2017年8月19日
本视频文章详细演示了通过解剖从小鼠体内成功摘除胰腺以进行组织学分析和代谢谱检测所需的各项操作步骤。
本视频文章的主要目标是提供详细直观的操作指南,介绍小鼠胰腺的解剖过程。这些操作说明对于研究人类胰腺疾病小鼠模型,并需要通过解剖获取小鼠胰腺用于组织学分析或代谢谱检测的研究人员具有重要参考价值。本视频文章还提供了通过心脏穿刺法进行终末期采血的详细操作步骤。
图中显示的是术中操作台及其所需物品,包括一个带盖玻璃瓶、一个15 mL离心管、一把手术剪、一瓶70%乙醇挤压瓶、两块泡沫板、两把镊子、两支1 mL 21号注射器、两个50 mL离心管、一个离心管、一个冻存管、四个手术垫、十个固定针、一个消毒湿巾分配器和一个锐器盒。图中还展示了术后操作台及其所需物品。
这些物品包括一台分析天平、一个四升液氮杜瓦瓶、一个浅口宽口杜瓦瓶、一个可漂浮的微量离心管架、一把手术剪、两把镊子、五个冻存管以及一盒无菌擦拭巾。实施安乐死时,先将小鼠放入含有浸有数滴异氟烷的纱布垫的玻璃罐中,然后盖上盖子,直至小鼠失去意识,通常约需一分钟。随后将小鼠从玻璃罐中取出,并进行足部夹捏测试,以确认小鼠不再感到不适。
如果足部夹捏测试失败,应将小鼠放回玻璃罐中并盖上盖子,直至足部夹捏测试能够成功完成。将小鼠仰卧放置,用针固定其四肢于手术泡沫板上,并用70%乙醇润湿小鼠腹侧。用镊子夹住尿道口附近的毛发,并轻轻向上提起。
从尿道开口处开始,沿中线向上至下巴处,切开腹腔。在初始切口的起始点附近,抓住一侧的皮毛,向下并向后足方向做一斜向切口。以相同方式在对侧重复此操作。
找到心脏以进行终末心脏穿刺。操作时,用镊子夹住胸骨,切开膈肌,迅速向上剪开肋骨,移除剪开的肋骨部分,以暴露跳动的心脏。
找到心脏后,去除心包膜,并用注射器进行心脏末端穿刺。为获得最佳采血效果,应使用针筒活塞模拟心脏的泵血动作,避免抽吸过快。将血液排入离心管中,随后将注射器弃置于锐器容器中。
心脏穿刺完成后,通过切断与心脏相连的组织来实施安乐死。在小鼠左侧找到胃。胰腺呈弥散状的浅色组织,附着于胃和十二指肠,并沿小肠和大肠全程分布,且与脾脏相连。
使用镊子开始轻柔地将胰腺从胃和十二指肠上分离。继续从空肠和回肠段起,将胰腺从小肠上分离,最终至盲肠和大肠。在盲肠处,重新调整镊子位置,沿剩余的结肠继续向直肠方向分离胰腺。
此时,可方便地剪除从胃部至直肠前结肠区域的整段组织。找到胰腺及其相连的脾脏,将胰腺向小鼠右侧滑动。
切断胰腺与胸腔之间的剩余连接,以完全分离胰腺及其相连的脾脏。取出胰腺并铺平进行检查。如有需要,此时可移除其他器官。
提取后,将样本转移至术后区域。每个器官需称重,然后放入相应的冻存管中。记录任何观察到的异常情况。
将器官放入冻存管后,将其置于浮式离心管架中,然后放入装有液氮的杜瓦瓶内。速冻完成后,器官应于-80摄氏度长期保存。所有使用过的解剖工具均应使用消毒湿巾进行消毒处理。
应盖紧装有浸有异氟烷的手术垫的 Falcon 管。泡沫板上的手术垫应更换为新的手术垫。未采集的小鼠组织部分应根据机构的动物处理政策进行处置。
以下物品应按相应要求进行处理。一旦这些物品得到妥善保存,便可开展多种实验,包括但不限于荧光显微镜检查、苏木精和伊红组织学染色、免疫组织化学、质谱分析以及核磁共振波谱分析。由于胰腺是代谢活动和胰岛素生成的主要器官,该操作能够保留其生理特性。
通过分离胰腺,可对样本进行后续分析。该操作能够在相同时间范围内,对同一生物体内其他组织的相互作用进行比较和研究。
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本视频文章为研究胰腺疾病的科研人员提供了小鼠胰腺解剖的详细可视化操作指南。内容包括用于组织学分析和代谢谱检测的胰腺采集步骤,以及通过心脏穿刺进行终末期采血的方法。
准确解剖小鼠胰腺可为胰腺癌研究中的下游代谢谱分析和组织学分析提供可靠的组织样本采集。该操作流程的标准化通过确保样本完整性并减少临床前模型中的变异性,支持靶点验证和生物标志物的发现。该方法通过为疾病进展的机制性研究提供可重复的基础,提高了早期发现工作流程的预测可信度。
该解剖方法通过提供高质量的胰腺组织用于代谢谱分析和组织学分期,将发现过程整合为一体,直接支持先导物的鉴定和临床前验证阶段。