Name: 经非透法皮下腹脂肪组织活检技术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: 学习非透热法皮下腹部脂肪组织活检技术，在局部麻醉下安全获取白色脂肪组织样本。该方法并发症发生率低，适用于临床和科研中的组织学分析与基因表达研究。

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本工作获得了欧盟“地平线2020”计划（资助协议编号：645710）和第七框架计划（资助协议编号：612547 和 319010）的资助。&#160;作者感谢 Fotini Sourli-Chasioti 博士在活检操作中的协助。作者同时感谢 Yiorgos Paterakis 先生在视频制作过程中提供的宝贵帮助。

该研究遵循《赫尔辛基宣言》所规定标准，并获得塞萨利大学运动科学系伦理委员会的批准。 &#914;i&#959;伦理委员会
1. 手术器械和耗材的准备
<ol>
	<li>将已消毒的手术区域放置在带四个轮子的手术托盘架上。</li>
	<li>将以下耗材和手术器械放置在带四个轮子的手术托盘架上： 
	直头手术剪一对（15 cm） 
	手术刀片（No. 11） 
	手术刀柄一个 
	弯头剪刀一对（14 cm） 
	蚊式止血钳一个 
	科赫钳一对 
	外科镊一个 
	聚维酮碘（置于无菌纱布上） 
	缝线一条（4.0） 
	直头剪刀一对（11 cm） 
	持针器一个（15 cm） 
	无菌纱布五块 
	粘性无菌纱布一块 
	带已消毒针头的10 mL注射器一支 
	2%利多卡因10 mL（不含肾上腺素） 
	已消毒外科手套一副</li>
	<li>将以下材料放置在另一个独立工作台上： 
	微量离心管两支 
	含5 mL 10%福尔马林的试管一支 
	盛有50–100 mL、温度为-190 °C液氮的小型容器一个。</li>
</ol>
2. 受试者的准备
<ol>
	<li>受试者应在活检操作前禁食 8 小时15。</li>
	<li>受试者应在活检前 72 小时避免体力活动、过度应激、饮酒以及主动和被动吸烟16,17。</li>
</ol>
3. 皮下脂肪组织活检操作
<ol>
	<li>将受试者仰卧位安置于手术床上。</li>
	<li>使用聚维酮碘对切口区域进行消毒。</li>
	<li>向选定区域缓慢而稳定地注射 10 mL 的 2% 利多卡因（不含肾上腺素）18，以实现局部麻醉。</li>
	<li>在该区域覆盖无菌手术巾，遮盖受试者身体，仅暴露切口部位。</li>
	<li>至少 3–5 分钟后，用一对镊子对局部麻醉区域施加压力，并询问受试者是否感到疼痛19，以确认已达到充分的局部麻醉效果。</li>
	<li>将 11 号手术刀片安装至刀柄上。</li>
	<li>在脐部左侧或右侧 3–5 cm 处，做一长度为 2–2.5 cm 的切口。</li>
	<li>使用一对直的 15 cm 手术剪剪除皮下组织。</li>
	<li>一旦暴露脂肪组织，使用一对镊子和一对弯的 14 cm 手术剪夹取并固定脂肪组织。</li>
	<li>切割并移除约 1 g 的脂肪组织。</li>
	<li>在组织取出后，将无菌纱布覆盖于切口处，以实现止血。</li>
	<li>确认止血完成后，用 14 cm 缝针夹住 4.0 缝线，同时用一对手术镊夹住皮肤，直至皮下组织清晰可见。</li>
	<li>将缝合针穿入皮肤，向皮下组织推进，同时保持皮肤与皮下组织紧密对合。</li>
	<li>使用缝合针在皮下组织内连续采用“之”字形缝合技术，直至针从皮肤外穿出。持续缝合直至皮肤切口完全闭合。</li>
	<li>在体外打结固定缝线。</li>
	<li>用生理盐水清洁切口区域，并覆盖无菌粘性纱布。</li>
</ol>
4. 组织样本的保存
<ol>
	<li>将采集的脂肪组织分为三份：150 mg、350 mg 和 500 mg。</li>
	<li>将150 mg和350 mg的样品组织分别放入微量离心管中。</li>
	<li>将两个微量离心管浸入盛有-190 °C液氮的小容器中，直至最终存入-80 °C冰箱中。 
	注意：预先使用无菌针头在微量离心管上穿刺一个小孔，以避免在-190 °C液氮中浸没时发生管体破裂。</li>
	<li>将500 mg用于组织学分析的样品组织浸入含有5 mL 10%福尔马林的试管中。 
	注意：仅在手术过程中出现大量出血时使用蚊式止血钳。在此类情况下，用蚊式止血钳夹住血管进行结扎并闭合，直至实现止血。</li>
</ol>

