Name: 一种测试洗手方法去除新发感染性病原体的方法 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 2 s
Description: 了解实验室评估不同洗手方法去除微生物效果的方案，使用非致病性大肠杆菌和Phi6噬菌体作为替代病原体，通过定量分析比较肥皂、氯溶液和酒精洗手液的效果。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本工作由美国国际开发署对外灾难援助办公室（AID-OFDA-A-15-00026）资助。Marlene Wolfe 获得美国国家科学基金会（资助号 0966093）支持。

伦理声明：本研究（以Phi6和E. coli作为埃博拉病毒的替代物）已获得塔夫茨医学中心和塔夫茨大学健康科学校区机构审查委员会批准（编号#12018）；哈佛大学已将审查权让渡给塔夫茨机构审查委员会。
注意：在开始本方案之前，必须完成两个步骤。首先，必须确定并选择一种生物安全等级1级（BSL-1）的替代物或无感染性的目标病原体版本，该版本需可用于人体受试者且使用安全30。由于本方案中需将生物体接种于人类志愿者的裸露双手，因此必须使用BSL-1级替代物或无感染性病原体。其次，在招募志愿者或开始实验之前，必须获得当地机构审查委员会（IRB）关于开展涉及人类受试者研究的批准。本方案的许多方面均可根据具体研究问题的需求进行调整。
1. 招募符合条件的人类受试者
<ol>
	<li>通过在公共布告栏张贴纸质传单以及向可能对参与研究感兴趣的群体发送电子邮件来招募志愿者。这些公告应包含研究目的、联系信息和入选标准。</li>
	<li>与志愿者会面以评估其是否符合入选条件。确认志愿者身体健康，年龄在18至65岁之间，目前未怀孕且未服用抗生素，并且无皮肤损伤/疾病、已知对手部清洁剂过敏，或与卫生相关的心理健康问题病史。</li>
	<li>让符合条件的志愿者阅读知情同意书。回答他们提出的问题，并由志愿者和研究人员在两份同意书上签字。保留一份副本，并将另一份提供给志愿者。</li>
	<li>进行基线调查，内容包括人口统计学信息、个人皮肤状况史以及近期手部清洁行为的信息。检查双手是否存在皮炎、皮肤损伤或其他基线皮肤异常的迹象31。</li>
	<li>为每位感兴趣的受试微生物安排两次测试会话（一次在有土壤负荷条件下测试，另一次在无土壤负荷条件下测试）。指导志愿者在测试前七天的洗脱期内避免使用抗菌产品，以避免个人使用产品带来的干扰。
	<ol>
		<li>向志愿者提供抗菌产品（洗发水、护发素和肥皂），用于替代其日常使用的产品。提供重型乙烯基手套，并指导受试者在使用家用清洁剂等产品时佩戴手套。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 准备应急响应中常用的手部消毒溶液（肥皂、酒精类手消毒剂、0.05% 高效漂白粉、二氯异氰尿酸钠和次氯酸钠溶液）
注意：氯溶液可在实验前最多12小时配制，但若储存过久会发生降解 &gt;12 h
<ol>
	<li>根据测试所针对的具体情境，选择并购买相应的肥皂。 
	注意：在大多数情况下，针对发展中国家的传染病紧急情况，这将是一块肥皂。</li>
	<li>根据测试所针对的具体情境，选择并购买相应的ABHS溶液。 
	注意：所选用的含酒精洗手液中乙醇浓度应大于或等于70%，以确保有效性。</li>
	<li>配制0.05%的次氯酸钙（Ca(ClO)₂）溶液2）溶液，通过加入颗粒状 Ca(ClO)2 将粉末加入超纯水中。根据待测受试者数量确定所需溶液的量。
	<ol>
		<li>使用以下公式，根据水中有效氯的百分比，计算在给定体积的水中配制所需溶液量所需的粉末量： 
		<img alt="氯化计算；水消毒过程中次氯酸钙粉末质量的计算公式。" src="/files/ftp_upload/55604/55604eq1.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="方程"> 
		注意：Ca(ClO)2 粉末通常含有60-80%的有效氯。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将二氯异氰尿酸钠（NaDCC）颗粒粉末加入超纯水中，配制0.05%的二氯异氰尿酸钠（NaDCC）溶液。
	<ol>
		<li>使用以下公式，根据水中有效氯的百分比，计算在给定体积的水中配制所需溶液量所需的粉末量： 
		<img alt="NaDCC 浓度计算公式；500 mg Cl/L，L 水，g NaDCC 粉末，换算公式。" src="/files/ftp_upload/55604/55604eq2.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="方程"> 
		注意：NaDCC 粉末通常含有约 50% 的有效氯。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将次氯酸钠储备液加入超纯水中，配制0.05%的稳定次氯酸钠溶液。
	<ol>
		<li>使用滴定法，按照制造商说明书确认次氯酸钠（NaOCl）储备液的浓度（通常为5-8%）例如， 碘量滴定法；建议使用的试剂盒详见材料列表。</li>
		<li>根据测试方法的结果，使用以下公式计算需加入水中的溶液量： 
		<img alt="配制次氯酸钠储备液的浓度计算公式。" src="/files/ftp_upload/55604/55604eq3.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="方程"></li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用电解氯发生器制备的次氯酸钠溶液、超纯水和分析纯氯化钠（NaCl），加入超纯水中，配制0.05%的稳定次氯酸钠（NaOCl）溶液。
	<ol>
		<li>使用电氯发生器，按照制造商说明，以超纯水和 NaCl 配制 1% 的氯溶液。</li>
		<li>采用滴定试验方法（例如， 碘量滴定法）以确认次氯酸钠（NaOCl）储备液的浓度32.</li>
		<li>根据测试结果，使用以下公式计算需加入水中的溶液量： 
		<img alt="配制次氯酸钠储备液的浓度计算公式" src="/files/ftp_upload/55604/55604eq3.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="方程"></li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用滴定法确认每种氯洗手液的浓度（例如， 碘量滴定法），并通过添加水或含氯源粉末/溶液调整溶液浓度，使其在目标浓度的10%误差范围内（0.045–0.055%）。</li>
</ol>
3. 准备生物体和土壤载荷并混合以制备接种物
注意：在以下小节中，E. coli 和 Phi6 被用作描述方法的代表性细菌和病毒生物样本。
<ol>
	<li>制备用于检测的生物体，其浓度应高于 10 x 108 细菌的CFU/mL大于10 × 107 病毒的 PFU/mL
	<ol>
		<li>准备 E. coli，划线接种一种非致病性菌株 E. coli 接种于Luria-Bertani（LB）琼脂平板，37℃培养 37 °C 24 小时以获得单菌落。储存于 4 °C. 
		注意：此步骤可在实验前数天完成。
		<ol>
			<li>实验开始前一天，用无菌接种环从平板上挑取单个菌落，接种于10 mL LB液体培养基中，37℃过夜培养 37 °C 振荡条件下。</li>
			<li>实验当天早晨，取1 mL过夜培养物接种于20 mL新鲜LB液体培养基中，启动新培养。于约2.5 h内孵育，使菌体密度达到10以上8 CFU/mL</li>
			<li>使用分光光度计估算培养物的浓度。 
			注意：使用先前通过标准曲线建立的转换因子 E. coli 所用菌株，确保浓度大于108 CFU/mL33如果细胞密度不够高，则将培养物放回培养箱继续培养，并再次检测直至达到所需状态。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>使用膜过滤法确认浓度34. 
		注意：用磷酸盐缓冲液（PBS）对培养物进行连续稀释，使过滤后的溶液在平板上产生的菌落数量可计数（具体数量取决于所使用的培养基）。
		<ol>
			<li>设置火焰，并连接带有无菌过滤漏斗和真空装置的过滤装置。用乙醇燃烧灭菌镊子。使用镊子放置一个0.45-µm 将滤膜置于过滤装置上，网格面向上。用少量无菌 PBS 润湿滤膜。</li>
			<li>将漏斗置于底座上，通过移液或直接倾倒的方式将待处理的样品溶液加至滤膜上。开启真空，直至全部样品通过膜。用无菌 PBS 冲洗漏斗内壁，再次开启真空。 
			注意：样本应至少 100 µL 以及至多100 mL。如果样品体积小于10 mL，在过滤前向过滤漏斗中加入约20 mL PBS，以确保样品均匀过滤。</li>
			<li>移除漏斗，灼烧灭菌镊子，从底部取出滤膜。将滤膜轻放在培养皿的LB琼脂表面，网格面朝上，确保滤膜完全贴附于琼脂表面。倒置平板，在37°C下孵育24小时 37 °C.</li>
			<li>24小时后，从培养箱中取出培养板并计数 E. coli 菌落。利用该数据以及已知的稀释倍数和溶液体积，计算过滤后溶液中CFU/mL的浓度。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>扩增Phi6 Pseudomonas syringae 采用双层琼脂覆盖法的宿主35.
		<ol>
			<li>添加 100 µL Phi6 储存悬液的 100 µL 的 P. syringae 将过夜培养物直接接种至6 mL营养肉汤酵母（NBY）软琼脂（0.3%）中，倒入含NBY硬琼脂（1.5%）的平板，于37°C过夜培养 26 °C准备足够数量的培养皿，以产生足够的接种物用于实验，每块培养皿预计可获得约 4 mL 病毒悬液。</li>
			<li>第二天，在软琼脂层上方加入 5 mL PBS。室温静置 4 小时后，用移液器收集，并使用 0.45-µm 滤器。储存于 4 °C. 
			注意：该溶液将用作病毒感染剂。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>使用噬斑实验确认浓度大于107 PFU/mL35. 在 PBS 中对病毒悬液进行连续稀释，以便 100 µL 在平板上产生可计数的噬菌斑。
		<ol>
			<li>移液器 100 µL 适量稀释样品的 100 µL 将过夜培养的宿主菌液直接加入含有6 mL NBY软琼脂的试管中。将软琼脂倒在NBY硬琼脂上，于 26 °C 24 h。</li>
			<li>第二天，从培养箱中取出培养皿，统计每皿中的噬斑数量。利用该数据，结合已知的稀释倍数和溶液体积，计算过滤后溶液中噬斑形成单位的浓度（PFU/mL）。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>制备三相土壤载荷，旨在模拟人血清。
