July 24th, 2017
我们开发了一种成功去除,处理,切片和染色的方法,用于组织病理学评估,原始固定在载玻片上的乳腺组织作为整体。这种方法可以促进生殖发育试验指南研究中乳腺整体的收集和评估。
该程序的总体目标是从整个镶嵌的小鼠乳腺组织中创建高质量的染色切片,以便在微观水平上识别病变。这种方法可以帮助回答涉及乳腺评估的关键问题,例如在乳腺整个土墩中粗略识别的病变类型的组织病理学鉴定。这种技术的主要优点是,在使用整个镶嵌组织时,它增加了识别乳腺内可能存在的病变的机会。
当我们将来自同一动物的福尔马林拟合 H 和 E 染色对侧腺体的整个安装表型与组织病理学报告进行比较时,我们首先想到了这种方法。我们发现诊断存在差异,整个支架的病变更多。这种方法的视觉演示很重要,因为整个安装移除和嵌入步骤对于该程序的成功至关重要。
腺体很脆弱,因为它薄而易碎。根据文本方案制备全镶样内存样品并分析组织异常后,将载玻片浸入装满二甲苯的玻璃染色罐中,取出盖玻片和封固剂。孵育过夜或更长时间。
将玻片转移到新鲜的二甲苯中,并将样品浸泡 6 小时。然后将样品再次转移到新鲜的二甲苯中并浸泡过夜。接下来,用戴手套的手握住载玻片,用一对镊子小心地将盖玻片切成一块。
根据封固剂的厚度和自整个封片盖玻片以来的时间,取下盖玻片的难易程度可能会有所不同。因此,载玻片必须保持在二甲苯中,直到盖玻片容易释放。取下盖玻片后,使用锋利的一次性剃须刀片沿载玻片向下滑动,以去除样品。
然后将内存垫快速浸入填充二甲苯的玻璃培养皿中,以确保组织不会风干。用剃须刀将较大的组织切成两半。然后,为了尽量减少组织损伤,使用钝头锯齿状镊子抓住脂肪垫的边缘,并将两半正面朝上放入两个单独的标记盒中,以适应组织大小。
将包埋盒放入二甲苯容器中最多两小时,然后再放入组织脱水机中。然后手动将最大数量的包埋盒装入组织脱水机中。在开始之前,对洗床进行组织处理编程。
要自动执行该程序,请选择工作站、温度和真空开关。自动处理器将包埋盒在 37 摄氏度的二甲苯中浸泡 30 分钟,然后在相同条件下再次浸泡在新鲜的二甲苯中。然后,自动处理机从二甲苯溶液中取出包埋盒,并将组织转移到处理机内的腔室中,该腔室包含一对一的二甲苯与熔融石蜡混合物,在 60 摄氏度下放置 30 分钟。
完成所有步骤后,选择 确定 or 开始 继续。将包埋盒放入 58 摄氏度石蜡浴的储水箱中,直到准备好将它们放入模具中。取下盒盖以确定组织的最佳模具尺寸。
从喷口向模具中加入 3 到 4 毫米的熔融石蜡,然后将组织定向到熔融石蜡中,使与载玻片底部和盒底部相邻的乳腺整个安装表面在模具中朝上。将模具转移到冷却板上,并根据需要快速调整组织,使其与模具底部平行。使用镊子,将标记的盒牢固地放在模具顶部。
以连续运动将额外的熔融石蜡分配到模具中,以覆盖整个包埋盒。将模具从温板移动到冷板上,以促进固定在为切片选择的确切位置。当石蜡块完全凝固时,将石蜡块与模具分离。
并将其储存在室温下,直到准备好切片。切片前,将石蜡块在零下 20 摄氏度下孵育 1 小时。然后打开装有新鲜蒸馏水的水浴准备切片机,并将温度调节至 42 至 45 摄氏度。
接下来,将新的低轮廓刀片放在切片机上,并将其设置为 4 微米。将块插入切片机中,使蜡朝向刀片并与垂直平面对齐。然后用冷水润湿一段纱布垫,并将其放在块上几分钟。
通过顺时针运动转动大轮子与路线高级轮子一起切割块,直到获得块的全面或代表性截面。然后用手将组织切片转移到温水浴中,然后使用干净的载玻片将其取出。将玻片放在干燥支架上以去除多余的水分。
然后将组织切片在 37 摄氏度下储存过夜。从 37 摄氏度培养箱中取出载玻片后,将它们储存在室温下,直到准备好染色。对于自动染色,从主菜单上的染色选项中选择 H 和 E 对载玻片进行染色。
脱蜡、染色和脱水都在自动染色机上完成。使用安装介质和盖玻片安装切片。为了确定乳腺组织的理想厚度,准备了 4 微米和 6 微米切片。
四个微米切片产生了最佳结果,其中上皮和基质区域以及相应的细胞类型很容易区分。这些数字代表了正常腺体的组织学切片。两个腺体都显示出导管结构,周围环绕着强大而均匀的富含脂肪细胞的群体。
每个导管由单层简单的立方体上皮细胞衬垫,并由第二层基底细胞维持。对侧整个支架包含一个不透明性增加的区域,涉及记忆腺导管。然而,目前尚不清楚这种不透明性是否来自增生性、炎症或肿瘤性改变。
此处显示了对侧整个安装。这些切片被诊断为血管周围炎症,因为乳腺切片中大血管周围的淋巴细胞数量增加。在这些样本中,乳腺小叶结构得以保持,但因小叶肺泡增生的正常肺泡和导管的数量和大小增加而扩大。
增大的小叶包含更多的肺泡和导管,这些肺泡和导管内衬有分化良好、通常为空泡的上皮细胞,这些细胞形成含有蛋白质液体的管腔。在尝试此程序时,请务必记住,二甲苯使组织很脆弱,很容易破裂,从而破坏您的样品。在尝试此方法之前,建议使用平板扫描仪拍摄整个支架的高质量照片。
这是毒理病理学领域朝着化学筛选的整片评估方向发展的机会。因此,当在该水平上发现病变时,现在可以生成高质量的切片用于组织病理学诊断。看完这个视频后,您应该对如何移除、嵌入和切片整个乳房支架以进行病变识别有一个很好的了解。
不要忘记,在使用二甲苯时,应佩戴防护措施,例如实验室外套和手套,并且应在引擎盖下进行工作。
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本研究提出了一种新颖的方法,用于去除、处理、切片和染色原本固定在载玻片上的整体乳腺组织。该技术旨在增强生殖和发育研究中乳腺的组织病理学评估。
Accurate lesion identification in mammary gland studies is critical for toxicological and pharmaceutical R&D, especially when evaluating the effects of environmental exposures or genetic modifications. This protocol enables conversion of whole mount mammary tissues into high-quality H&E sections, reducing diagnostic ambiguity and supporting robust histopathological assessment. Integrating this method strengthens predictive confidence at key discovery and preclinical inflection points, minimizing false negatives in lesion detection.
This method bridges gross morphological screening and detailed histopathological analysis, supporting workflows from early discovery through preclinical research.