阻断外瓦萨血管灌注对腹主动脉瘤鼠模型的建立

该程序的总体目标是诱导主动脉组织缺氧，以启动大鼠腹主动脉瘤或 AAA 伴进行性主动脉扩张。这种方法可以帮助回答主动脉瘤研究期间关于腹主动脉瘤发展和破裂机制的关键问题。该技术的主要优点是大鼠模型之间的形态和病理特征与人腹主动脉瘤中的形态和病理特征相似。

我们第一次想到这种方法是在我们研究人类 AAA 的另一种可能性时。这种方法的视觉演示至关重要，因为仅通过精通文本的教学很难学习缺氧诱导手术。演示该程序的是我们的血管外科医生 Tatsuro Yata 和 Hirona Kugo，他们都是我们实验室的过去医生。

通过捏脚趾确认适当的镇静水平后，使用电动剃须刀剃掉 300 至 400 毫克大鼠的腹毛，然后对暴露的皮肤进行连续酒精和聚维酮碘溶液消毒。将大鼠仰卧放在手术台上，并在动物的眼睛上涂抹药膏。接下来，用剪刀做一个腹侧中线腹部切口，并使用无菌纱布和伤口牵开器将腹腔内容物填塞在腹腔内。

要将主动脉从血管周围组织分离，请使用镊子轻轻拾取并撕裂腹膜后，露出主动脉壁。然后，从左肾静脉到血管周围组织的分叉处，在腹膜后间隙内剥离肾下主动脉。使用 5-0 丝缝线结扎从腹主动脉分支的血管，以阻塞远离主动脉且不会使主动脉腔变窄的血液供应。

为了阻止主动脉血流，请将血管夹放置在肾动脉正下方和主动脉分叉处正上方。与在主动脉壁表面形成点状出血类似，将微型剪刀从靠近肾动脉分支的主动脉夹远端 5 毫米处插入，切开主动脉前壁，并使用 24 号留置针将聚氨酯导管浅插入切口。将装满水的 1 mL 注射器连接到聚氨酯上，并冲洗主动脉中剩余的血液。

接下来，将一根新的聚氨酯导管剪成 10 毫米长，并将该导管完全插入主动脉腔切口。重新定位导管的中点以匹配切口的位置，并使用 8-0单丝缝合，用中断缝合闭合切口。使用 5-0 丝缝线和聚氨酯导管用外科医生结结扎腹主动脉。

当导管固定后，取下主动脉分叉处和肾动脉下方的血管夹，以恢复顺行血流并确认存在粗大的主动脉搏动。取下纱布后，使用 4-0 聚丙烯缝合线将腹部切口分成两层紧紧闭合，以防止器官突出。然后，将局部利多卡因涂抹在腹部切口上，并将大鼠放在加热垫上并监测直至完全补偿。

术后，在超声图上观察扩大的主动脉的时间进程发展，根据标准方案测量从腹主动脉内缘到外缘的最大直径。手术后 28 天，用手术刀打开腹部，切开新的腹侧切口，用剪刀摘取动脉瘤。将收获的主动脉置于 10% 中性缓冲福尔马林中 24 至 48 小时。

主动脉包埋在石蜡中并获得主动脉组织切片后，根据标准方案，将固定的石蜡切片在蒸馏水中水合 10 分钟，然后在 Verhoeff 苏木精中孵育。生锈和腐蚀可以通过 Verhoeff 的苏木精和 van Gieson 的溶液实验室活动来识别。因此，这些组织染料的新鲜度和孵育时间对于存档和可选染色非常重要。

25 分钟后，用水洗涤 3 次 1 分钟，然后用区分溶液浸泡 10 至 30 次，冲洗切片。再次用水冲洗切片 3 次，并将样品置于 5% 硫代硫酸钠中 1 分钟。再次用水洗涤后，将样品浸入 van Gieson 溶液中 5 分钟。

接下来，在 30 秒的上升乙醇浸泡中脱水组织，然后用两次 5 分钟的二甲苯孵育清除。然后使用共振安装介质用适当尺寸的盖玻片覆盖切片。在这些图像中，显示了导管插入后 28 天的代表性腹主动脉瘤。

通过经腹超声检查测量主动脉的上端和下端显示导管放置后立即无扩张的正常直径，在放置后约 14 天增加到最大尺寸，并且保持不变或略微增加，直到实验期结束。第 28 天动脉瘤的组织病理学分析显示，与第 0 天观察到的相比，弹性纤维明显退化。一旦掌握，如果执行得当，这项技术可以在大约一个小时内完成。

按照此程序，可以执行其他方法（如体外分析）来回答有关各个系列功能的其他问题。开发后，这项技术为腹主动脉瘤领域的研究人员在特定患者人群中探索疾病铺平了道路。看完这个视频，你应该对如何诱导主动脉组织缺氧对大鼠腹主动脉瘤伴进行性主动脉扩张的启动有一个很好的了解。

不要忘记，使用手术器械可能非常危险，并且在执行此程序时应始终采取预防措施，以防止受伤和感染。