离细菌菌株或完整菌株库的快速筛选。...

自动化模块化高通量胞外多糖筛选平台结合高灵敏度碳水化合物指纹图谱分析

开发了一种高通量方案，用于血浆中蛋白质组学与糖组学联合纯化及液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）定量分析。N-连接糖基化基序的脱酰胺分析特异性针对去糖基化位点。通过将滤膜辅助的N-糖链分离与糖链肼基标签标记过程中的个体性归一化策略相结合，实现了对N-糖链的准确定量。...

一种定量糖组学与蛋白质组学结合的纯化策略

用于芯片开发与HIV抗体谱型分析的N-聚糖化学-酶法合成

本方案描述了如何从合成肽制备Aβ寡聚体 体外...

A11阳性β-淀粉样蛋白寡聚体的制备及点印迹分析鉴定

这种结合质谱法蛋白质组学分析的生化纯化方法有助于对淀粉样纤维核心进行稳健表征，可能加速阿尔茨海默病防治靶点的发现。...

脑源性淀粉样纤维核心的生化纯化与蛋白质组学表征

本实验方案描述了四种不同真菌β-葡聚糖的纯化步骤及其后续研究，这些β-葡聚糖作为潜在的免疫调节分子，可增强小胶质细胞对胶质母细胞瘤细胞的抗肿瘤特性。...

分离与纯化真菌β-葡聚糖作为胶质母细胞瘤的免疫治疗策略

学习定制HPLC纯化方案，用于获取高纯度Aβ42和Aβ40淀粉样蛋白肽。该方法支持寡聚体形成研究，为阿尔茨海默病神经科学研究提供可靠基础。

一种定制的高效液相色谱纯化方案，可获得高纯度的淀粉样蛋白β42与淀粉样蛋白β40多肽，并支持寡聚体形成

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