	<ol>
		<li>将7.80 mg/mL牛血清白蛋白、10.92 mg/mL胰蛋白胨和2.52 mg/mL牛黏蛋白混合，制备所需体积的土壤负载物。混合土壤负载物后，经0.22 μm滤膜过滤µm 滤器除菌。于 4 °C 直至使用前。请勿进行加热灭菌，否则蛋白质会发生变性。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>制备0.9% NaCl溶液，用于无土壤负荷条件下接种物的混匀。</li>
	<li>测试前立即配制接种物，其中包含68%的细菌或病毒悬液和32%的土壤负载物。例如，取步骤3.1.1.2或3.1.3.2中的1.02 mL细菌或病毒悬液，与0.48 mL土壤负载物（步骤3.2.1）或0.9% NaCl溶液（步骤3.3）混合。轻轻涡旋或摇动以混匀。 
	注意：每种条件下每位志愿者将使用1.5 mL该接种物，因此需确保所制备的接种物总体积足以满足计划进行的检测次数。</li>
</ol>
4. 实验志愿者的准备工作
注意：确定当天要测试的生物体和土壤负载条件。同一批志愿者可用于测试多种条件，但每位志愿者在48小时内仅应接受一轮测试。
<ol>
	<li>开始测试前，通过口头确认志愿者是否遵守了7天的抗菌剂洗脱期，并通过目视检查确认其皮肤上未出现任何破损或异常情况，以确保其仍符合入选条件。</li>
	<li>使用随机数生成器，为每位志愿者随机分配在当天测试中使用右手或左手进行采样，并确定洗手条件的执行顺序。 
	注意：例如，ABHS 可被指定为第3项，将在第三步执行。</li>
	<li>在测试开始时仅进行一次“清洁洗涤”，以去除皮肤上的污垢和油脂，确保后续每次测试均在相同条件下进行。
	<ol>
		<li>进行清洁洗涤时，按照实验的每一步骤（见下文第5节），使用空白接种物（仅LB肉汤或PBS）进行操作，并在不洗手的情况下采集样本。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
5. 实验步骤
<ol>
	<li>为检测每位志愿者皮肤的pH值（以控制个体差异），将平头皮肤pH探针置于手掌面皮肤以及示指与中指之间的指蹼区域。确保电极与皮肤表面紧密贴合。记录pH读数。</li>
	<li>对手部进行加标处理。
	<ol>
		<li>让志愿者将双手合拢成杯状，用移液器小心地向手部滴加1.5 mL接种物 750 µL 缓慢地涂抹到每只手掌中。</li>
		<li>让志愿者轻轻搓揉双手，直至手部所有表面均涂满接种物，同时尽量减少对手部的摩擦。</li>
		<li>让志愿者将双手保持静止并远离身体，持续30秒，以使接种物干燥。接种物可能无法完全干燥。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>洗手。
	<ol>
		<li>在所有后续洗涤步骤中，使用大号样品收集袋收集手部冲洗液。向袋中加入4.5 mL 12%硫代硫酸钠溶液，以中和接触时的氯，并在2小时内完成处理。 
		注意：所有样品（即使不含氯）均应添加硫代硫酸钠，以控制其对生物体可能产生的影响。</li>
		<li>接种后（第5.2节），按指定顺序使用下述方法洗手。
		<ol>
			<li>对照A组不进行洗手步骤，直接进入步骤5.5。</li>
			<li>对照B组，仅使用室温（约 21 °C) 通过已知流速的漏斗。 
			注意：此处使用了1.5 L/min的流速和500 mL的水。</li>
			<li>用肥皂洗手时，先用10 mL超纯水润湿双手。让志愿者用肥皂搓出泡沫，然后双手相互揉搓20秒。随后通过漏斗以1.5 L/min的流速，倾倒500 mL室温超纯水冲洗双手。</li>
			<li>对于所有含氯溶液（例如， ABHS、HTH、NaDCC 和 NaOCl），以 1.5 L/m 的流速通过漏斗倒入 200 mL 含氯溶液，并让志愿者彻底揉搓双手。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>采用改良的手套汁液法进行手部冲洗。
	<ol>
		<li>洗手后，立即将每位志愿者的手（即， 步骤4.2中选定用于检测的手（右手或左手）放入含有75 mL洗脱液的采样袋中（例如， PBS）至手腕处。将袋口在手腕处紧紧扎好。 
		注意：用于采样的洗脱液应含有足量的硫代硫酸钠，以中和手部清洗时可能使用的氯。磷酸盐缓冲液（PBS）是一种常用的洗脱液，适用于多种微生物。</li>
		<li>让志愿者在溶液中轻轻揉搓双手30秒，注意清洁指缝及指甲下方。从袋外轻轻按摩手部30秒，确保整只手直至手腕均被洗脱液充分冲洗。</li>
		<li>密封袋子，并在2小时内根据第6节所述的相应检测方法进行处理。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>去污
	<ol>
		<li>在使用每种洗手方法重复该过程之前，让志愿者在水槽中用肥皂和温水彻底清洗双手。用70%乙醇喷洒志愿者的双手，直至手部两面均被覆盖，然后让其自然晾干。</li>
		<li>对每种洗手条件，重复第5节中的所有步骤，仅使用在步骤4.2中随机选定的手图1).</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
6. 定量分析
<ol>
	<li>进行适合所选生物体的实验分析例如， 膜过滤法检测细菌或噬斑测定法检测病毒，分别如上文第3.1.2节和第3.1.4节所述。</li>
	<li>计数平板后，记录每次检测的估计CFU/mL或PFU/mL值，用于后续分析（3.1.2和3.1.4节）。</li>
</ol>
7. 分析
<ol>
	<li>根据步骤6.2的结果，针对每种微生物、每种污染负荷状态、每位受试者及每种洗手方法，计算手部微生物的对数降低值。
	<ol>
		<li>评估洗手效果时，将每次洗手样本中的细菌/病毒浓度与对照组A（不洗手）进行比较；评估冲洗水中的残留情况时，将每次冲洗水样本与对照组B（仅用水冲洗）进行比较。使用以下标准公式： 
		对数减少值（洗手）) = <img alt="以10为底的对数，数学符号，用于方程和数据分析。" src="/files/ftp_upload/55604/55604eq4.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="方程"> <img alt="洗手效果比计算公式，每毫升菌落形成单位（CFU）或噬菌斑形成单位（PFU）比较，微生物学分析" src="/files/ftp_upload/55604/55604eq5.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="方程"> 
		对数减少（冲洗水）) = <img alt="以10为底的对数，数学符号，用于方程和数据分析。" src="/files/ftp_upload/55604/55604eq4.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="方程"><img alt="洗手效果计算公式；比较不同洗手方法下每毫升菌落形成单位（CFU）或空斑形成单位（PFU）的比值；方程。" src="/files/ftp_upload/55604/55604eq6.jpg" data-altupdatedat="1788250015000" data-alt="方程"> 
		注意：对数减少量也可表示为对数10（不洗手）- log10（含洗手）</li>
	</ol>
	</li>
	<li>采用单因素重复测量方差分析（ANOVA）评估不同洗手方法间计算所得对数降低值的显著性差异，并对具有显著性的模型进行事后Tukey's HSD检验，以两两比较各组间的显著性差异（p < 0.05）。 &lt;0.05)36.
	<ol>
		<li>在进行方差分析（ANOVA）之前，需对每个数据集进行球形假设检验（sphericity）例如， 使用Bartlett检验）。应用校正（例如， 当检验结果显示球形假设被违反时，采用格林豪斯-盖塞校正）37.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Kampf, G., Kramer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiologic+Background+of+Hand+Hygiene+and+Evaluation+of+the+Most+Important+Agents+for+Scrubs+and+Rubs%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Epidemiologic Background of Hand Hygiene and Evaluation of the Most Important Agents for Scrubs and Rubs.</a> Clin Microbiol Rev. 17 (4), 863-893 (2004).</li>
<li>Miller, T., Patrick, D., Ormrod, D. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/270809464_Hand_decontamination_Influence_of_common_variables_on_hand-washing_efficiency">Hand decontamination: influence of common variables on hand-washing efficiency.</a> Healthc Infect. 16 (1), 18(2013).</li>
<li>Jensen, D. A., Danyluk, M. D., Harris, L. J., Schaffner, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantifying+the+effect+of+hand+wash+duration%2C+soap+use%2C+ground+beef+debris%2C+and+drying+methods+on+the+removal+of+Enterobacter+aerogenes+on+hands%5BTitle%5D)+AND+%22J+Food+Prot%22%5BJournal%5D)">Quantifying the effect of hand wash duration, soap use, ground beef debris, and drying methods on the removal of Enterobacter aerogenes on hands.</a> J Food Prot. 78 (4), 685-690 (2015).</li>