<ol><li>Bruening, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review%3A+comparative+effectiveness+of+core-needle+and+open+surgical+biopsy+to+diagnose+breast+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Intern+Med%22%5BJournal%5D)">Systematic review: comparative effectiveness of core-needle and open surgical biopsy to diagnose breast lesions.</a> Ann Intern Med. 152, 238-246 (2010).</li>
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<li>Campbell, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pilot+study+of+sampling+subcutaneous+adipose+tissue+to+examine+biomarkers+of+cancer+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Prev+Res%22%5BJournal%5D)">A pilot study of sampling subcutaneous adipose tissue to examine biomarkers of cancer risk.</a> Cancer Prev Res. 2, 37-42 (2009).</li>
<li>Jamurtas, A. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+a+single+bout+of+exercise+on+resting+energy+expenditure+and+respiratory+exchange+ratio%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">The effects of a single bout of exercise on resting energy expenditure and respiratory exchange ratio.</a> Eur J Appl Physiol. 92, 393-398 (2004).</li>
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</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

本研究旨在标准化一种针对健康男性在局部麻醉下进行皮下腹部脂肪组织活检的外科技术，该技术采用非电刀方法。电刀在手术室中常被使用，但可能产生一些副作用（例如，闪燃和环境毒性）9以及延迟愈合10。这些电刀相关的不良效应可能对医护人员及患者/受试者均构成健康风险。因此，有必要采用一种非电刀的外科方法进行皮下脂肪组织活检。
我们在术后两天观察到三名参与者出现过度出血。这三名个体均报告切口部位有疼痛。为处理这些情况，重新打开皮肤切口部位，清除多余的血液，并用生理盐水清洗后，采用上述相同的技术重新缝合。此后未报告任何并发症，随后几天观察到正常愈合。我们的结果显示，采用非电凝法后不良反应极少：在115例手术中，有3例出现术后过度出血（占2.61%）。既往基于针吸脂肪组织活检的研究显示，10名参与者中有1人在术后12小时出现轻微出血15，而在健康肥胖个体中，采用侧切式脂肪组织活检针技术后未发生明显出血6<...

脂肪组织活检可提供组织样本，经分析后能够深入揭示与代谢及疾病相关的机制。例如，该技术可用于乳腺癌肿瘤的鉴定1脂肪酸组成检测2以及对重要代谢和激素疾病通路的研究3为了获取腹部皮下脂肪组织活检样本，研究人员和临床医生通常采用手术法或针刺法。然而，手术法获取的皮下脂肪活检样本可能更有利于全面揭示复杂的生物学机制例如， 信使核糖核酸（mRNA）表达，组织学分析 等等。]4此前已在健康成人中使用过4 可在床旁安全操作5.
基于针头的活检技术需要进行强烈的脂肪抽吸，可能会破坏组织的完整性，且通常仅能获取少量组织（100–500 mg）6。这些组织样本可能不适合复杂的科学研究。此外，与基于针头的技术相比，手术法皮下脂肪活检可提供更全面的组织样本，有助于更完整地评估多种炎症指标（例如，B细胞和T细胞信号传导）、细胞骨架调控、细胞通路、脂质、碳水化合物和氨基酸的代谢通路，以及氧化磷酸化通路4。同时，基于针头的技术相比手术法具有更高的血液细胞污染风险4，且对组织纤维化区域提供的信息较少4,7,8。
通常，外科脂肪组织活检包括使用电灼术处理血管以止血，防止过度出血9。电灼术也可用于烧灼和破坏受肿瘤、疣或疾病感染的组织9。该技术特别适用于神经外科和眼科手术9。
过度使用电热疗法可能导致坏死组织的形成，从而引发感染并延迟愈合过程10。事实上，已有报道称电热疗法可引起闪光火灾和组织皮肤损伤等副作用9。此外，人们还关注电热疗法在手术环境中释放的手术烟雾的毒性，这些烟雾可能被受试者/患者及手术人员吸入9。事实上，使用电热疗法可能导致手术室内的空气毒性相当于吸六支香烟所产生的水平11，尽管手术室通常具备良好的通风系统，污染仍可持续至少20分钟12。然而，在接受扁桃体切除术的患者中，与传统的结扎止血法相比，电热疗法在术后疼痛13和出血14方面表现出较少但无显著差异的结果。总体而言，关于健康个体在脂肪组织活检后术后疼痛和出血率差异的证据极为有限。鉴于目前缺乏相关证据以及电热疗法存在的副作用，有必要对非电热疗法的脂肪组织活检方法进行标准化。因此，本研究旨在标准化一种在健康男性中通过局部麻醉、采用非电热疗法进行的腹部皮下脂肪组织活检的外科技术。此外，我们还概述了组织采集后的处理流程，以用于测定mRNA表达水平、蛋白质浓度以及进行组织学分析。