<li>Girou, E., Loyeau, S., Legrand, P., Oppein, F., Brun-Buisson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+handrubbing+with+alcohol+based+solution+versus+standard+handwashing+with+antiseptic+soap%3A+randomised+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ%22%5BJournal%5D)">Efficacy of handrubbing with alcohol based solution versus standard handwashing with antiseptic soap: randomised clinical trial.</a> BMJ. 325 (7360), 362(2002).</li>
<li>Kac, G., Podglajen, I., Gueneret, M., Vaupré, S., Bissery, A., Meyer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbiological+evaluation+of+two+hand+hygiene+procedures+achieved+by+healthcare+workers+during+routine+patient+care%3A+a+randomized+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hosp+Infect%22%5BJournal%5D)">Microbiological evaluation of two hand hygiene procedures achieved by healthcare workers during routine patient care: a randomized study.</a> J Hosp Infect. 60 (1), 32-39 (2005).</li>
<li>Lages, S. L. S., Ramakrishnan, M. A., Goyal, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vivo+efficacy+of+hand+sanitisers+against+feline+calicivirus%3A+a+surrogate+for+norovirus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hosp+Infect%22%5BJournal%5D)">In-vivo efficacy of hand sanitisers against feline calicivirus: a surrogate for norovirus.</a> J Hosp Infect. 68 (2), 159-163 (2008).</li>
<li>Holton, R. H., Huber, M. A., Terezhalmy, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+efficacy+of+soap+and+water+hand+washing+versus+an+alcohol-based+hand+cleanser%5BTitle%5D)+AND+%22Tex+Dent+J%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial efficacy of soap and water hand washing versus an alcohol-based hand cleanser.</a> Tex Dent J. 126 (12), Retrieved from:
 <a target="_blank" href="http://www.tda.org/Publications/Texas-Dental-Journal">http://www.tda.org/Publications/Texas-Dental-Journal</a> 1175-1180 (2009).</li>
<li>Salmon, S., Truong, A. T., Nguyen, V. H., Pittet, D., McLaws, M. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Health+care+workers%27+hand+contamination+levels+and+antibacterial+efficacy+of+different+hand+hygiene+methods+used+in+a+Vietnamese+hospital%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Infect+Control%22%5BJournal%5D)">Health care workers' hand contamination levels and antibacterial efficacy of different hand hygiene methods used in a Vietnamese hospital.</a> Am J Infect Control. 42 (2), 178-181 (2014).</li>
<li>Steinmann, J., Nehrkorn, R., Meyer, A., Becker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+in-vivo+protocols+for+testing+virucidal+efficacy+of+handwashing+and+hand+disinfection%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Hyg+Environ+Health%22%5BJournal%5D)">Two in-vivo protocols for testing virucidal efficacy of handwashing and hand disinfection.</a> Int J Hyg Environ Health. 196 (5), Retrieved from:
 <a target="_blank" href="https://www.journals.elsevier.com/international-journal-of-hygiene-and-environmental-health">https://www.journals.elsevier.com/international-journal-of-hygiene-and-environmental-health</a> 425-436 (1995).</li>
<li>Weber, D. J., Sickbert-Bennett, E., Gergen, M. F., Rutala, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+selected+hand+hygiene+agents+used+to+remove+Bacillus+atrophaeus+%28a+surrogate+of+Bacillus+anthracis%29+from+contaminated+hands%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">Efficacy of selected hand hygiene agents used to remove Bacillus atrophaeus (a surrogate of Bacillus anthracis) from contaminated hands.</a> JAMA. 289 (10), 1274-1277 (2003).</li>
<li>Grayson, M. L., Melvani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Soap+and+Water+and+Alcohol-Based+Hand-Rub+Preparations+against+Live+H1N1+Influenza+Virus+on+the+Hands+of+Human+Volunteers%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Soap and Water and Alcohol-Based Hand-Rub Preparations against Live H1N1 Influenza Virus on the Hands of Human Volunteers.</a> Clin Infect Dis. 48 (3), 285-291 (2009).</li>
<li>Oughton, M. T., Loo, V. G., Dendukuri, N., Fenn, S., Libman, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hand+hygiene+with+soap+and+water+is+superior+to+alcohol+rub+and+antiseptic+wipes+for+removal+of+Clostridium+difficile%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Control+Hosp+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Hand hygiene with soap and water is superior to alcohol rub and antiseptic wipes for removal of Clostridium difficile.</a> Infect Control Hosp Epidemiol. 30 (10), 939-944 (2009).</li>
<li>Liu, P., Yuen, Y., Hsiao, H. -M., Jaykus, L. -A., Moe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+of+liquid+soap+and+hand+sanitizer+against+Norwalk+virus+on+contaminated+hands%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Micro%22%5BJournal%5D)">Effectiveness of liquid soap and hand sanitizer against Norwalk virus on contaminated hands.</a> Appl Environ Micro. 76 (2), 394-399 (2010).</li>
<li>Savolainen-Kopra, C., Korpela, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+treatment+with+ethanol+hand+rub+is+ineffective+against+human+rhinovirus--hand+washing+with+soap+and+water+removes+the+virus+efficiently%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Virol%22%5BJournal%5D)">Single treatment with ethanol hand rub is ineffective against human rhinovirus--hand washing with soap and water removes the virus efficiently.</a> J Med Virol. 84 (3), 543-547 (2012).</li>
<li>Tuladhar, E., Hazeleger, W. C., Koopmans, M., Zwietering, M. H., Duizer, E., Beumer, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+viral+contamination+from+finger+pads%3A+handwashing+is+more+effective+than+alcohol-based+hand+disinfectants%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hosp+Infect%22%5BJournal%5D)">Reducing viral contamination from finger pads: handwashing is more effective than alcohol-based hand disinfectants.</a> J Hosp Infect. 90 (3), 226-234 (2015).</li>
<li>Steinmann, J., Paulmann, D., Becker, B., Bischoff, B., Steinmann, E., Steinmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+virucidal+activity+of+alcohol-based+hand+sanitizers+versus+antimicrobial+hand+soaps+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hosp+Infect%22%5BJournal%5D)">Comparison of virucidal activity of alcohol-based hand sanitizers versus antimicrobial hand soaps in vitro and in vivo.</a> J Hosp Infect. 82 (4), 277-280 (2012).</li>
<li>de Aceituno, A. F., Bartz, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ability+of+Hand+Hygiene+Interventions+Using+Alcohol-Based+Hand+Sanitizers+and+Soap+To+Reduce+Microbial+Load+on+Farmworker+Hands+Soiled+during+Harvest%5BTitle%5D)+AND+%22J+Food+Protect%22%5BJournal%5D)">Ability of Hand Hygiene Interventions Using Alcohol-Based Hand Sanitizers and Soap To Reduce Microbial Load on Farmworker Hands Soiled during Harvest.</a> J Food Protect. 78 (11), 2024-2032 (2015).</li>
<li>Sterk, E. Médecins Sans Frontières - Filovirus Haemorrhagic Fever Guideline. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://jid.oxfordjournals.org/content/204/suppl_3/S791.full">http://jid.oxfordjournals.org/content/204/suppl_3/S791.full</a> (2008).</li>
<li>World Health Organization. WHO Report. Ebola Virus Disease ( EVD ) Key questions and answers concerning water, sanitation and hygiene. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/water_sanitation_health/WASH_and_Ebola.pdf">http://www.who.int/water_sanitation_health/WASH_and_Ebola.pdf</a> 1-5 (2014).</li>
<li>World Health Organization. Guidelines on Hand Hygiene in Health Care. First Global Patient Safety Challenge, Clean Care is Safer Care. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://whqlibdoc.who.int/publications/2009/9789241597906_eng.pdf">http://whqlibdoc.who.int/publications/2009/9789241597906_eng.pdf</a> (2009).</li>
<li>Boyce, J. M., Pittet, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guideline+for+Hand+Hygiene+in+Health-Care+Settings+Recommendations+of+the+Healthcare+Infection+Control+Practices+Advisory+Committee+and+the+HICPAC%2FSHEA%2FAPIC%2FIDSA+Hand+Hygiene+Task+Force%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Control+Hosp+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Guideline for Hand Hygiene in Health-Care Settings Recommendations of the Healthcare Infection Control Practices Advisory Committee and the HICPAC/SHEA/APIC/IDSA Hand Hygiene Task Force.</a> Infect Control Hosp Epidemiol. 23 (12 Suppl), Society for Healthcare Epidemiology of America. S3-S40 (2002).</li>
<li>Emmanuel, J., Ndoye, B. UNDP Medical Waste Experts Assessment and Recommendations Regarding Management of Ebola-Contaminated Waste. , United Nations Development Programme. Available from:
 <a target="_blank" href="https://noharm-global.org/sites/default/files/documents-files/3127/Report%20to%20WHO%20WASH%20and%20Geneva%20on%20Ebola%20final.pdf">https://noharm-global.org/sites/default/files/documents-files/3127/Report%20to%20WHO%20WASH%20and%20Geneva%20on%20Ebola%20final.pdf</a> (2015).</li>
<li>Hopman, J., Kubilay, Z., Allen, T., Edrees, H., Pittet, D., Allegranzi, B. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4474896/">Efficacy of chlorine solutions used for hand hygiene and gloves disinfection in Ebola settings: a systematic review.</a> Antimicrob Resist Infect Control. 4 (1), 1(2015).</li>
<li>Lowbury, E. J. L., Lilly, H. A., Bull, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disinfection+of+hands%3A+removal+of+transient+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ%22%5BJournal%5D)">Disinfection of hands: removal of transient organisms.</a> BMJ. 2 (5403), 230-233 (1964).</li>