<table><tbody><tr><td>&amp;nbsp;已消毒的手术区域&amp;nbsp;</td><td>Hartmann</td><td>23516-00</td><td></td></tr><tr><td>不锈钢器械架（手术用Mayo架）</td><td>Medical Device Depot Inc.</td><td>32000</td><td></td></tr><tr><td>直剪刀，15 cm</td><td>Karl Storz</td><td>791903</td><td></td></tr><tr><td>11号手术刀片&amp;nbsp;</td><td>Swann-Morton</td><td>203</td><td>Bipolar，目录号 429011</td></tr><tr><td>3号手术刀柄</td><td>Karl Storz</td><td>488090</td><td></td></tr><tr><td>弯剪刀，14 cm</td><td>Karl Storz</td><td>511514, 752918</td><td></td></tr><tr><td>蚊式止血钳</td><td>Karl Storz</td><td>535012</td><td></td></tr><tr><td>Kocher镊子&amp;nbsp;</td><td>Karl Storz</td><td>530416</td><td>Bipolar，目录号 830316</td></tr><tr><td>手术镊</td><td>Karl Storz</td><td>793216</td><td>Bipolar，目录号 831016</td></tr><tr><td>聚维酮碘&amp;nbsp;</td><td>Various</td><td>不适用</td><td></td></tr><tr><td>4.0号Vicryl缝线</td><td>Johnsons</td><td>V4970H&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>直剪刀，11 cm</td><td>Karl Storz</td><td>512511 DS</td><td></td></tr><tr><td>持针器，15 cm</td><td>Karl Storz</td><td>515515</td><td>Bipolar，目录号 213015</td></tr><tr><td>&amp;nbsp;无菌纱布</td><td>Hartmann</td><td>3021</td><td></td></tr><tr><td>&amp;Alpha;粘性无菌纱布&amp;nbsp;</td><td>Digas medical equipment</td><td>2889</td><td></td></tr><tr><td>带消毒针头的10 mL注射器</td><td>Alpha medical solutions</td><td>10310-55-0010</td><td></td></tr><tr><td>2%利多卡因（不含肾上腺素）</td><td>Various</td><td>不适用</td><td></td></tr><tr><td>无菌外科手套&amp;nbsp;</td><td>Sempermed</td><td>10001</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf管</td><td>Kartell</td><td>16283</td><td></td></tr><tr><td>10%福尔马林&amp;nbsp;</td><td>Alpha medical solutions</td><td>11016-30-2909</td><td></td></tr><tr><td>120 mL试管</td><td>Digas medical equipment</td><td>9025</td><td></td></tr><tr><td>液氮，-190&amp;deg;C</td><td>Revival</td><td>不适用</td><td></td></tr></tbody></table>

一种通过非电灼法进行皮下腹部脂肪组织活检的技术

A Technique for Subcutaneous Abdominal Adipose Tissue Biopsy via a Non-diathermy Method

脂肪组织活检可提供组织样本，经分析后可能揭示与代谢及疾病相关的机制。为获取腹部皮下脂肪组织活检样本，研究人员和临床医生通常采用手术法或针刺法。然而，手术法获取的皮下脂肪活检样本可能更全面地反映白色脂肪组织中生物学指标的复杂性。通常，手术法脂肪组织活检会使用电凝术处理血管以止血，防止术中大量出血。但已有报道指出，电凝术可能引发闪燃、皮肤损伤等不良反应。因此，本研究旨在建立一种在局部麻醉下、采用非电凝术的标准化腹部手术法脂肪组织活检操作流程。我们对115名健康男性采用非电凝术的腹部手术法进行了皮下脂肪组织活检。结果显示，在115例操作中，仅有3例出现术后出血（占2.61%）。综上所述，我们所建立的非电凝术标准化腹部皮下脂肪组织手术活检方法可在床旁安全应用于健康男性，且不良反应极少。

参与者的特征信息如下所示 表1切口部位的缝线在接下来的8-12天内脱落。我们采用非电刀腹部手术活检法，在健康成年男性中总共完成了115例子皮下脂肪组织活检（年龄：35.2 ± 6.9岁；体重指数：27.3 ± 4.4；体脂百分比：27.0 ± 9.0%）。术后两天，有三例（发生率：2.61%）出现活检后过度出血。这三名出现过度出血的个体年龄均大于未出现副作用的个体 [t(113)= -2.115，p = 0.037]，且无其他差异（即， 体重指数和体脂百分比）被观察到（p &gt;两组之间差异无统计学意义（P > 0.05）。最后，每次手术后三个月，所有受试者均未报告任何不良反应（包括皮肤伤口）。
<img alt="参与者数据分析表；年龄、BMI、体脂率%；类别：总体、无副作用、出血" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55593/55593tbl1.jpg" data-altupdatedat="...