<li>Edmonds, S. L., Zapka, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effectiveness+of+Hand+Hygiene+for+Removal+of+Clostridium+difficile+Spores+from+Hands%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Control+Hosp+Epidemiol%22%5BJournal%5D)">Effectiveness of Hand Hygiene for Removal of Clostridium difficile Spores from Hands.</a> Infect Control Hosp Epidemiol. 34 (3), 302-305 (2013).</li>
<li>Rotter, M. L. 150 years of hand disinfection-Semmelweis' heritage. Hyg Med. (22), 332-339 (1997).</li>
<li>Hitomi, S., Baba, S., Yano, H., Morisawa, Y., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+effects+of+electrolytic+products+of+sodium+chloride--comparative+evaluation+with+sodium+hypochlorite+solution+and+efficacy+in+handwashing%5BTitle%5D)+AND+%22Kansensh%C5%8Dgaku+Zasshi%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial effects of electrolytic products of sodium chloride--comparative evaluation with sodium hypochlorite solution and efficacy in handwashing.</a> Kansenshōgaku Zasshi. 72 (11), 1176-1181 (1998).</li>
<li>ASTM International. Standard E1174-13. Standard Test Method for Evaluation of the Effectiveness of Health Care Personnel Handwash Formulations. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.astm.org/">https://www.astm.org/</a> (2013).</li>
<li>Casanova, L. M., Weaver, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+eluents+for+the+recovery+of+an+enveloped+virus+from+hands+by+whole-hand+sampling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of eluents for the recovery of an enveloped virus from hands by whole-hand sampling.</a> J Appl Microbiol. 118 (5), 1210-1216 (2015).</li>
<li>Sinclair, R. G., Rose, J. B., Hashsham, S. A., Gerba, C. P., Haas, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Criteria+for+Selection+of+Surrogates+Used+To+Study+the+Fate+and+Control+of+Pathogens+in+the+Environment%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Criteria for Selection of Surrogates Used To Study the Fate and Control of Pathogens in the Environment.</a> Appl Environ Microbiol. 78 (6), 1969-1977 (2012).</li>
<li>Held, E., Skoet, R., Johansen, J. D., Agner, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hand+eczema+severity+index+%28HECSI%29%3A+A+scoring+system+for+clinical+assessment+of+hand+eczema.+A+study+of+inter-+and+intraobserver+reliability%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">The hand eczema severity index (HECSI): A scoring system for clinical assessment of hand eczema. A study of inter- and intraobserver reliability.</a> Br J Dermatol. 152 (2), 302-307 (2005).</li>
<li>Chlorine Total, Iodometric Method Using Sodium Thiosulfate, Method 8209 Digital Titrator. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.hach.com/asset-get.download-en.jsa?id=7639983937">http://www.hach.com/asset-get.download-en.jsa?id=7639983937</a> (2016).</li>
<li>GeneQuant 100 User Manual. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://biochromspectros.com/media/wysiwyg/support_page/support-genequant-100/Genequant-100-UM.pdf">http://biochromspectros.com/media/wysiwyg/support_page/support-genequant-100/Genequant-100-UM.pdf</a> (2016).</li>
<li>United States Environmental Protection Agency. Method 1604: Total Coliforms and Escherichia coli in Water by Membrane Filtration Using a Simultaneous Detection Technique (MI Medium). , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.epa.gov/sites/production/files/2015-08/documents/method_1604_2002.pdf">https://www.epa.gov/sites/production/files/2015-08/documents/method_1604_2002.pdf</a> (2002).</li>
<li>Adams, M. H., Anderson, E. S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAdams%2C+MH+%22Bacteriophages%22">Bacteriophages</a>. , Interscience Publishers. New York. (1959).</li>
<li>Kao, L. S., Green, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Variance%3A+Is+There+a+Difference+in+Means+and+What+Does+It+Mean%3F%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+surgical+research%22%5BJournal%5D)">Analysis of Variance: Is There a Difference in Means and What Does It Mean?</a> The Journal of surgical research. 144 (1), 158-170 (2008).</li>
<li>Schutz, R. W., Gessaroli, M. E. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/228118295_The_Analysis_of_Repeated_Measures_Designs_Involving_Multiple_Dependent_Variables">The Analysis of Repeated Measures Designs Involving Multiple Dependent Variables.</a> Research Quarterly for Exercise and Sport. 58 (2), 132-149 (1987).</li>
<li>Woolwine, J. D., Gerberding, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+testing+method+on+apparent+activities+of+antiviral+disinfectants+and+antiseptics%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Effect of testing method on apparent activities of antiviral disinfectants and antiseptics.</a> Antimicrob Agents Chemother. 39 (4), 921-923 (1995).</li>
</ol>

作者声明不存在任何竞争性经济利益。

本文所述方法提供了一种在受控实验室条件下评估洗手效果的途径。该方法强调使用人类志愿者以及替代性的非致病性生物体。通过该方法，能够展示以下两方面的差异：1）不同洗手方法的效果；2）冲洗手部的水中生物体的存留情况。本方案的目的是提供一个通用框架，可根据需要进行调整，以适用于测试多种与传染病相关的替代生物体及洗手方法。
在使用该方法时，需注意两项关键的数据质量建议。首先，接种物的使用必须尽可能在各轮测试之间保持一致，并以尽量减少损失的方式进行操作，以确保手部接种足够量的接种物，从而获得具有统计学意义的结果。其次，务必完成“清洁洗涤”步骤，即在测试前不进行洗手的实验流程，因为先前的研究表明，首次洗手与后续洗手之间可能存在显著差异，但在完成清洁步骤后的后续洗手之间则无显著差异29。此外，该步骤可清除手部残留的污染，避免对实验结果造成干扰。
本方案的主要局限性在于可能给志愿者带来不适。在每轮持续约2小时的测试过程中，志愿者的手部会变冷。一些志愿者报告称，由于手部长时间处于潮湿状态，出现了轻微...

洗手被广泛推荐用于预防疾病传播，尤其是通过粪口途径或空气传播的疾病，包括腹泻和呼吸道疾病1。令人意外的是，关于不同洗手方法（如使用肥皂和水洗手（HWWS）以及使用含酒精手部消毒剂（ABHS））在清除手部微生物方面的有效性的可比证据十分有限。初步研究发现，洗手过程中机械摩擦的作用可能比具体的洗手方法更能解释微生物的清除效果2,3。此外，目前尚缺乏对手部清洗方法之间相对有效性的系统比较证据。在一次非正式的文献回顾中，共识别出14项比较肥皂与手部消毒剂在清除微生物方面有效性的研究。其中五项研究发现ABHS更有效4,5,6,7,8，七项研究发现HWWS更有效9,10,11,12,13,14,15，另有两项研究未发现两种方法之间存在显著差异16,17。这些结果不一致，且未涉及洗手后冲洗水中微生物持续存在所带来的持续感染风险。总体而言，关于不同洗手方法在清除致病性病原体方面的相对有效性的证据仍然有限。
这些有限的证据导致人们对于在疫情暴发环境下哪种方法最合适存在不确定性。例如，在2013年至2016年西非埃博拉病毒病（EVD）疫情暴发期间，多个大型国际应急响应机构就手部卫生措施提出了相互矛盾的建议，涉及使用肥皂和水洗手（HWWS）、含酒精的手消毒剂（ABHS）或0.05%含氯溶液。无国界医生组织（Médecins Sans Frontières, MSF）建议使用0.05%含氯溶液进行手部清洗，而世界卫生组织（WHO）则建议使用肥皂和水洗手，或在手部无明显污物时使用含酒精的手消毒剂（ABHS）。WHO甚至指出，除非没有其他可用选项，否则不应使用含氯溶液，因为皮肤对氯存在消耗作用，导致其效果低于其他方法18,19,20,21,22。此外，含氯溶液通常由四种不同的氯化合物配制而成，包括高浓度次氯酸钙（HTH）、本地制备并稳定的次氯酸钠（NaOCl）以及二氯异氰尿酸钠（NaDCC）。世界卫生组织为应对西非埃博拉疫情而委托开展的一项系统综述最近仅发现四项研究评估了含氯溶液洗手的相对有效性23。这些研究结果也相互矛盾，且均未使用推荐的0.05%含氯浓度进行洗手，也未检测与埃博拉病毒相似的微生物10,24,25,26,27。因此，这些推荐意见缺乏证据支持，目前尚不清楚哪些建议最具有效性。
需要进一步的研究来比较不同的洗手方法，以防止传染性病原体的传播，因为洗手干预是预防疫病传播的重要工具。这些洗手建议必须以科学证据为基础。因此，已开发出一种使用替代物或非致病性病原体来测试洗手效果及冲洗水中残留情况的方法2,28,29。本文展示了使用Phi6作为埃博拉病毒的替代物，以及使用Escherichia coli作为常见指示菌的示例结果。本方案中介绍了洗手效果和冲洗水残留的测试方法。

<table><tbody><tr><td>香皂</td><td>Dove</td><td>White Beauty Bar 香皂</td><td></td></tr><tr><td>含酒精手部消毒剂</td><td>Purell</td><td>含 70% 乙醇的 Advanced Instant Hand Sanitizer</td><td></td></tr><tr><td>HTH 粉末</td><td>Acros Organics</td><td>300340010</td><td></td></tr><tr><td>NaDCC 粉末</td><td>Medentech</td><td>Klorsept 颗粒</td><td></td></tr><tr><td>NaOCl 溶液</td><td>Acros Organics</td><td>419550010</td><td></td></tr><tr><td>电解氯发生器</td><td>AquaChlor</td><td></td><td></td></tr><tr><td>碘量滴定仪</td><td>Hach</td><td>1690001</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白</td><td>MP Biomedicals</td><td>NC0117242</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白胨</td><td>Fisher</td><td>BP1421-100</td><td></td></tr><tr><td>牛黏蛋白</td><td>EMD Milipore</td><td>49-964-3500MG</td><td></td></tr><tr><td>0.22 &amp;micro;m 滤膜</td><td>EMD Milipore</td><td>GVWP04700</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher</td><td>BP358-1</td><td></td></tr><tr><td>皮肤 pH 探针</td><td>Hanna Instruments</td><td>H199181</td><td></td></tr><tr><td>大号 Whirlpak 样品袋</td><td>Nasco</td><td>B01447WA</td><td></td></tr><tr><td>小号 Whirlpak 样品袋</td><td>Nasco</td><td>B01323WA</td><td></td></tr><tr><td>漏斗瓶</td><td>Thermo Scientific</td><td>3120850001</td><td>可在瓶盖上钻一个合适尺寸的孔，制成一个能以适当流速分配水的漏斗</td></tr><tr><td>乙醇</td><td>ThermoScientific</td><td>615090010</td><td>与水混合配制 70% 乙醇</td></tr><tr><td>喷雾瓶</td><td>Qorpak</td><td>PLC06934</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;E. coli&lt;/em&gt;</td><td>ATCC</td><td>25922</td><td></td></tr><tr><td>LB 肉汤</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP1426-2</td><td></td></tr><tr><td>LB 琼脂</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP1425-500</td><td></td></tr><tr><td>无菌接种环</td><td>Globe Scientific</td><td>22-170-204</td><td></td></tr><tr><td>Phi6</td><td>HER</td><td>102</td><td></td></tr><tr><td>营养肉汤</td><td>BD Difco</td><td>BD 247110</td><td></td></tr><tr><td>GeneQuant 100 分光光度计</td><td>General Electric</td><td>28-9182-04</td><td></td></tr><tr><td>硫代硫酸钠</td><td>Fisher Chemical</td><td>S445-3</td><td></td></tr><tr><td>膜滤器（47 mm，0.45 &amp;micro;m）</td><td>EMD Millipore</td><td>HAWP04700</td><td></td></tr><tr><td>m-ColiBlue24 肉汤培养基</td><td>EMD Millipore</td><td>M00PMCB24</td><td></td></tr><tr><td>带垫片的培养皿（47 mm）</td><td>Fisherbrand</td><td>09-720-500</td><td></td></tr><tr><td>真空过滤装置</td><td>Thermo Scientific/Nalgene</td><td>09-752-5</td><td></td></tr><tr><td>过滤漏斗</td><td>Thermo Scientific/Nalgene</td><td>09-747</td><td></td></tr><tr><td>丁香假单胞菌</td><td>HER</td><td>1102</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液</td><td>Thermo Scientific</td><td>10010031</td><td>也可根据基本配方从原料化合物配制该溶液</td></tr></tbody></table>