我们采用局部麻醉下非电刀法进行腹部脂肪组织活检，并对其操作进行了标准化。在115例手术中，出现3例术后出血过多的情况（占2.61%）。我们得出结论：采用非电刀法进行腹部脂肪组织外科活检可安全应用于健康男性。

脂肪组织活检可提供组织样本，经分析后可能揭示与代谢及疾病相关的机制。

皮下脂肪组织活检对于科研和健康至关重要，因为其能够揭示与疾病相关的脂肪组织机制。本文介绍了一种获取腹部皮下脂肪组织活检样本的技术。研究人员和临床医生通常采用基于针头的技术或基于手术的技术来获取此类样本。然而，需要注意的是，与基于针头的技术相比，手术技术能够更全面地提供白色脂肪组织中生物学指标的整体情况，而基于针头的技术可能导致误诊。例如，组织学分析对于科研和健康评估均至关重要，这一点尤其明显。总体而言，需要注意的是，手术技术已在男性和女性中均成功实施，并可在床旁安全进行。接受手术脂肪活检的受试者必须在活检前禁食8小时，并在活检前72小时内避免运动、过度应激、饮酒以及主动和被动吸烟。采取这些预防措施旨在尽量减少在分析白色脂肪组织样本时出现误导性结果的风险。我们首先准备脂肪组织活检 procedure 所需的材料。在带轮子的手术托盘上，我们放置一块无菌手术单。所需材料置于托盘上，包括：直剪刀一把，15厘米长。一把11号手术刀。一个手术刀柄。一把14厘米弯剪。一把蚊式止血钳，一把科赫钳，一把手术镊。无菌纱布上的聚维酮碘。4.0 规格缝线一根。直剪一把，11 厘米。一个持针器，15 厘米。五块无菌纱布。一块无菌粘性纱布。一支10毫升注射器，带消毒针头。10 mL 利多卡因，2%不含肾上腺素。一副消毒外科手套。在另一张实验台上，我们准备组织采集所需的以下材料：两个 Eppendorf 管。使用无菌针头在每个 Eppendorf 管的管盖上打一个小孔。这是因为当我们将Eppendorf管浸入零下190摄氏度的液氮中时，需要避免管盖破裂。一个装有5 mL 10%福尔马林的试管，以及一个装有零下190摄氏度液氮的小型容器。我们需要用液氮立即将含有组织的Eppendorf管浸入其中，以确保组织在最终保存前保持完整性。在准备好所有材料和耗材后，我们将患者置于手术床上，取仰卧位。术者位于手术床的一侧。术者首先使用聚维酮碘对腹部区域进行消毒，消毒范围为切口点周围15厘米。在切口部位注射10 mL 2%不含肾上腺素的利多卡因以实现局部麻醉。随后在该区域建立无菌外科手术区域。完成上述操作后，确认局部麻醉效果已达到。这一步骤大约需要三到五分钟。随后，外科医生将11号手术刀片与手术刀柄连接，切开皮肤和皮下组织，直至显露下方的脂肪组织。切口长度约为2至2.5厘米，位于距离脐部3至5厘米处。随后，外科医生使用一把直型手术剪（15厘米）剪除皮下组织。一旦暴露脂肪组织，即用一把镊子和一把弯型剪刀（14厘米）夹住脂肪组织，随后进行游离并剪除。去除的脂肪组织总量取决于将要进行的分析类型。根据我们的经验，大约一克脂肪组织已足够用于大多数组织学和基因表达分析。一旦取出脂肪组织，外科医生会在切口区域放置无菌纱布约30秒，以确保止血。确认止血完成后，外科医生使用带14厘米针头的4-0缝线，并用手术镊夹住皮肤，直至皮下组织可见。缝针从皮肤进入并指向皮下组织，同时将皮肤与皮下组织对合。随后缝针在皮下组织内以“之”字形方式继续进针，直至从皮肤外部穿出。这一步骤持续进行，直至皮肤切口完全闭合。最后，打结在体外完成。通常缝线会在8到12天内自行脱落，该技术整体上可减少术后皮肤瘢痕的形成。随后用生理盐水清洁创伤，并用无菌粘性纱布覆盖。您可能已经注意到，我们并未使用蚊式镊。这种器械仅在血管出血时使用。如果是这样，则使用蚊式镊子夹住血管并结扎，直至实现止血。需要注意的是，就我们的目的而言，所采集的样本重量约为一克。将采集的组织切成三份，分别称重为350毫克、150毫克和500毫克。将350毫克的样品放入一个Eppendorf管中，用于蛋白质水平分析。将150毫克的样品放入另一个Eppendorf管中，用于mRNA表达分析。这两个Eppendorf管应立即浸入装有液氮的小容器中，液氮温度为-190 °C，以确保样品在最终存入-80 °C冰箱前的完整性。最后，将500毫克的样本浸入含有5 mL 10%福尔马林的试管中，用于组织学分析。我们的技术基于一种非电切方法。我们使用无菌纱布进行止血，以消除术后皮肤损伤（如瘢痕）的风险。总体而言，我们的非电凝法副作用极小。本研究共进行了115例活检，仅出现三例过度出血，均发生在活检术后第二天。我们通过对这些个体重新打开创伤部位，进行引流、止血，并使用外科缝合钉进行处理。此后未观察到进一步的并发症，随后几天内伤口正常愈合。最后需要强调的是，在所有受试者每次活检操作三个月后均未观察到任何不良反应，包括皮肤瘢痕。我们的非电凝手术活检技术副作用极小，建议在需要全面了解白色脂肪组织生物学指标时使用。