一种检测洗手去除新发传染病病原体效果的方法

A Method to Test the Efficacy of Handwashing for the Removal of Emerging Infectious Pathogens

洗手被广泛推荐用于预防传染病的传播。然而，目前关于各种洗手方法有效性的可比证据仍十分有限。此外，尚缺乏比较不同洗手方法以确定哪种方法在去除病原微生物方面最为有效的相关证据。在传染病暴发期间，亟需研究来为可采用的不同洗手策略提供科学依据。本文描述了一种实验室方法，用于评估洗手方法在去除手部微生物以及微生物在冲洗液中存留情况方面的效果。首先在志愿者手上接种测试微生物，然后使用感兴趣的每种洗手方法进行洗手。通常使用替代性微生物，以保护受试者免受疾病风险。洗手后残留在手上的微生物数量通过改良的“手套汁液”法进行检测：将手放入含有洗脱液的手套中并揉搓，使微生物悬浮，随后通过膜过滤法（用于细菌）或噬斑分析法（用于病毒或噬菌体）进行分析。洗手过程中产生的冲洗液被直接收集用于检测。洗手效果通过比较洗手后样本与未洗手样本的对数减少值（log reduction value）来量化。冲洗液中微生物的存留情况则通过比较不同洗手方法所得冲洗液样本与仅用水洗手后收集样本的结果进行量化。尽管该方法因需使用替代性微生物以保障人类志愿者的安全而存在局限性，但它捕捉到了一些在体外（in vitro）研究中难以模拟的洗手过程特征，填补了关于洗手效果以及病原微生物在冲洗液中存留特性方面的研究空白。

此处，该方案（图1) 完成了18名志愿者的测试，每位志愿者均使用两种方法进行检测 E. coli 以及Phi6。在洗手效果方面，不同方法之间存在显著差异。 E. coli 有土载和无土载两种情况，以及带有土载的Phi6（图2 和 图3）。对于 E. coli 无土壤负载时，使用HTH、NaDCC和稳定型NaOCl洗手均比仅用水洗手产生显著更高的对数减少值（F(6,102) = 2.72，p = 0.034）。在有土壤负载条件下，HTH产生的对数减少值显著高于其他组 E. coli 优于仅用水、HWWS 和 ABHS（F(6,102) = 3.94，p &lt;0.001）。对于未添加土壤负荷的Phi6，各方法间无显著差异（F(6,66) = 2.04，p = 0.073）。然而，对于添加土壤负荷的Phi6（F(6,102) ...

洗手被广泛推荐用于预防传染病的传播。然而，目前关于哪种洗手方法在去除病原微生物方面最为有效，尚缺乏充分证据。我们建立了一种评估洗手方法去除微生物效果的技术。

洗手被广泛推荐用于预防传染病的传播。然而，关于洗手效果的可比证据仍然较少……

本实验的总体目标是测试不同洗手方式对人工接种了特定目标微生物的手部的清除效果。该方法可为预防传染病的关键问题提供重要信息，帮助研究人员评估针对特定目标微生物的洗手效果。该技术的主要优势在于其灵活性，可经调整后用于研究多种不同的生物体。我们最初提出该方法的设想，是由于意识到在埃博拉疫情环境中正使用含氯溶液进行手部清洗，而当时尚无证据支持其有效性。在招募符合条件的受试者并根据文本方案配制洗手液后，通过将一株非致病性大肠杆菌（E. coli）划线接种于LB琼脂平板上培养细菌，并在37°C条件下培养24小时，以获得单菌落。实验开始前一天，使用无菌润滑剂从平板上挑取单个菌落，接种于10毫升LB液体培养基中。将培养物置于37°C、振荡条件下过夜培养。实验当天早晨，取1毫升过夜培养物加入20毫升新鲜LB液体培养基中。将培养物孵育约两个半小时，以达到每毫升超过10的8次方CFU的盐密度。然后使用分光光度计估算培养物的浓度。在测试前立即配制接种物，其中包含68%的细菌或病毒悬液以及32%的氯化钠或土壤负荷。轻轻涡旋或摇动以混匀。根据文本方案准备志愿者后，将扁平探头皮肤pH值检测仪置于志愿者食指与中指间的蹼状区域，检测每位志愿者的皮肤pH值。确保电极与皮肤表面紧密贴合，记录pH读数。接下来，让志愿者将双手合拢成杯状。然后，小心地用移液器将750微升的接种物分别加入每只手掌，以污染双手。在污染志愿者双手时，必须确保接种物无任何洒出。提醒志愿者此步骤非常重要，并在开始操作前让他们先用水进行练习。指导志愿者轻轻揉搓双手，直至手部所有表面均涂满接种物，同时尽量减少手部摩擦。要求志愿者将双手静止置于身体两侧，保持30秒，以使接种物充分干燥。然后使用文中所述方法之一洗手。用肥皂洗手时，取10毫升超纯水润湿双手。让志愿者用肥皂搓出泡沫，然后双手相互揉搓20秒。用室温超纯水500毫升，以每分钟1.5升的流速通过漏斗冲洗志愿者的手部，并将冲洗液收集至大样本收集袋中，样本需在两小时内处理。对于所有含氯溶液，通过漏斗以每分钟1.5升的流速将200毫升氯溶液倾倒于志愿者手部，并要求志愿者充分揉搓双手。另一种洗手方法是让志愿者使用手部消毒剂进行洗手。应轻柔揉搓手部的所有表面，指导参与者在揉搓时重点关注每个部位，包括手掌、指甲和指缝，并确保整个手部都已彻底冲洗。对照组A在接种后不进行洗手操作。对照组B仅使用室温超纯水，通过已知流速的漏斗进行洗手操作。洗手后立即将每位受试者用于检测的手放入含有75毫升Leeuwin液体的采样袋中，液面至手腕处。将采样袋口在手腕周围紧紧握住，让受试者在溶液中轻轻揉搓手部30秒，注意指缝间及指甲下方均需充分接触溶液。从袋外轻轻按摩手部30秒，确保整只手直至手腕完全浸没于Leeuwin溶液中。密封袋子后，按照相应的实验方法进行处理。每次重复不同洗手方式的实验前，均需让志愿者使用温水和肥皂在水槽中彻底清洗双手。最后，使用 70% 乙醇喷洒受试者双手，直至双面均匀覆盖，然后静置晾干。为分析样品，设置火焰及带有无菌过滤漏斗和真空连接的过滤装置。通过将镊子浸入乙醇后灼烧来灭菌。使用镊子将一个0.45微米滤膜放置在过滤装置上，滤膜网格面朝上。然后用少量无菌PBS润湿滤膜。将漏斗置于底座上，直接将样品用移液器加入或倒入滤膜上。启动真空泵，直至全部样品通过膜。然后，用无菌 PBS 冲洗漏斗壁，并再次启动真空泵。接着，取下漏斗，灼烧灭菌镊子，从底座上提起滤膜。然后将滤膜轻轻放置在培养皿中的培养基上，确保网格面朝上，且滤膜与培养基表面完全贴合。将培养皿倒置，在37°C条件下培养24小时。培养结束后，计数大肠杆菌（E. coli）菌落并记录数据。根据文字方案进行数据分析。本视频中描述的方案共对18名志愿者进行了测试，检测菌株包括大肠杆菌（E. coli）和Phi6。对于无土壤负载的大肠杆菌，使用HTH、NaDCC和稳定化NaOCl进行手部清洗，其对数降低值均显著高于仅用水清洗；在有土壤负载的情况下，HTH处理对大肠杆菌的对数降低值显著高于仅用水和肥皂清洗以及使用含酒精的手消毒剂（ABHS）。在无土壤负荷的情况下，不同方法对Phi6的灭活效果无显著差异。然而，在有土壤负荷的情况下，仅用水处理对Phi6的对数降低值大于ABHS或稳定态NaOCl；用肥皂洗手的对数降低值大于ABHS、稳定态NaOCl和现场生成的NaOCl；HTH的对数降低值大于ABHS和稳定态NaOCl；NaDCC的对数降低值大于稳定态NaOCl和ABHS。如这些图表所示，与使用肥皂洗手相比，含氯处理对漂洗水中残留的大肠杆菌实现了显著更高的对数减少量。最后，在无土壤负载条件下，Phi6 也呈现出相同模式，所有含氯溶液对漂洗水中 Phi6 的减少量均显著高于使用肥皂洗手。而在有土壤负载的漂洗水中，Phi6 未观察到显著减少。在进行此操作时，需要注意每种条件下的有效性结果是通过比较两个对照组的结果计算得出的。这意味着对每种洗手方式都必须一致地执行各个步骤，这一点非常重要。

a-method-to-test-efficacy-handwashing-for-removal-emerging-infectious

Research

科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

一种测试洗手方法去除新发感染性病原体的方法

来源： Holt-Torres, P. S. 等 纳米颗粒与纳米结构表面抗菌活性的评估 体外. 视频实验杂志...

采用聚焦接触暴露法评估纳米结构表面的抗菌活性

本视频展示了一种利用 peg-plate...

一种用于筛选抗菌剂的钉板生物膜检测法

抗菌药物协同作用测试用于评估两种或多种抗生素联合使用的效果，通常采用以下两种方法之一进行：棋盘格稀释法或时间-杀菌试验。本文介绍了一种基于自动喷墨打印机辅助的棋盘格稀释法协同作用技术，以及一种经典的时间-杀菌协同作用研究方法。...

通过喷墨打印机辅助的自动化棋盘阵列法与手工时间-杀菌法进行抗菌协同作用测试

一项公民科学项目旨在招募圣迭戈居民，以采集环境样本用于检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）。项目开发了一个多语言的基于网络的平台，通过用户友好的移动设备界面提交数据。实验室信息管理系统支持采集数千份地理分布多样的样本，并实现对结果的实时追踪。...

对城市环境进行拭子采样——从环境储存库中采样与检测 SARS-CoV-2 的流程

针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）大流行，制定了一项实验室方案，用于检测热水洗涤对织物口罩、棉质刷手服和牛仔裤的病毒灭活效果。实验中采用Phi6病毒（噬菌体）作为检测消毒效果的测试生物体。...

确定热水洗涤对病毒消毒效果的有效性

目前尚缺乏一种用于评估实验室环境中朊病毒污染常见区域及有效去污染方法的检测手段。本文所述方案为实施实验室朊病毒安全拭子检测提供了关键基础，且该方法可轻松调整，以满足不同实验室的具体需求。...

朊病毒安全实验室拭子检测

我们介绍一种使用96孔微孔板形成Candida...

一种基于96孔微孔板的真菌生物膜形成监测及抗真菌药物敏感性检测方法 白色念珠菌 生物膜

本文介绍了一种快速分离脑和脊髓组织中单个核细胞的高效方案，所获细胞可有效用于流式细胞术分析。...

使用Percoll梯度分离脑和脊髓单个核细胞

Virochip 是一种泛病毒微阵列，旨在基于保守序列同源性，同时检测所有已知病毒以及新病毒。本文演示如何运行 Virochip...

使用泛病毒微阵列检测技术（Virochip）对临床样本进行病毒病原体筛查

一种用于鉴定优先级细菌病原体的简单方法是使用基因工程改造的报告噬菌体。这些报告噬菌体对其特定宿主菌种具有专一性，能够迅速将生物发光信号转导至宿主细胞。本文描述了利用报告噬菌体检测Yersinia...

用于检测A类细菌病原体的“生物发光”报告噬菌体

了解实验室评估不同洗手方法去除微生物效果的方案，使用非致病性大肠杆菌和Phi6噬菌体作为替代病原体，通过定量分析比较肥皂、氯溶液和酒精洗手液的效果。

一种检测洗手去除新发传染病病原体效果的方法

探索更多视频