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经非透法皮下腹脂肪组织活检技术

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由于肥胖与其他共病之间存在显著且负面的关联，研究脂肪组织在疾病和整体健康中的作用具有重要意义。本文介绍了一种分离和切除脂肪组织库的实验方案，可用于通过原位（in situ）和体外（in...

小鼠脂肪组织的定位、鉴定与切除

我们介绍了从鼠类腹股沟（皮下）和性腺周围（内脏）脂肪组织库中分离基质血管组分（SVF）的技术，以评估其基因表达和胶原酶活性。该方法包括利用免疫磁珠细胞分离技术富集Sca1high脂肪来源干细胞（ASCs）。...

脂肪库特异性Sca1high 脂肪源性干细胞（ASCs）的免疫磁珠分离

由于脂肪组织含有高含量的脂质，使用传统组织学方法对其进行可视化一直存在挑战。Adipo-Clear...

Adipo-Clear：一种用于脂肪组织三维成像的组织透明化方法

本文介绍了一种制备脂肪组织来源的基质血管组分的方案，并将其应用于骨关节炎患者，通过再生类似软骨的组织以改善膝关节功能。...

用于软骨再生的脂肪组织来源基质血管组分制备的临床方案

脂肪细胞存在于离散的脂肪库中，并在其独特的微环境中发挥多种作用。随着对脂肪细胞在不同区域特征和功能差异的不断揭示，标准化地鉴定和分离这些脂肪库对于该领域的进步至关重要。本文中，我们提供了一种详细的小鼠多种脂肪库切除方案。...

小鼠不同脂肪组织库的鉴定与分离

本文介绍了一种使用封闭系统装置进行人脂肪组织无酶微片段化的技术。该新方法可获得适用于体内移植、体外培养以及进一步细胞分离与表征的亚毫米级脂肪组织簇。...

人体脂肪组织微片段化用于细胞表型分析与分泌组表征

该论文及配套视频展示了一种经皮活检技术，用于获取脐周区域皮下脂肪组织的样本。该方法是一种低风险且高效的手段，可用于研究脂肪组织内的多种参数（如基因或蛋白质表达、酶活性、脂质含量）。...

采用微型抽脂技术获取人体皮下脂肪组织样本

本文介绍了一种详细方案，阐述如何利用从啮齿类动物或人类脂肪组织中分离出的微血管片段，作为一种简便的方法来构建具有功能性的血管化米色脂肪组织。...

由微血管片段构建血管化产热脂肪组织的三维培养

本研究探讨了穴位埋线疗法在肥胖治疗中的应用，涵盖患者管理、材料准备、穴位选择、手术操作及术后护理。...

穴位埋线疗法治疗腹部肥胖

学习非透热法皮下腹部脂肪组织活检技术，在局部麻醉下安全获取白色脂肪组织样本。该方法并发症发生率低，适用于临床和科研中的组织学分析与基因表达研究。

一种通过非电灼法进行皮下腹部脂肪组织活检的技术

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